MDV CVI988／Rispens弱毒株VP22基因克隆和序列分析

血清Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV-1)的UL49h基因编码病毒被膜蛋白VP22在病毒的复制和传播过程中具有非常重要的作用。根据已发表的MDV-1 GA株的序列，从CVI988／Rispens弱毒株感染的鸭胚成纤维细胞中扩增VP22基因片段，结果获得大小为732bp的PCR产物。将PCR产物克隆T载体并测序分析，结果发现，与经典强毒GA株相比，弱毒株CVI988的VP22存在3个定点突变和一个缺失性突变。缺失的位点亲水性强，并位于VP22主要的抗原决定簇区。结果证明强毒株与弱毒株的VP22存在明显差异，为利用CVI988 VP22的蛋白传导域传导目的蛋白奠定了理论基础。     

鸭肝炎病毒FC64株的全基因组序列测定与分析

鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒(DHV)引起的一种鸭的重要传染病,弱毒苗可有效预防该病的发生.从临床上分离获得一株DHV强毒株,经SPF鸡胚传64代后,培育成为弱毒株,命名为FC64.为了对该弱毒疫苗进行遗传背景分析,测定了该毒株的全基因组序列,经分析表明,FC64属于血清1型DHV弱毒株,基因组长度为7 692 bp(未...     

鸡毒支原体磷酸酶PrpC活性检测

HPr激酶/磷酸酶(PrkC/PrpC)系统在细菌和支原体中高度保守,不仅参与糖酵解酶类的磷酸化/去磷酸化,也与毒力、生物被膜等生命活动相关。克隆并突变获得编码鸡毒支原体磷酸酶PrpC的ptc1基因,经原核表达纯化后,利用底物PNPP体外检测其酶活性,并对影响该酶活性的pH、金属离子、温度等影响因子进行分析。结果表明,Ptc1蛋白具有磷酸酶活性,Mn2+为该酶辅因子,最适离子浓度为2mol/L,最适pH为8.5,最适温度为37℃。相同浓度的Li+、Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Ba2+、Al 3+、Hg2+等金属离子均对表达产物具有不同程度的抑制活性。初步建立了PrpC功能检测体系,为进一步深入研究PrkC/PrpC调节系统奠定基础。     

非洲猪瘟病毒pS273R蛋白水解酶单克隆抗体制备

本研究旨在制备非洲猪瘟病毒(ASFV)S273R蛋白的特异性单克隆抗体.本研究以原核表达的非洲猪瘟病毒重组S273R蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞.结果显示:基于纯化的S273R蛋白建立的间接ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选和亚克隆,获得了 4株可稳定分泌抗ASFV S273R...     

犬猫感染分枝杆菌的分子流行病学调查

从上海市不同区县采集352份犬猫鼻液、痰液、尿液及宠物饲料样品进行检测,以16s rRNA、IS6110、Rv3878、IS1081、ESAT-6和CFP-10等为目的基因设计引物,结果显示:非健康犬猫样品DNA中,ESAT-6和CFP-10基因检出率分别为43%和38.6%,而致病性分枝杆菌特异的引物Rv3878、IS6110和IS1081基因不能被检出;而在健康犬猫样品DNA中,所有基因的检出率均很低。本研究提示:犬猫可能携带有非结核分枝杆菌,并且患病的犬猫被非结核分枝杆菌污染的几率较健康犬猫更大。     

ClassI新城疫病毒强毒株融合蛋白的表达时相分析

根据ClassI新城疫病毒分离株9a5b编码序列,设计特异性引物扩增融合蛋白（F）基因截短片段（199～1500nt）,利用原核表达获得重组蛋白,切胶免疫Balb／c小鼠,制备特异性多抗血清,利用制得的血清进行F蛋白表达时相分析。结果表明：NDV9a5b病毒按5M．0．1（multiplicityofinfection,多重感染复数）感染量接种DF1单层细胞,经IFA检测,在感染6h时,F蛋白开始出现,主要分布于细胞浆内;12～16h胞浆申的F蛋白含量逐渐增多,形成包涵体,开始在细胞膜上分布;当病毒感染24h后,F蛋白在细胞膜上形成明显的膜周染色;至感染36h后,出现多个细胞融合的包涵体,细胞已基本崩解。此时,F蛋白也散在分布于包涵体中。这为深入开展F蛋白与该病毒的毒力演化机制研究工作奠定了基础。     

非洲猪瘟病毒多基因家族成员MGF360-12L RPA检测方法的建立

为建立一种简便、快速的针对非洲猪瘟病毒(ASFV)多基因家族成员MGF360-12L的分子检测方法,基于MGF360-12L基因序列,设计并合成引物,建立重组酶聚合酶扩增(RPA)等温检测方法。结果表明,于35℃恒温反应30 min,即可实现对目的片段的稳定扩增;以含有MGF360-12L基因的重组质粒为模板,RPA反应的检测限达到10~3个拷贝,同普通PCR方法检测限一致;此外,该RPA方法仅特异性扩增非洲猪瘟病毒MGF360-12L基因,对PEDV、FMDV、CSFV、PRRSV、PRV 和 PCV-2基因组cDNA或DNA没有扩增。本研究建立的RPA方法操作简单、反应快速、检测成本低,能够为ASFV相关基因缺失毒株的鉴别诊断提供一定技术支持。     

商品肉鸡胃肠道完整性的挑战

鸡的胃肠道早期发育得很不完善，若饲养管理不当，日后很多问题会发生。如果采取综合防制措施，损失将会大大减少。     

鸡败血支原体pMGA多基因家族及其免疫逃逸机制的研究进展

pMGA多基因家族主要编码一类黏附素/血凝素蛋白,存在于鸡败血支原体的细胞表面,其主要功能是促进支原体黏附到宿主细胞上.近年来的相关研究发现,编码pMGA的基因数量从32～70不等,主要在转录水平上通过(GAA)n基序的数量改变引发pMGA基因的选择性转录,造成pMGA蛋白的抗原发生变异,从而干扰宿主正常免疫功能的发挥,使支原体对宿主产生严重的免疫逃逸.其中,(GAA)n基序已被证实在pMGA基因表达调控中起重要作用.这一三联体重复基序数目的多少直接影响到pMGA基因的ON/OFF转录.本文通过对鸡败血支原体pMGA多基因家族分子生物学研究进展进行浅要综述,以提出pMGA基因可能的转录调控机制.这对研究鸡败血支原体的分子致病机理及其免疫逃逸机制大有裨益.     

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1的原核表达与免疫学检测

本研究采用原核表达载体pCold-HF在大肠杆菌中表达I型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus type Ⅰ,DHV-Ⅰ）弱毒株FC64株的VP1蛋白,经超声波裂解结果显示：VP1融合蛋白呈现可溶性表达。利用His-bindResin试剂盒纯化该产物,作为免疫原免疫小鼠,制备特异性抗体,进行免疫学检测。结果表明：该抗体与原核表达产物、DHV感染的SPF尿囊液总蛋白呈现特异性反应,这为DHV-Ⅰ快速诊断方法的建立奠定了基础。