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依赖于核酸序列恒温扩增技术快速检测副溶血性弧菌方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
为建立副溶血性弧菌的快速检测方法,本研究采用依赖于核酸序列恒温扩增(NASBA)技术,以副溶血性弧菌的tlh基因为扩增的靶基因设计特异性引物和探针,建立可快速扩增副溶血性弧菌的NASBA方法.特异性和灵敏度试验结果表明:该NASBA方法对副溶血性弧菌的最小检出量为5.1×102 cfu/mL,高于普通PCR方法,而且与其他种属的菌无任何交叉反应.此外,本研究将副溶血弧菌扩增产物采用通用型核酸扩增物快速检测板进行检测,实现了特异性强的快速副溶血弧菌的检测.该方法对仪器要求低,具有良好的应用前景. 相似文献
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用硝酸纤维素膜(NCM)印迹法测定日本对虾(Penaeusjaponicus)血淋巴碱性磷酸酶(ALP)的相对活性,以标准ALP梯度稀释液为参照,比较NCM印迹法与ALP测定试剂盒法对标准ALP梯度液的测定结果。数据回归分析显示,NCM印迹法所得结果同标准ALP梯度稀释液活性的回归关系极显著(P<0.01);用NCM印迹法测定ALP相对活性的灵敏度为试剂盒的100倍。分别用NCM印迹法与ALP测定试剂盒测定对虾血淋巴的ALP相对活性,测得结果呈强直线相关性(P<0.01),说明用NCM印迹法测定对虾血淋巴ALP相对活性具可行性。 相似文献
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应用原位杂交技术检测感染中国对虾和克氏原鳌虾体内的白斑综合征病毒 总被引:3,自引:0,他引:3
用PCR制备地高辛(DIG)标记探针,采用原位杂交技术检测感染中国对虾和克氏原鳌虾体内的白斑综合征病毒(WSSV)。患病严重的淑死中国对虾的角化上皮、胃上皮、触角腺、肝胰腺上皮、疏松结缔组织、肌肉、造血组织、鳃、卵巢之结缔组织细胞和滤泡细胞、精巢之结缔组织细胞原位杂交呈阳性;人工注射感染克氏原鳌虾的角化上皮、胃上皮、肝胰腺上皮、疏松结缔组织、肌肉、造血组织、鳃原位杂交检测呈阳性。PCR制备DIG标记探针与健康中国对虾和克氏原鳌虾无交叉反应,相应样品未加入探针杂交和未加入DIG抗体杂交均为阴性反应。 相似文献
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人工感染白斑综合征病毒的克氏原螯虾的病理学试验 总被引:1,自引:0,他引:1
用从发病中国虾体内提取的白斑综合征病毒(WSSV)人工感染克氏原螯虾,被感染克氏原螯虾均发病死亡。光学显微镜下观察病虾的组织切片,发现其胃、鳃等的上皮组织以及结缔组织的细胞核明显肿大和嗜伊红染色;电镜观察超薄组织切片,发现病螯虾的胃部、鳃部组织的细胞核内有大量的杆状病毒样病毒粒子,该病毒粒子有囊膜;斑点杂交检测发病螯虾,阳性率为100%;人工感染克氏原螯虾的角化上皮、胃上皮、肝胰腺上皮、疏松结缔组织、肌肉、造血组织和鳃、经原位杂交检测呈阳性。 相似文献
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对患病死亡斑海豹 ( Phoca vituliuslinnatus)剖检发现心包膜、胃黏膜及肠壁有不同程度的充血、出血 ;肝脏淤血、肿大 ;肺膨大、充血。病理组织学观察显示 ,心肌纤维断裂 ,有部分颗粒变性 ;胃黏膜部分脱落 ;肺泡壁由于毛细血管充血以及浆液性炎性浸润而显著增厚 ,部分细支气管和肺泡腔中渗有浆液以及脱落的细支气管上皮和肺泡壁上皮细胞 ;肠黏膜严重脱落 ,部分肠腺细胞崩解坏死 ,肠壁平滑肌有严重出血及色素沉着。结合临床表现认为该斑海豹因肠炎导致全身感染而死亡 ,对其发病过程进行了探讨 相似文献
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为建立单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法,本研究以Lm的iap基因为目的片段设计特异性引物,建立了可在65℃恒温扩增快速(90 min)检测Lm的HDA检测方法,分别对反应体系中的MgAc2、Bst聚合酶、UvrD解旋酶、dNTPs以及引物等的浓度进行优化,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明,所建立起的检测法最低检测限为7.8×103 cfu/mL,灵敏度与普通PCR方法相当。Lm的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,具有良好的应用前景。 相似文献