聚维酮碘和二氧化氯对泥鳅的急性毒性试验

试验结果表明:聚维酮碘对泥鳅的24、48 h和96 h半致死质量浓度分别为449、393、360 mg/L;安全质量浓度为90 mg/L.二氧化氯对泥鳅的24、48 h和96 h半致死质量浓度分别为1110、984、942 mg/L;安全质量浓度为232 mg/L.这2种消毒药物的安全质量浓度均远远高于它们在养殖生产中常用的泼洒浓度和浸浴浓度.聚维酮碘和二氧化氯在泥鳅养殖生产和病害防治中可以按照常规使用浓度放心使用.     

比较免疫磁珠法与A蛋白亲和层析法纯化兔抗血清中的IgG

优化了免疫磁珠分离法纯化抗血清的实验条件,并与A蛋白亲和层析法比较纯化效果,以求得到一种简便、快速、高效的纯化IgG方法.结果表明：从5只新西兰兔获得210 mL试管凝集效价高达1∶5 120的兔抗鳗弧菌抗血清,磁珠与IgG结合10 min达到平衡,其最大结合量为0.227 mg/mL;免疫磁珠分离法与A蛋白亲和层析法得到的IgG纯度都很高,经过SDS-PAGE电泳都只得到25 ku和55 ku左右的两条带;免疫磁珠分离法得到的抗体ELISA效价高于A蛋白亲和层析法;免疫磁珠分离法反应所需时间（10 min）小于A蛋白亲和层析法所需的20 min,其得率（11.5 mg/mL）也高于A蛋白亲和层析法的10.25 mg/mL.     

50味中药及其复方与抗生素对河流弧菌的体外抑菌作用

用牛津杯法选择大黄、黄柏、黄连等50种单味中药进行河流弧菌、金黄色葡萄球菌体外抑菌试验,并以抗菌活性较好的药物组成二联、三联复方,药物质量浓度分别为60和240 mg·mL~(-1),进行中药复方抗菌活性研究,同时用抗生素进行河流弧菌药敏试验。目的是筛选出对河流弧菌敏感的中草药、抗生素及其复方。结果表明,黄连、诃子等单方对河流弧菌抑菌作用明显,为极敏感;在60 mg·mL~(-1)低药物浓度时,黄柏、黄连组成的复方对河流弧菌抑菌作用为极敏感;在240 mg·mL~(-1)药物浓度时,黄柏、黄连等组成的9个复方中药对河流弧菌抑菌作用属极敏感,黄连、板蓝根、黄柏等4个复方中药对河流弧菌的抑菌作用明显,为极敏感。河流弧菌对恩诺沙星、盐酸多西环素、氟苯尼考、土霉素及甲氧苄啶/磺胺甲噁唑5种药物高度敏感。部分中药对河流弧菌抑制作用不明显,黄连、板蓝根、黄柏等4个三联复方中药药效最强。可组成多种三联复方中药或中西药联用复方,均有良好的抑制作用。     

基于单链DNA浓度法的哈维氏弧菌核酸适配体亲和特异性研究

本研究采用核酸适配体的单链DNA浓度来表征其亲和力,通过测定核酸适配体与靶细菌哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)结合后ssDNA的浓度,来研究该核酸适配体的亲和特异性和亲和常数,并通过荧光显微镜法对其亲和特异性进行验证。结果显示,采用单链DNA浓度法测得该核酸适配体对靶细菌哈维氏弧菌的亲和力是非目标菌的15.2倍以上;荧光显微镜直接观察发现只有靶细菌能较好结合有荧光标记的核酸适配体,并呈现明显荧光;荧光阻断法发现靶细菌和非靶细菌都未呈现明显荧光,证明了该适配体有较好的亲和特异性,也进一步验证了单链DNA法的测定结果。在亲和常数的测定方面,利用单链DNA浓度法测得该核酸适配体的亲和常数K_d=(33.70±7.83) nmol/L,相应的拟合系数为R~2=0.960,有较好的准确性和可靠性,说明采用单链DNA浓度法来测定适配体的亲和力和亲和常数是可行的。     

哈维氏弧菌TS-628菌株趋化性研究

采用平板趋化和毛细管趋化的方法,研究了病原性哈维氏弧菌TS-628菌株的趋化性。哈维氏弧菌对青石斑鱼肌肉、表皮黏液、肠黏液及血清的趋化性研究结果表明,该菌对青石斑鱼肌肉提取物的趋化性最强,且哈维氏弧菌的趋化运动明显受到温度、pH及盐度等环境因子的影响。哈维氏弧菌对青石斑鱼肌肉18种主要氨基酸的趋化性研究表明,该菌对其中多种氨基酸均表现出很强的趋化性,但氨基酸浓度也会对该菌的趋化性造成影响,浓度过高趋化性反而减弱。     

luxR基因调控嗜水气单胞菌耐药性的分子机制初探

LuxR家族蛋白是一类在革兰氏阴性细菌中发挥重要作用的调控蛋白,参与细菌多项重要生理活动。采用RNAi技术构建嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) luxR05735稳定沉默菌株luxR05735-RNAi,并利用qRT-PCR检测基因沉默效果。结果显示,与野生株相比,沉默株中luxR05735的表达量降低了96.8%。药物敏感性实验表明,与野生株相比,luxR05735-RNAi对庆大霉素、诺氟沙星、卡那霉素、吡哌酸的耐药性显著降低。对野生株与沉默株luxR05735-RNAi的转录组数据进行分析发现,表达差异显著的基因共有1286个,其中,上调基因353个,下调基因933个;显著富集的通路4条,分别是核糖体通路、精氨酸生物合成通路、硫代谢通路、硒化合物代谢通路;在这4条通路中可能与嗜水气单胞菌耐药性相关的重要功能基因包括metE、glnA、rplB、rplX、rpsA、rpsJ等,这些功能基因编码的蛋白主要与细菌的生物成膜及核糖体蛋白合成相关。综合以上研究结果,可以推测嗜水气单胞菌的luxR05735通过调控细菌的生物膜形成相关基因及核糖体蛋白相关基因的表达,从而调控细菌对药物的耐受性。     

