禽流感抗体胶体金半定量检测方法的建立

针对目前禽流感抗体主要采用的HI检测方法操作步骤繁琐，耗时较长且必须在实验室内进行判定的缺陷，为了提高检测效率和通关速度，借助胶体金半定量检测技术，以禽流感HI抗体滴度2^4为临界值，研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡。首先复苏了含A／Chicken／Hongkong／SZ-HI／1997（H5N1）病毒株HA基因重组质粒pETHA的阳性菌，IPTG诱导表达4h后，SDS—PAGE电泳对HA重组蛋白进行了确证。以纯化的HA重组蛋白和灭活的禽流感病毒为主要材料，采用夹心法原理研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡，确定了检测卡的最佳组合反应模式、最佳上样量、最佳反应时间、最适的胶体金颗粒、最佳硝酸纤维素膜和吸水垫。所建立的禽流感抗体胶体金半定量检测卡特异性强，与其他家禽抗原阳性标准血清交叉反应小。检测卡的检测结果与HI检测结果基本一致，检测HI抗体滴度为2^4鸡血清时结果符合率达94％。     

养生态鸡 敲致富门

2013年8月29日,新疆生产建设兵团第五师八十九团市场上,当地群众在购买生态鸡。该团养殖户充分依托丰富的经济林资源,发展生态鸡养殖,拓宽增收致富路。养殖者陈清海在果园里养殖的2000只生态鸡,售价比圈养的肉鸡高出1倍,年收入超过6万元。发展生态养鸡正成为当地农户多元增收的新途径。     

H7亚型禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

H7亚型禽流感病毒致病性强、危害性大,是进出口家禽及禽类产品的主要检疫对象。为了加强对H7亚型禽流感病毒的检测,建立新的快速检测方法。通过对GenBank已报道的H7亚型禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了两套分别针对H7N2亚型和H7Nx亚型的特异性引物和用FAM标记的Taq Man MGB核酸探针,建立了H7亚型禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR方法(Real-time RT-PCR)。该方法特异性好,不存在假阴性和假阳性的现象;敏感性高,对禽流感病毒H7亚型标准HI抗原检测的敏感性达到10-5,能够满足口岸禽流感病毒快速、准确、有效的检疫需求。     

蓝舌病病毒单克隆抗体的制备与生物学特性的鉴定

用纯化的蓝舌病病毒(BTV)免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA方法筛选,有限稀释法克隆,获得2株稳定分泌抗BTV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1F5和4E5).其细胞培养上清ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水ELISA效价分别为1:512 000和1:128 000.亚型鉴定表明,1F5和4E5分别为IgGl和IgG2a.ELISA结果显示,2株单克隆抗体仅与BTV反应,不与其他相关病毒反应,表明2株单克隆抗体特异性良好.2株单克隆抗体1F5和4E5的相对亲和力指数分别为5.14×106mol/L和6.71×106mol/L.这2株单克隆抗体的获得为建立BTV免疫学检测方法奠定了基础.     

政府与非营利组织合作供给公共服务的困境研究

随着经济社会的快速发展,公共需求的多样性和异质性日益增加,单靠政府不再能够应对复杂的社会问题,政府不再是公共服务的天然垄断者。改革开放的快速发展,当前我国非营利组织在数量、活动和影响方面达到了前所未有的高度。要充分发挥非营利组织的作用,推动政府与非营利组织进行合作,但合作的过程中仍然存在一些问题,基于此,从政府需要转变观念、厘清双方责任以及建立合作的规范化流程等方面提出一些对策建议。     

非洲猪瘟病毒p72蛋白的真核表达及反应原性鉴定

将p72基因克隆到载体pFast Bac/NT-TOPO上,转化大肠埃希菌DH5α。将获得的重组载体pFastBac/NT-TOPO-p72,转化大肠埃希菌DH10Bac,获得重组杆状病毒质粒bacmid-p72。通过脂质体介导,将bacmid-p72转染sf9细胞,获得重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染正常生长的sf9细胞,72h后收集细胞,超声破碎后取上清进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,重组蛋白大小约78ku,且重组蛋白可以与非洲猪瘟标准阳性血清反应。说明表达的重组蛋白为可溶性的,并具有良好的反应原性。     

养殖业成为农户增收“绿色银行”

8月27日,新疆生产建设兵团第五师八十九团的养殖户带着自家饲养的羊只在市场上销售。近年来,该团着重把养殖业作为多元增收突破口,引导职工发展生产周期较短的牛、羊饲养业,并在资金、技术上予以扶持,加快推进全团养殖产业的发展。目前,该团养羊规模2万余只,养殖业成了当地职工增收致富的"绿色银行",数百养殖户走上了发家致富路。     

小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达和免疫学活性鉴定

研究小反刍兽疫病毒（Peste des petits ruminants virus,PPRV）H 蛋白生物学活性,为建立PPRV 抗体检测方法提供材料。根据 GenBank 已发表的 PPRV H 蛋白质序列,设计上、下游引物,以 PPRV核酸为模板进行 PCR 扩增,扩增产物克隆至 pET52／LIC 载体中,构建了 pET52／LIC-PPRV H 表达载体。将 pET52／LIC-PPRV H 重组质粒转化大肠埃希菌 BL21（DE3）进行融合表达,经 SDS-PAGE 电泳分析,可见 PPRV H 蛋白成功得到了表达,融合蛋白的分子质量约为75 ku,Western blot 分析表明所表达的重组蛋白可与 PPRV 阳性血清发生特异性反应,说明表达的 PPRV H 蛋白可以作为建立 PPRV 抗体检测的蛋白。     

口蹄疫病毒抗原胶体金试纸条的研究

利用单克隆抗体技术制备抗口蹄疫病毒的单克隆抗体,特异性试验表明其只与O、A、Asia 1型3种血清型FMDV抗原结合。进而采用胶体金标记技术,以胶体金标记的抗口蹄疫病毒单克隆抗体、多克隆血清抗体和葡萄球菌A蛋白为主要材料,研制口蹄疫快速检测试纸条。该试纸条检测O、A、Asia 1型3种血清型灭活口蹄疫病毒均为阳性,检测水疱性口炎病毒、猪水疱病病毒、蓝舌病病毒、猪蓝耳病病毒4种灭活抗原及小反刍兽疫病毒疫苗株均为阴性,试验结果与口蹄疫实时荧光定量RT-PCR方法的完全一致,表明其具有良好的特异性。敏感性试验结果是,试纸条的检测极限为1∶160稀释的样品,其敏感性相当于实时荧光定量RT-PCR方法的1/64。由于试纸条具有操作方便、检测快速等优点,因此该试纸条可以用于大量临床样品的快速检测和现场检测。     

鸡病毒性关节炎实时荧光RT-PCR检测方法的建立

本文旨在建立实时荧光RT-PCR方法检测鸡病毒性关节炎病原,针对特异性的禽呼肠孤病毒S1基因设计了1对引物及探针,经优化反应体系,确定引物和探针的最优浓度配比,建立了鸡病毒性关节炎实时荧光RT-PCR检测方法。结果显示:该方法灵敏度高、特异性强、检测时间短,可应用于鸡病毒性关节炎的普查监测和检验检疫。