miR-15a对猪卵泡颗粒细胞BDNF基因表达的影响

为探索miR-15a对猪卵泡发育的影响,选取健康大卵泡、中等卵泡和闭锁卵泡,研究不同卵泡中miR-15a的相对表达量以及其是否对卵巢颗粒细胞中有BDNF表达具有调节作用。分别抽取直径3-5 mm、大于5 mm健康卵泡和3-5 mm闭锁猪卵泡,采用q PCR检测发现闭锁卵泡中miR-15a表达显著升高。免疫组化结果显示中等健康卵泡颗粒细胞上BDNF、Tr KB均有表达,而在靠近卵泡腔的凋亡颗粒细胞BDNF免疫阳性反应较弱。分离培养猪卵巢颗粒细胞,过表达miR-15a能显著上调BDNF基因表达水平,Bcl-2基因表达有下降趋势但差异不显著;抑制miR-15a表达能显著抑制BDNF、bcl-2基因表达水平。Western-Blot结果发现,过表达miR-15a显著下调BDNF蛋白水平,而抑制miR-15a表达则能显著上调BDNF蛋白水平。实验结果显示miR-15a可能经由其靶基因BDNF参与猪卵泡的发育和闭锁。     

胚胎及新生期蛋鸡和肉鸡垂体生长激素基因表达的比较研究

本文采用Northern杂交分析法研究了14胚龄、18胚龄、1日龄、5日龄及10日龄肉鸡和蛋鸡垂体生长激素的基因表达，同时采用放射免疫分析法（RIA）测定了垂体内生长激素的含量。结果表明：14胚龄时在肉鸡和蛋鸡垂体总RNA中均未出生长激素mRNA(GH mRNA)。从18胚龄开始可检测出一条0.8kb的GHmRNA，并且垂体GHmRNA水平的发育性变化在品种间呈现不同的规律：蛋鸡从18胚龄到10日龄垂体GHmRNA水平不断升高，日龄间差异显著（P＜0.05）。肉鸡从18胚龄到出壳1日龄，GHmRNA水平有较大幅度的升高，但从1日龄至10日龄维持在1日龄时的水平。18胚龄肉鸡垂体GH mRNA水平显著高于蛋鸡（P＜0.05），并在1日龄和5日龄均维持在较高水平，与生长速度呈正相关；而10日龄时垂体HGmRNA水平的品种差异发生逆转，蛋鸡GHmRNA水平反而高于肉鸡。垂体HG含量的发育性变化趋势与垂体HGmRNA水平相一致，10日龄时蛋鸡垂体GH含量显著高于肉鸡（P＜0.05），与生长速度呈相反的趋。     

神经介素B研究进展

神经介素B(neuromedine B,NMB)是1983年从猪脊髓提纯分离的一种神经肽,含10个氨基酸,大分子肽含32个氨基酸,属于蛙肽家族,为铃蟾肽相关肽。NMB通过其受体发挥生物学作用,铃蟾肽受体家族有3～4种(BB1、BB2、BRS-3、BB4或BRS-3.5),NMB优先受体是BB1(NBM-R),与其他受体的亲和力较低。NMB及其受体在中枢神经系统和外周组织广泛分布,具有多种生物学作用,包括刺激平滑肌收缩,改变胃肠道的运动性,抑制垂体促甲状腺素的释放;参与摄食和体温调节,介导应激和恐惧反应,影响行为和记忆,促进肿瘤生长等。     

Preproorexin和OX1R mRNA在苏钟猪发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴中的表达

选取苏钟种母猪16头,在第2个发情期后,按发情前期、发情期、发情后期和间情期随机分成4组。用RT-PCR检测苏钟猪发情周期不同时期preproorexin和orexin 1受体（OX1R）mRNA在下丘脑-垂体-卵巢轴中的表达。结果显示：发情周期不同时期preproorexin mRNA在下丘脑、垂体和卵巢中变化趋势一致,preproorexin mRNA在猪的发情前期表达最高,随后其表达量开始下降,在发情后期其表达最少,在间情期时又开始上升。下丘脑中OX1R mRNA在发情前期开始上升,在发情后期达到最高,随后在间情期又开始下降。垂体和卵巢中OX1R mRNA的变化与下丘脑中OX1R mRNA的变化趋势一致。上述结果表明：orexin可能参与调控动物生殖过程。     

鸡喉内肌运动神经元在延髓内的分布——CB-HRP法研究

本文用CB-HRP法研究了鸡喉内肌运动神经元在脑干内的分布,结果如下:将CB-HRP注入鸡喉内肌后,标记细胞位于同侧中间带和疑核,在疑核内的多位于腹内侧。注射前切断迷走舌咽交通支后标记细胞消失,这表明,发自疑核的喉内肌运动神经元的轴突出脑后加入迷走神经,尔后经迷走舌咽交通支至舌咽神经,随后者分布于喉内肌。     

妊娠期奶山羊下丘脑GnRH和OT免疫反应双标记细胞的分布

为了探讨促性腺激素释放激素（GnRH）和催产素（OT）是否在下丘脑细胞中共存,采用免疫组织化学双标记法对妊娠期奶山羊下丘脑中GnRH与OT的分布进行了检测。结果显示：室旁核、视上核、视前交叉上核、弓状核、下丘脑外侧区、乳头体内侧核、乳头体后核等核团（区）有GnRH和OT免疫反应双标记细胞,在妊娠的不同时期,GnRH和OT免疫反应双标记细胞数量有显著差异。这些结果为GnRH与OT相互调节提供了形态学证据。     

