一株奶山羊伪结核棒状杆菌的分离与鉴定

为获得陕西某羊场病羊脓包中的病原菌,以无菌采集的病羊颈部脓汁为材料,进行细菌分离培养,鉴定分离菌株的形态特征、培养特性、生化特性,挑取分离菌株进行协同溶血试验(cAMP)和16SrRNA基因的PCR扩增,并对序列进行分析,NJ法构建系统发育树;用分离菌株分别接种Balb/c小鼠和奶山羊;药敏试验鉴定分离株的耐药性。结果显示,分离菌株的形态特征、培养特性、生化特性与伯杰细菌鉴定手册所述伪结核棒状杆菌特性一致;测序显示分离菌株与GenBank中已收录伪结核棒状杆菌相似性达97%以上;Balb/c小鼠致病性试验和奶山羊动物回归试验表明分离株有强致病性;药敏试验表明分离菌株对红霉素、环丙沙星、克拉霉素、强力霉素、四环素、头孢唑啉、新霉素、氧氟沙星等多种抗生素敏感,对复方新诺明耐药。     

猪瘟诊断技术研究进展

猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)是严重危害养猪业的主要传染病之一,世界动物卫生组织(OIE)将其确定为A类传染病,也是我国农业部规定的一类传染病。     

奶山羊乳房炎灭活疫苗的制备及免疫效果检测

为评估奶山羊乳房炎灭活疫苗的免疫效果,以大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性表皮葡萄球菌及产色葡萄球菌为材料,经甲醛37℃灭活,按照6∶1（V／V）与铝胶盐充分混匀,分别经腹股沟皮下、颈部皮下注射途径,免疫泌乳期奶山羊,免疫剂量均为2 mL,共免疫2次,每次间隔14 d。分别在免疫前及第1次免疫后10、24、60、180 d 采集血样和乳样,ELISA 测定抗体效价,用快速诊断液检测隐性乳房炎,统计患病奶山羊的数量。结果显示,与对照组相比,两次免疫后血液及乳汁中针对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性表皮葡萄球菌及产色葡萄球菌的抗体效价含量均显著增加（P ＜0．05）,抗体维持时间长;颈部皮下免疫组免疫后180 d,腹股沟皮下免疫组免疫后的60 d,隐性乳房炎奶山羊数量均明显下降。结果表明,本研究制备的奶山羊乳房炎疫苗不仅能够刺激机体产生较好的体液免疫应答,而且还对隐性乳房炎有显著的治疗效果。     

猪转移因子对犬淋巴细胞转化增殖的影响

无菌采取犬抗凝血,分离淋巴细胞并制备成不同浓度.应用正交试验,探讨不同浓度淋巴细胞、植物血凝素(PHA-p)、犊牛血清(FCS)对淋巴细胞增殖的影响.在此基础上,研究不同浓度猪转移因子(transfer factor,TF)对犬淋巴细胞增殖的影响,增殖的结果用MTT法测定.试验结果表明,当犬淋巴细胞浓度为5×106个/ml,PHA-P为12.5μg/ml,FCS为10%时,淋巴细胞增殖效果最佳.在最佳培养条件下,猪TF浓度在0.195～25mg/ml时,对淋巴细胞转化增殖均有明显促进作用,猪TF单独或与PHA-P共同作用时对淋巴细胞增殖的最佳刺激浓度均为1.56mg/ml,且猪TF单独作用于淋巴细胞的效果优于与PHA-P的协同作用.试验结果证实,异源TF对犬淋巴细胞增殖有良好的刺激效果,同时本研究结果为异源TF在临床上应用于犬病毒性疾病的防治提供了试验依据.     

CD2配体在IBD和ND疫苗免疫应答中的佐剂效应研究

分别以猪源ＣＤ２配体协同新城疫（ＮＤ）Ⅳ疫苗免疫１８日龄鸡和绵羊源ＣＤ２配体协同法氏囊（ＩＢＤ）中等毒力疫苗免疫２５日龄鸡,采用β－微量法和琼脂扩散法测ＮＤ抗体及ＩＢＤ抗体水平。结果表明,两种ＣＤ２配体均能促进鸡体内特异性抗体的提前产生,并且试验组鸡抗体效价显著高于对照。     

