静脉注射用硝硫氰胺混悬液治疗耕牛日本血吸虫病

静脉注射用硝硫氰胺混悬液系我所与上海医工院等单位合作研制成功的硝硫氰胺治疗耕牛日本血吸虫病的一种新制剂,用来代替微粉口服,减少药费。该药物粒径在2μm以下,稳定性大,无积聚变性现象,注射后不会引起微血管栓塞,符合药典规定有关混悬液静脉注射要求,贮运也方便,是安全高效的新制剂新疗法,系国内外首创。 该制剂的用药量:每公斤体重黄牛为2mg,水牛为1.5mg,一次耳静脉慢速推注。实验治疗证明,治后15-20天粪孵开始转阴,到剖检日未复阳;减虫率水牛为99.79%、黄牛为97     

胶体金免疫层析条诊断家畜日本血吸虫病的现场应用

为评估快速胶体金免疫层析条(colloidal gold imunochromatography assay,GICA)诊断现场家畜日本血吸虫病的价值,以GICA法对来自湖南血吸虫病流行区和非流行区的山羊、水牛、黄牛血清进行栓测,并和间接血凝法(indirect haemagglutination test,IHA)及粪便孵化法的诊断结果进行比较.结果显示,GICA对流行区284只山羊、172头水牛和145头黄牛血清检测,阳性率分别为10.21%、8.14%、8.28%;对非流行区的30只山羊、25头水牛、17头黄牛检测,假阳性率分别为10%、12%和11.76%.GICA和IHA的诊断结果相比,阳性符合率分别为93.8%、100%、100%,阴性符合率分别为99.7%、98.9%、98.7%;GICA与粪便孵化法的诊断结果相比,阳性符合率均为100%,阴性符合率分别为94.6%、96.9%、94.3%.可见,GICA法快速、简便,可以代替现行的IHA和粪便孵化检查法,用于疫区家畜血吸虫痛的筛查.     

日本血吸虫基因重组抗原rSj06868对小鼠的免疫保护效果

为克隆、表达日本血吸虫假想蛋白SJCHGC068068编码基因（暂命名为Sj06868）并观察重组抗原的免疫预防效果。应用PCR技术从日本血吸虫7 d童虫、14 d童虫mRNA反转录制备的cDNA中克隆到Sj06868基因的46-438 bp DNA片段,BLASTn分析未发现其他物种中的同源性序列,也未发现其保守序列和相关功能结构域。以pET32a为表达载体、Sj06868基因在大肠杆菌Rosetta（DE3）中获得高效表达,表达产物rSj068068分子量为36 kDa,能被感染血吸虫14 d兔血清识别。将纯化的重组抗原与佐剂ESSAI ISA 206 CELL混合后免疫BALB/c小鼠,与佐剂对照组和PBS对照组相比,分别获得了31.63%、29.19%减虫率以及55.63%、56.27%肝脏虫卵减少率。用ELISA检测各组血清中抗rSj068068特异性抗体结果显示,免疫组在攻击感染前、佐剂对照组和PBS对照组在感染后均产生了较高水平的特异性抗体。本研究结果说明,Sj068068是日本血吸虫特有的童虫期高表达基因,rSj068068在抗血吸虫疫苗和血吸虫感染的诊断方面均有潜在应用价值。     

日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选噬菌体展示抗原对小鼠血吸虫病免疫效果观察

在前期研究中我们利用日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选日本血吸虫噬菌体展示cDNA文库,共获得10种阳性噬菌体克隆。本研究选择其中5种噬菌体克隆单独或联合免疫小鼠,观察其对血吸虫成虫合抱的影响以及对血吸虫病的免疫预防效果。结果显示,19号克隆单独免疫和6号、18号混合免疫在预防实验中分别取得了40.53%和31.14%的减虫率及35.31%,44.65%的肝脏减卵率。研究结果提示,19号、6号和18号噬菌体展示的EST序列编码基因具有一定的抗血吸虫生殖免疫效果,在血吸虫疫苗研究方面具有重要价值。     

pVAX1/SjTSP2 DNA疫苗免疫预防小鼠日本血吸虫病的效果评估

为评估SjTSP2分子作为日本血吸虫DNA疫苗候选抗原分子的潜力,本实验扩增了编码该分子的DNA片段,构建了重组真核质粒pVAX1/SjTSP2,检测其在哺乳动物细胞中表达情况后,通过基因枪轰击法免疫小鼠,应用ELISA、流式细胞术等检测重组质粒诱导的免疫反应,计算减虫减卵率,评估对小鼠日本血吸虫病的免疫保护效果。间接免疫荧光试验结果显示该质粒能在293T细胞中表达。质粒免疫小鼠诱导了显著升高的特异性IgG抗体和IFN-γ、IL-4等细胞因子。小鼠免疫保护试验结果表明,免疫组小鼠虫荷数较PBS对照组增加12.4%(P=0.368),但肝组织虫卵减少10.01%(P=0.486)。说明制备的DNA疫苗能刺激小鼠产生较强的免疫反应,但诱导的免疫保护作用并不理想,为血吸虫DNA疫苗研究提供了参考数据。     

东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库的构建

本项研究的目的是构建东方田鼠肝脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫病抗性相关基因奠定基础.用TRIzol试剂提取东方田鼠肝脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA末端加上EcoRⅠ/HindⅢ定向接头并用EcoRⅠ和Hind Ⅲ酶切,使其两端分别带EcoRⅠ和HindⅢ粘性末端.用Mini Column纯化、收集300 bp以上的双链cDNA片段,再连接于带有EcoRⅠ和HindⅢ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.经测定,库容量为1.3×107 PFU/mL,扩增后文库滴度为1.8×1011 PFU/mL.对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91.7%,阳性克隆片段大小分布在200 bp～1 000 bp,其中有95.5%的插入片段大于300 bp.用日本血吸虫童虫可溶性抗原对文库进行了初筛,得到了21个ESTs,将这些阳性噬菌体克隆和血吸虫童虫共培养,其中大部分克隆诱导的童虫死亡率比阴性噬菌体对照高出2%～13%.     

日本血吸虫谷胱甘肽S－转移酶小鼠免疫试验

用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析柱纯化中国大陆株日本血吸虫成虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）。把纯化的ＧＳＴ结合福氏性剂免疫了二批达ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，获得了２９．５８～３２．７１％的减虫率和５２．９４～６８．１３％的粪便减卵率。ＥＬＩＳＡ试验表明免疫小鼠产生了体液免疫应答，免疫印迹试验（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ）显示日本血吸虫水溶性成虫抗原和ＧＳＴ抗原的２６、２８ｋＤ蛋白被免疫小鼠血清所识别。     

张延喜副部长带领调查组赴湖北、安徽检查血防工作

张延喜副部长带领调查组赴湖北、安徽检查血防工作根据国务院《关于加强血吸虫病工作的决定》和国务院领导批示“坚持春查秋治制度，改进工作方法，讲求实效”的精神，９５年４月５～１１日，张延喜副部长带队，卫生部、水利部和农业部农垦局、计划司、环保能源司、血防办...