β变形菌多聚磷酸激酶PPK2的原核表达及纯化

多聚磷酸激酶2(Polyphosphate kinase 2, PPK2)在众多病原菌的致病性中发挥重要作用,而人等后生动物体内未发现ppk2基因,因而PPK2是新型抗生素开发的靶点。为探索β变形菌CB中PPK2在大肠埃希菌中的可溶性表达,获得纯度、浓度均可用于蛋白质晶体学研究的PPK2蛋白。首先,采用生物信息学方法对PPK2蛋白的基本理化性质和二级结构进行预测,利用限制性核酸内切酶酶切位点NdeΙ和HindⅢ将ppk2基因插入到原核表达载体pET30a中,并通过全质粒酶切法和目的基因测序确认重组表达载体PPK2/pET30a的准确性;接下来,重组表达载体通过物理法转入大肠埃希菌BL21(DE3)菌株中,利用IPTG诱导目的蛋白PPK2在37℃、25℃和16℃下试表达,并通过SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定分析表达产物;最后,利用3 L表达菌液进行放大培养,表达产物先后经Ni-IDA亲和色谱柱、阴离子交换色谱柱和凝胶过滤色谱柱分离纯化。结果显示:大肠原核表达系统可在16℃、终浓度为0.2m M·L~(-1)的IPTG诱导下稳定高效表达以可溶性单体形式存在的,相对分子质量约为35 ku的PPK2蛋白;放大培养中产生的PPK2蛋白经系列色谱法纯化后浓度可达12 mg·mL~(-1),纯度为95%,可用于PPK2蛋白的结构和功能研究。     

抗菌肽和酶制剂的应用试验报告

通过分别在奶牛日粮中添加抗菌肽和酶制剂,对试验1组107 头、试验2组113 头和对照组104 头荷斯坦奶牛进行比较试验。结果表明,试验1组和试验2组产奶量增加极显著（p<0.01）,其中试验2 组产奶量增加值高于对照组0.11 kg。利用DHI报告计算各组奶牛平均体细胞变化,试验1组体细胞数降低5.08×10⁴ 个/mL,且差异显著（p<0.05）。结论为抗菌肽对降低体细胞有一定作用,在乳房炎高发季节和体细胞异常时可以使用,使用酶制剂后,平均每头奶牛每天产生的收入可以增加0.374 元,在性价比较高时可以使用。     

表达Renilla Luciferase重组流感病毒的构建及生物学特性研究

本研究构建了表达Renilla Luciferase的重组流感病毒,并运用Luciferase报告基因检测系统对该病毒的生物学特性进行了研究。研究发现该病毒复制时能稳定表达Renilla Luciferase,添加磷酸奥斯他韦抑制病毒复制后Luciferase表达量明显低,而且表达量与磷酸奥司他韦浓度成反比。结果表明检测Luciferase表达量可以直接反应病毒的复制,将该重组病毒与Luciferase报告基因系统运用到抗流感药物的大规模筛选中,可为抗流感药物的筛选提供一种快速且灵敏的检测方法。     

提高杉木植苗造林质量的主要措施

营林造林是国家为防止土地沙化、水土流失、气候恶化而实施的惠民工程,旨在调节气候、保护生态环境,同步实现生态效益、经济效益和社会效益。杉木植苗造林质量是决定造林成败的关键,在造林过程中应加强对种苗质量、整地、栽植、管护等各个环节的组织管理,从而确保造林质量,避免人力、物力和财力浪费。     

造成牛皮肤鳞屑增多和皮肤增厚的几种疾病的诊断

1遗传病 牛胎儿鱼鳞癣属隐性遗传病，以美国布朗牛、英国伏礼先牛易发生。特征性症状是犊牛产下即死或产后不久死亡，胎儿皮肤大块角质化，裂隙深且脱毛。先天性鱼鳞癣呈亚致死性隐性遗传或伴性的隐性遗传。加拿大荷斯坦牛和娟姗牛特征性表现为犊牛生下即有局灶性或弥漫性角化过度，以四肢、口套和腹部皮肤最明显。     

谈使用水泥蜂箱

<正>蜂箱是养蜂的重要工具之一,但是木制蜂箱容易破损,会造成一定的经济损失。使用水泥制成的蜂箱,制作简单、省工、省时、省钱,且永久使用,制作一个水泥蜂箱成本只是一个木制蜂箱的1/10,不管饲养中蜂或定地饲养西蜂都可应用。2012年与2013年的春天,我地一位程姓蜂友,在当地使用水泥蜂箱定地饲养西蜂,与同村定地使用木制蜂箱的杨姓蜂友,各用10群蜂做试验。都调整为每群4脾蜂,他们蜂场四周油菜花盛开,3     

高寒牧区冷季补饲青贮玉米秸秆对天祝白牦牛体重变化的影响

[目的]为掌握高寒牧区冷季补饲青贮玉米秸秆对天祝白牦牛体重变化的影响。[方法]通过对天祝白牦牛采用燕麦青干草加不同比例青贮玉米秸秆分组补饲研究。[结果]表明,与传统补饲方式相对比,在同样放牧加补饲的条件下,试验组效果显著。[结论]试验组天祝牦牛体重前四月体重呈上升趋势,后两月才开始缓慢下降,具有显著的保镖效果,对照组体重冷季六个月一直呈下降趋势,保膘效果较差。     

35%氯虫苯甲酰胺水分散粒剂对梨木虱的防效研究

为了探索氯虫苯甲酰胺对梨园梨木虱的防治效果,参照《农药田间药效试验准则》,连续2年选用35%氯虫苯甲酰胺水分散粒剂对梨园梨木虱进行了防治试验。结果显示,35%氯虫苯甲酰胺水分散粒剂是防治梨木虱的有效药剂,可作为轮换药剂使用,其适宜的使用浓度为7 000²1 000倍液。     

嘉丰优2号新组合高产高效氮磷钾肥料配比试验

为了探索单季杂交晚稻新组合嘉丰优2号在浙江台州的高产高效栽培技术,采用"3414"试验设计开展了嘉丰优2号新组合氮、磷、钾肥料效应试验。结果表明,嘉丰优2号实际单产在无肥区(处理1)和无氮区(处理2)无显著差异(P0.05),二者均显著低于其他处理(P0.05),其他处理间差异均不显著(P0.05),其中以氮、磷、钾均为2水平(202.5—90.0—150.0 kg·hm~(-2))的处理6产量最高,较无氮区(处理2)、无磷区(处理4)、无钾区(处理8)分别高31.73%、6.34%和6.43%说明氢肥对产量的效应高于磷、钾肥;相关分析表明,实际产量与有效穗数极显著正相关(P0.01),而与每穗实粒数和结实率显著负相关(P0.05);从高产高效要求出发,综合氮、磷、钾肥料效益模型和生产实际,嘉丰优2号在当地作单晚种植的N、P_2O_5、K_2O用量分别以201.0～210.0 kg·hm~(-2)、90.0～97.5 kg·hm~(-2)、112.5～120.0 kg·hm~(-2)为宜。