大熊猫犬瘟热病毒LG株的分离鉴定

为获得大熊猫犬瘟热病毒株,采集死亡大熊猫的心脏、肺、肝病料,研磨并反复冻融后收集上清液接种Vero细胞,待出现细胞病变(CPE)后,收集病毒液。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定病毒分离株,测定病毒TCID_(50),动物回归试验测定其毒力。结果显示,盲传到第5代时,Vero细胞出现圆缩、聚集、脱落等病变;PCR扩增出287bp片段,与预期相符;测序结果显示,该毒株与已发表的CDV SD(14)11毒株(亚洲-Ⅰ型)的同源性为98%;毒株的TCID_(50)为10~(-5.2)/mL;幼犬感染分离毒株后出现体温升高、鼻头发干、拉稀、眼鼻分泌出水样分泌物等症状。本研究成功分离出大熊猫源犬瘟热病毒株。     

禽流感抗原快速检测试纸条的研究

应用胶体金标记技术(Immunogold Labelling Technique)与免疫层析技术,在玻璃纤维膜和硝酸纤维膜的检测线(T)和对照线(C)上分别喷上胶体金AIV单克隆抗体(Ab2)偶联物和AIV单克隆抗体(Ab2)-羊抗鼠IgG多克隆抗体,制成禽流感抗原检测试纸条。用该试纸检测“AIV琼扩抗原”、“AIV H5N1抗原”、“AIV H7N1抗原”、“AIV H9N1抗原”均显阳性,而对禽源性的其它病毒抗原均显阴性;本试纸与韩国产“禽流感检测试纸条”同时检测相同的样品,结果完全一致,且具有很好的线性(敏感度),是一种微量、特异、快速、简便和结果容易判定的新的检测方法,可作为检测机构和养禽场检测初筛禽流感时使用。     

猪红细胞CD58分子协同NDⅣ疫苗免疫的佐剂效应

用从木瓜酶修饰的猪红细胞提取的 CD5 8分子 ,协同 ND 疫苗免疫 8日龄雏鸡 (分为试验 A组、对照 B组 ) ;用从正常猪红细胞提取的 CD5 8分子 ,协同 ND 疫苗免疫 18日龄雏鸡 (分为试验 C组、对照 D组 ) ,以β-微量法测定ND抗体效价 ,以 α-醋酸萘酯酶染色法检测鸡外周血 T细胞的变化 ,并分别用 NDV F4 8E9强毒株在免疫后 2 4 d攻击 A组和 B组鸡、39d攻击 C组和 D组鸡。结果表明 ,免疫前 ,8日龄雏鸡的 ND抗体效价为 2 5.8,18日龄雏鸡的 ND抗体均为阴性 ;免疫后 ,与对照 D组比较 ,试验 C组的 ND抗体提前 4 d达到 2 4 .8,并且试验 C组 ND抗体效价显著高于对照 D组 ( P<0 .0 1) ,保护期延长 ;试验 A组雏鸡体内 ND抗体变化和对照 B组相似 ,但试验 A组雏鸡外周血 T细胞数量显著高于对照 B组 ( P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。攻毒试验结果显示 ,试验 A组鸡死亡率为 33% ,对照 B组鸡死亡率为6 3% ;试验 C组鸡死亡率为 17% ,对照 D组鸡死亡率为 5 3%。本研究结果表明 ,猪红细胞 CD5 8分子具有较好的疫苗佐剂效应     

猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

以纯化复性的猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap重组蛋白作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选,获得了3株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1C7A4、4F3F5和4G8F7,其染色体平均数为98～103,间接ELISA检测3株细胞培养上清效价分别为1:3125、1:3125、1:15625,小鼠腹水效价分别为1:390000、1:390000、1:1950000.ELISA结果显示,1C7A4、4F3F5和4G87F仅与融合表达的PCV2-Cap蛋白反应,而与PET-32a载体表达的蛋白不反应.相加ELISA结果显示3株单克隆抗体对应两个不同的病毒抗原位点.间接免疫荧光结果显示,1C7A4、4F3F5和4G8F7能与PCV2发生反应,而不与PCV1发生交叉反应.结果表明所获得的3株单抗是PCV2型特异性的,为PCV1和PCV2鉴别诊断方法的建立奠定了基础.     

猪转移因子影响犬外周血中性粒细胞杀菌活性的最佳浓度选择

在机体的天然免疫系统中,中性粒细胞为主要的效应细胞,它是机体抵御感染性病原体的第一道防线,可以迅速穿越机体生理屏障到达局部组织.中性粒细胞的主要功能为吞噬、清除异物,杀菌和细胞毒作用,因此,中性粒细胞在抗真菌、细菌、病毒感染中的地位非常重要.