Orexin B在猪下丘脑-垂体-性腺轴的分布及对生殖调节的体外研究

本试验采用免疫组化和放射免疫测定的方法对Orexin B在1月龄健康苏钟猪和和性成熟青年母猪下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴的分布定位及其在HPG轴各级水平的直接分子生物学作用进行了研究。结果显示,Orexin B在下丘脑、垂体和性腺均有分布。在下丘脑的分布比较广泛,其中以穹隆周区、外侧区、背内侧核和后区的Orexin B免疫阳性神经元分布最为密集,而下丘脑前区、视前区和视交叉上核的Orexin B免疫阳性神经元分布较少。在垂体Orexin B主要分布在腺垂体的远侧部和中间部的内分泌细胞内。在性腺器官,Orexin B主要分布在初级卵泡、次级卵泡的颗粒细胞以及卵母细胞的细胞质和睾丸、附睾间质细胞内;用不同剂量的Orexin B处理体外培养的下丘脑脑片、腺垂体细胞和卵巢颗粒细胞,其中1000nmol·L-1剂量组Orexin B能极显著的刺激GnRH的释放(P0.01),100和1000nmol·L-1剂量组能显著(P0.05)刺激LH和E2的释放。结果表明Orexin B在HPG轴各级水平直接参与猪生殖活动的调节。     

对母猪生殖调控的研究

【目的】研究促性腺激素抑制激素（GnIH）mRNA在母猪组织器官中的分布,不同剂量GnIH对母猪卵巢类固醇激素合成和细胞增殖相关蛋白表达的影响,及GPR147与GnRH的形态学关系。从分子、细胞水平和形态学角度,探讨GnIH在下丘脑-垂体-性腺轴对母猪生殖调控的作用机制,丰富神经内分泌学的内容。【方法】以30日龄健康仔母猪为研究对象,采用半定量RT-PCR方法研究GnIH mRNA在母猪24个组织中的分布定位。采集青年母猪卵巢样品,分离卵巢颗粒细胞,研究不同剂量GnIH（10^-6、10^-8、10^-10 和 10^-12 mol·L^-1）对体外培养的母猪卵巢颗粒细胞类固醇激素（雌二醇,孕酮）的合成、细胞增殖相关蛋白（cyclin B1,PCNA）表达的影响。取30日龄健康仔母猪下丘脑,制作脑片,采用荧光双标记,激光共聚焦显微镜观察拍照分析GPR147与GnRH的形态学关系。【结果】GnIH mRNA主要在母猪的中枢神经系统中表达,尤其是在间脑表达含量最高。在外周组织,如子宫、卵巢、垂体中也有一定量表达。不同剂量的GnIH作用于体外培养的卵巢颗粒细胞,其中10^-6和10^-10 mol·L^-1 GnIH能极显著地抑制雌二醇的分泌（P＜0.01）, 但不同剂量的GnIH对孕酮分泌的影响并不显著。GnIH能极显著地抑制卵巢增殖相关蛋白PCNA和cyclin B1的表达（P＜0.01）。此外,激光共聚焦结果显示GPR147与GnRH在下丘脑室旁核及视前区存在密切联系。【结论】GnIH可在下丘脑水平通过其受体直接作用于GnRH神经元,影响GnRH的合成和分泌,进而在中枢水平调控母猪的生殖活动。在外周生殖器官中,GnIH可通过影响卵巢激素的分泌和细胞增殖相关蛋白的表达参与母猪的生殖调控。     

兔神经肽S及其受体基因的克隆、组织表达及热应激对其表达的影响

 【目的】研究神经肽S(NPS)及其受体（NPSR）mRNA在兔全身各组织的表达情况,以及热应激对兔下丘脑、垂体和肾上腺轴NPS及NPSR mRNA表达的影响。【方法】利用基因克隆方法克隆出兔神经肽S及其受体的cDNA序列,以GAPDH为内参基因,采用相对定量RT-PCR方法检测NPS及NPSR mRNA在兔体内各组织中的表达情况以及热应激对NPS及NPSR mRNA在下丘脑-垂体-肾上腺轴表达的影响,【结果】克隆出兔NPS及其NPSR cDNA序列,兔NPS cDNA全序列为270 bp,NPSR的部分序列为847 bp,GenBank登录号分别为EU978456和FJ713102;经DNAStar软件分析,不同物种之间NPS及其受体基因序列的同源性较高,进化树分析显示NPS与大鼠和小鼠亲缘性最近,符合物种之间的进化关系。NPS及其受体在兔各组织广泛分布,主要集中在中枢神经系统、甲状腺、唾液腺和乳腺。持续热应激处理后,下丘脑和肾上腺中NPS mRNA的表达均为先升高后降至对照组水平,且分别在热应激1 h和0.5 h时表达丰度达到最高,与对照组差异极显著（P＜0.01）;垂体中试验组NPS mRNA均呈下降趋势,与对照组差异极显著（P＜0.01）;NPSR与NPS mRNA在下丘脑、垂体和肾上腺中的表达模式相似。【结论】兔NPS及其受体基因在进化上是保守的;NPS及其受体在兔体内广泛表达,具有组织特异性;热应激时NPS及其受体mRNA在HPA轴上的表达发生了变化。     

鸡颈皮神经的感觉神经元和交感节后神经元—HRP法研究

此项研究用了体重1.0～2.5kg的成年母鸡18只,以追寻鸡颈皮神经的感觉神经元和交感节后神经元。将C_6～C_(11)皮神经断端浸渍于20％HRP溶液中2～3天以引入酶。取相应的颈交感干神经节和脊神经节及其前后相邻的神经节,制成厚50μm的连续冰冻切片。TMB反应,明视野光镜观察。标记的交感节后神经元胞体出现于与酶引入皮神经相连的交感干神经节。少数出现于相邻的后一个交感神经节。标记的脊神经感觉神经元胞体只出现于与酶引入皮神经相连的脊神经节。