放牧与舍饲条件下夏洛莱牛肠道微生物多样性及差异分析

【目的】采用高通量测序技术研究放牧与舍饲条件下夏洛莱牛肠道微生物多样性及差异。【方法】选取新疆塔城地区健康的舍饲夏洛莱牛(CB组)和放牧夏洛莱牛(CG组)各5头,分别采集CB、CG组每头夏洛莱牛的直肠粪便,提取微生物总DNA,通过Illumina HiSeq 测序技术,分析10个粪便样品的菌落结构及多样性。【结果】所有样本共检测出1 089个OTUs(CB:1 044、CG:1 087),归属于12门24纲33目57科170属的细菌。在门水平,厚壁菌门和拟杆菌门在2组中均为优势菌门,其次为疣微菌门、放线菌、广古菌门和变形菌门,在科水平的优势菌依次为瘤胃球菌科、理研菌科、毛螺菌科、消化链球菌科、普雷沃氏菌科、克里斯滕森菌科、拟杆菌科等;其中CB组中拟杆菌门、拟杆菌纲、拟杆菌目、理研菌科、消化链球菌科丰度显著高于CG组(P<0.05),CG组中厚壁菌门、瘤胃球菌科的丰度显著高于CB组(P<0.05)。【结论】舍饲夏洛莱牛和放牧夏洛莱牛肠道微生物结构与组成存在显著性差异,放牧夏洛莱牛肠道微生物具有更强的纤维消化的能力。     

犊牛肺源致病性大肠杆菌分离鉴定、耐药性及耐药基因检测

本试验旨在确定新疆石河子地区某牛场因呼吸系统疾病导致犊牛死亡的细菌性病原,并对分离病原进行系统进化分类、耐药表型和耐药基因分析。采用细菌常规分离结合全自动生化分析系统对分离株进行分离鉴定,采用纸片法和PCR方法对分离株进行系统分群、药敏表型及耐药基因的分析。从患病犊牛肺脏、肝脏及淋巴结组织分离鉴定出6株致病性大肠杆菌,6株分离株均呈多重耐药现象,其中对青霉素、阿莫西林、头孢唑啉、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、氟苯尼考、替考拉宁、克林霉素、美罗培南、四环素和妥布霉素的耐药率高达100%。氨基糖苷类耐药基因aacC2、β-内酰胺类耐药基因bla_CTX-M和bla_TEM、四环素类耐药基因tetA、喹诺酮类耐药基因gyrA、磺胺类耐药基因sul2携带率分别为66.67%、83.3%、66.7%、100%、100%和100%。结果表明,新疆石河子某牛场发生呼吸道感染死亡犊牛细菌性病原是大肠杆菌,且表现较强的多重耐药现象,分离株携带更为丰富的耐药基因。     

肠外致病性大肠埃希菌毒力因子研究进展

近年来,在人类饲养的伴侣宠物、猪、牛、羊、家禽以及林麝等动物体内均已分离到一种能够引发肠外组织感染的大肠埃希菌--肠外致病性大肠埃希菌(extraintestinal pathogenic Escherichia coli,ExPEC)。ExPEC所具有的毒力特征使其能够在消化道以外的组织脏器中定殖增殖,在临床上能引起人和动物的严重感染甚至导致死亡。由于ExPEC导致的疾病存在治疗困难且易复发的特点,给医疗事业和畜牧业造成了巨大的经济损失。ExPEC较强的致病性与其携带的众多毒力因子密不可分。论文就已发现的ExPEC主要毒力因子研究进展进行分类阐述,并介绍了不同毒力因子在ExPEC感染宿主过程中的致病机制。     

牛Toll样受体实时荧光定量PCR检测方法的建立

建立检测牛Toll样受体(TLRs)mRNA表达水平的SYBR GreenI实时荧光定量PCR方法.根据GenBank中BoTLR-2、3、4、5、7、8和10的基因序列,在其保守区设计并合成各自特异性引物,以牛3-磷酸甘油脱氢酶基因(GAPDH)为内参,建立实时荧光定量PCR方法.结果表明,在1×102～1×109 copies/μL范围内,BoTLRs和GAPDH基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991.溶解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的灵敏度和特异性.重复性结果表明,TLRs和GAPDH基因阳性质粒,最小检出浓度达到100和10 copies/μL,组内、组间变异系数值均保持在3.5%以内.临床样品检测结果表明,TLR3和TLR8 mRNA水平在诱导培养早期较高,在4 h达到高峰,而TLR4和TLR7水平与之相反,在诱导培养后期较高,在24 h达到高峰,表明本研究所建立的检测方法成功用于临床样品的检测,为在mRNA水平对BoTLRs的定量分析提供技术平台.     

