羊乳腺上皮细胞的形态观察

用组织块培养法获得山羊乳腺细胞原代培养物,并根据山羊乳腺成纤维细胞与上皮细胞对胰蛋白酶的敏感性不同将二者分离纯化。对细胞形态进行光镜观察发现：纯化的山羊乳腺上皮细胞传代至第15代时其生长仍正常。山羊乳腺上皮细胞含不同的细胞类型,大多数上皮细胞呈短梭形或多角形,呈蜂窝状;部分细胞呈圆饼状,体积较大;部分细胞呈长形。纯化的乳腺上皮细胞增殖可形成圆顶型结构,呈乳头状,称之为乳球体。     

人表皮生长因子的基因克隆与原核表达

采用RT-PCR方法从人胎盘组织中扩增出hEGF基因,将其分别连入表达载体pGEX-4t-1(+)和pGEX-6p-1(+)质粒中,并转化入BL21-CodonplusTM中,解决了大肠杆菌密码子偏爱性问题,不需附加程序就可以编码稀有密码子的重组基因。SDS-PAGE结果证明,pGEX-4t-1(+)-hEGF和pGEX-6p-1(+)-hEGF分别在大肠杆菌BL21(DE3)-CodonplusTM-RP和BL21(DE3)-CodonplusTM-RIL中获得高效表达,目的蛋白占总菌体蛋白的30%左右。     

大鼠心肌细胞条件培养基对兔胚胎干细胞分离培养效果的影响

采用大鼠心肌细胞条件培养基对兔胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESC)进行分离、传代培养,研究大鼠心肌细胞条件培养基对兔ESC分离培养效果的影响。结果显示,用SD大鼠心肌细胞条件培养基培养的兔ESC集落呈岛屿状生长,碱性磷酸酶染色呈强阳性,体外分化可形成类胚体状结构,贴壁的类胚体周边会出现许多分化的上皮样细胞或单个散在的细胞;常规冻存后再传代的兔ESC集落具有较为一致的生长特征,并呈现胚胎干细胞集落所特有的岛屿状生长形态;传至第5代的兔ESC集落核型正常率>75％。表明SD大鼠心肌细胞条件培养基可用于兔胚胎干细胞分离培养。     

出生前山羊延髓主要灰质核团的形成和发育

对从胚胎期第6周到出生前山羊的延髓主要灰质核团发育的组织学变化进行了系统研究。结果表明：（1）第6周山羊胚胎延髓处在组织发生末期和核团形成初期，是其内部核团构建的关键时期。（2）延髓内不同核团中的神经元发育变化在时间上有较大的差异，在同一核团内神经元胞体发育分化在时间上也有差异，即同一核团内较为成熟的神经元胞体的数量由少到多，细胞质内的尼氏小体也存在由少到多，由小变大的过程。（3）延髓灰质结构形成和神经元发育分化的规律：有些结构发生早，而神经元分化较晚，如下橄榄核、三叉神经脊束核和孤束核；有些结构发生略晚，但其中的神经元胞体分化和发育则较早，如舌下神经核、疑核及延髓的网状结构；有些结构发生早，神经元发育也早，如迷走神经背核。     

关中奶山羊超数排卵的研究

用FSH恒量法、FSH减量法、FSH和LH混合法及PMSG法处理获得头均可用胚数分别为5.5,5.8,4.0和3.2枚;从情期的6～8,9～11,12～15和16～18d开始超排获得的头均可用胚数分别为3.4,5.7,5.5和4.1枚;对2,3,4,5和6岁以上供体超排获得的头均可用胚数分别为3.2,4.7,5.1,5.7和2.9枚;在9,10,11,12月和次年1月超排获得的头均可用胚数分别为2.8,4.7,5.8,5.3和3.2枚。结果证明,在10～12月,从情期的9～15d开始,采用FSH恒量法或FSH减量法对3～5岁的关中奶山羊进行超排可获得更好效果。     

秦川牛天然免疫力相关巨噬细胞蛋白1基因(Nramp1)N端序列的原核表达及纯化

为了研究牛天然免疫力相关巨噬细胞蛋白1(Nramp1)的功能,探求转基因抗胞内感染菌牛新材料创制的功能基因,本实验应用RT-PCR方法从秦川牛(Bos taurus)外周血中扩增出Nramp1编码基因N端序列,并将其克隆到pMD18-T simple载体,酶切后连接于pGEX-4T-1表达载体,命名为pGEX-N2。将重组质粒pGEX-N2转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳检测GST-Nramp1-N融合蛋白表达,并筛选最佳诱导条件,用谷胱甘肽Sepharose4B介质分离纯化该融合蛋白。结果表明,牛Nramp1N端编码序列长186bp,与GenBank中的相应的牛基因序列(U12862.1)对比存在一个碱基差异,致使其编码的第49位氨基酸为丙氨酸。构建的牛Nramp1N端表达重组质粒pGEX-N2,于35℃、0.1mmol/LIPTG、诱导10h,在大肠杆菌中高效表达,表达产物的分子量为33kD。结果为进一步研究牛Nramp1在机体抵抗胞内菌感染中的作用并为利用该基因进行转基因抗病牛的培育提供了实验依据和实验材料。     

小鼠卵母细胞孤雌激活试验

应用两种激活方法(乙醇和离子霉素 6-DMAP)激活和三种培养液(CZB，KSOM，M199)对90只小鼠卵母细胞进行了孤雌激活研究。结果显示，离子霉素结合6-DMAP的激活效果高于乙醇；三种培养液中，以CZB激活效果较为理想。在随后的卵母细胞发育率方面，CZB、KSOM和M199三者之间的差异极为明显，以CZB最高，KSOM次之，M199的发育率最低。     

人胰岛素样生长因子Ⅱ基因的克隆与表达

采用RT-PCR方法成功地从人胎盘组织扩增出hIGF- 基因。将其连入表达载体pET30a(+)质粒中,SDS-PAGE结果证明,pET30a(+)-hIGF- 在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,目的蛋白占总菌体蛋白35%左右。     

人溶菌酶基因cDNA的克隆和序列分析

根据GenBank中的人溶菌酶(hLYZ)mRNA序列设计引物,以人胎盘组织总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增出长度为0.85 kb的hLYZ cDNA序列,经过序列测定表明所克隆的片段与已发表的hLYZ cDNA序列的同源性为99%。推导的氨基酸序列经blastp分析与人溶菌酶蛋白质前体的同源性为97%,成熟肽的同源性为99%,为进一步构建人溶菌酶基因乳腺特异性表达载体奠定了基础。