厦门近岸滩涂底泥中微型真核生物的群落结构及其对双齿围沙蚕扰动的响应

为研究厦门近岸潮间带滩涂底泥中微型真核生物的群落结构及其对双齿围沙蚕扰动的响应,采用PCR-DGGE技术对室内模拟沙蚕生物修复过程中微型真核生物的群落结构及动态变化进行了研究。结果显示,集美滩涂底泥中微型真核生物主要分为后生动物(包括6个门:颚口动物门、环节动物门、线虫动物门、节肢动物门、软体动物门和腹毛动物门),丝足虫门,硅藻门和囊泡虫总门(又分为纤毛虫门和甲藻门)。其中囊泡虫总门的纤毛虫门为优势类群。后生动物中的线虫门为次优势类群。Peridinium quinquecorne(属于囊泡虫总门中的甲藻门)是普遍存在的优势物种。DGGE图谱聚类分析表明播种双齿围沙蚕的处理组样品中微型真核生物的群落结构聚为一支,并与未播种沙蚕的对照样品分开。研究表明,播种双齿围沙蚕对微型真核生物群落结构造成了一定的影响。沙蚕的处理组检测到了更多的线虫动物门,可能是因为双齿围沙蚕的活动促进了这些类群的生长。     

鳗鲡外周血白细胞体外吞噬嗜水气单胞菌数量模型的建立

为建立鳗鲡外周血白细胞体外吞噬嗜水气单胞菌的数量模型,研究了感染时间一定、感染复数变化的情况下鳗鲡外周血白细胞吞噬的细菌数量和白细胞的存活率,同时还研究了感染复数一定、感染时间变化的情况下鳗鲡外周血白细胞吞噬的细菌数量和白细胞的存活率。结果发现,鳗鲡外周血白细胞对嗜水气单胞茵有较强的吞噬作用,在感染复数为100：1、感染时间为30min时细胞吞噬的细菌量达到饱和,而细胞本身仍可维持较高活性。表明100：1的感染复数及30rain的感染时间,是研究鳗鲡外周血白细体外吞噬嗜水气单胞菌数量模型的最佳参数。本研究还通过检测吞噬速率和杀菌速率评估建立起来的数量模型发现,鳗鲡外周血白细胞吞噬嗜水气单胞菌的速率较吞噬大肠杆菌的速率快,但杀灭该茵的速率却均显著低于杀灭大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的速率,进一步证明建立的数量模型具有良好的可行性。     

小球藻锌结合类金属硫蛋白的结构表征及抗菌活性

小球藻经60μmol/L的锌胁迫培养5d后,离心收集藻泥,经超声波细胞破碎后,离心得到上清液即蛋白质粗提液,再经葡聚糖凝胶层析柱G-75及脱盐柱G-25分离、纯化后,收集的蛋白组分经真空冷冻干燥后获得小球藻锌结合蛋白。通过Tricine-SDS-PAGE电泳、氨基酸组成及紫外光谱等方法进行表征,测得该蛋白的分子量约为8.2ku,半胱氨酸含量为15.4%,具有金属硫蛋白典型的紫外光谱特征,称为类金属硫蛋白(Zn-MT-like proteins)。试验采用琼脂糖孔穴扩散法,研究了小球藻Zn-MT-like蛋白对3种细菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽胞杆菌)和3种真菌(青霉菌、曲霉菌、酵母菌)的抗菌活性,并与兔肝Zn-MTs的抗菌能力进行比较。结果表明,小球藻Zn-MT-like蛋白对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌)和霉菌(青霉、曲霉)具有显著的抗菌活性,1mg/mL的Zn-MT-like蛋白对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞杆菌、青霉和曲霉的抑菌圈直径分别为13.2、17.4、7.2和9.8mm;而对大肠杆菌、酵母菌则无抗菌活性。同样条件下,未加锌胁迫的小球藻蛋白质本身和兔肝Zn-MTs并不具有这些抗菌...     

致病性溶藻弧菌生物膜形成特性研究

采用改良的微孔板法研究静置培养条件下致病性溶藻弧菌ND-01在酶标板上成膜情况。结果显示,溶藻弧菌的生物膜的OD590在16h达到峰值后,随培养时间延长出现下降;在102～108cfu/mL范围内,不同的初始菌密度对生物膜的OD590影响并不显著;NaCl质量分数为4.5%时,所形成生物膜的OD590最高;30℃,溶藻弧菌的生物膜OD590显著高于其他温度组(P0.05);在胰蛋白胨大豆肉汤培养液中加入质量分数1.5%的CaCl2,能够显著促进生物膜形成,而加入MgCl2对于生物膜的影响则不显著;经过大黄鱼表皮黏液包被后,96孔板中生物膜的OD590显著高于其他部位组织提取液包被组(P0.01)。致病性溶藻弧菌ND-01能够在聚苯乙烯材料的96孔酶标板表面形成稳定而明显的生物膜,且其生物膜的形成与多种环境因素有着密切关系。