犊牛耐药性大肠杆菌的分离鉴定

<正>近两年,石河子地区某牛场连续出现1月龄犊牛发病死亡,最近一批犊牛发病率为56%,致死率为50%。其临床症状:病初精神沉郁,腹泻下痢。病理变化:小肠粘膜大量出血,其它脏器无明显变化。通过对病死牛采集的病料进行实验室诊断,确诊为大肠杆菌感染,现将结果报告如下。1材料与方法     

牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的鉴定

筛选建立了8株牛病毒性腹泻病毒（BVDV）单克隆抗体杂交瘤细胞，通过对其染色体的分析、单克隆抗体免疫球蛋白类型及病毒中和活性等指标的检测，表明8株单克隆抗体杂交瘤细胞的染色体数目均接近两亲本细胞的染色体数目之和；单克隆抗体免疫球蛋白类型均为IgG，其中6株为IgG1,2株为IgG2a，且以BVDV具有不同程度的中和能力。     

牛病毒性腹泻病毒流行的原因与防制近况

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)属黄病毒科瘟病毒属,是危害养牛业的重要病原之一.BVDV感染能引起广泛的临床症状,包括腹泻、流产、胎儿畸形、呼吸困难、慢性消耗性疾病、免疫机能障碍,并且是二次病毒感染和细菌感染的诱因.某些BVDV毒株能引起急性致死性疾病,死亡率17～32%.BVDV还能通过孕畜子宫建立持续感染,胎儿出生后一经存活下来即成为持续感染动物,这些持续感染动物终生带毒,持续排毒,成为牛群中的重要传染源.持续感染动物当再次感染抗原性密切相关的BVDV毒株时,就会引起致死性的粘膜病.……     

制取高效价抗BVD-MDV高免血清的免疫程序优选

采用不同免疫程序对京白鼠进行免疫试验。用间接ＥＬＩＳＡ法检测抗体效价。结果表明：采用明矾佐剂、腹腔注射（ＩＰ）、３０天免疫间隔的试验组血清抗体效价高于用弗氏佐剂、皮内注射（ＥＰ）的试验组和用明矾佐剂、腹腔注射（ＩＰ）、１５天免疫间隔试验组，也比用明矾佐剂、皮内注射（ＥＰ）、３０天间隔免疫组高。     

新疆石河子地区犬细小病毒的分离鉴定与基因型分析

犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)是一种引起犬出血性肠炎或心肌炎的病毒[1].欧洲首先在1976年和1977年,在美国1978年都鉴定出存在CPV阳性血清.至1979年病例已蔓及世界各地[2-3].1982年10月,我国报道在暴发传染性出血性腹泻的病犬粪便提取物中,发现细小病毒颗粒,其大小和形态结构具有典型的细小病毒特征,从而首次证实该病在我国的存在[4-5].随后,在我国各地陆续有本病发生的报道.近年来随着城市宠物热的兴起, 该病广泛的传播蔓延.据石河子市兽医防疫站初步统计,在犬的各种传染病中,犬细小病毒性肠炎发病率、死亡率均为最高,为当前犬的主要传染病之一.本实验室从病死犬的内脏中分离到1株犬细小病毒,初步命名为CPV-SHZ毒株.     

抗CP型、NCP型牛病毒性腹泻病毒高免卵黄抗体的制备

本研究采用致细胞病变（cytopathic,CP）型牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）标准毒和非致细胞病变（noncytopathic,NCP）型新疆优势毒株免疫产蛋鸡,用改良PEG法提取卵黄抗体(IgY),并对提取的IgY采用SDS-PAGE检测纯度,间接ELISA检测免疫后每隔7 d的抗体效价,并测定所得抗体对NCP型BVDV的中和效价。结果表明,用该法提取的IgY纯度较高;间接ELISA结果证明,经过4次免疫后,抗CP型BVDV的效价达到1∶32000,抗NCP型BVDV的效价达到1∶40000,3个月后再次检测,卵黄抗体效价未见明显下降。最后一次免疫14 d的抗体对NCP型BVDV的中和效价达到1×10_^-3。