PCV2感染猪各组织病毒载量与细胞内质网应激和自噬相关性

通过对PCV2阳性猪剖检,采集了心脏、肝脏、肾脏、肺脏、肾脏、大脑、肠、胃等组织样品,使用定量PCR(qPCR)对PCV2衣壳蛋白Cap基因、ERS和自噬标志基因进行定量分析。结果显示,肺脏中PCV2载量最高,其次为肝脏和肾脏含有较多病毒,小肠、心脏与大脑中病毒载量较少,胃内并未检测到PCV2。ERS和自噬在肺脏中发生最多,其次为小肠,再次为肝脏和肾脏,ERS和自噬水平较高,心脏与大脑中仅发生少量ERS与自噬,而在胃中几乎没有发生。通过透射电子显微镜观察心脏、肝脏、肾脏、肺脏、大脑、肠等组织样品。观察结果显示,所有器官中均可观察到PCV2感染,除肺脏内含量较多外其余各组织中差异不大。各组织中均可见不同数量的自噬小体与内质网应激,其中以肺脏内数量最多,其次为肠道,其余各组织中数量差异不大。电镜观察结果与qPCR检测结果一致,肺脏为病毒载量最大的器官同时也是ERS与自噬发生最多的器官,胃中几乎无病毒感染同时也几乎没有ERS与自噬发生。试验结果表明,除了小肠以外的各组织中ERS与自噬发生情况均与PCV2载量成正相关。为深入研究PCV2诱导细胞ERS和自噬的机制提供了新的理论依据。     

猪瘟病毒E2基因的哺乳动物细胞表达

利用PCR技术扩增出猪瘟病毒主要结构蛋白E2基因的全序列,将其克隆到真核表达载体PEGPF-C1中,获得重组质粒PEGPF-E2,经PCR,酶切鉴定和序列分析证明目的基因的大小、插入位置和读码框完全正确。利用脂质体将阳性质粒PEGFP-E2转染入猪肾来源的细胞PK-15中,G418筛选出阳性的细胞克隆,通过PCR证明E2基因存在于筛选出的阳性细胞克隆中。利用荧光倒置显微观察阳性细胞发现有融合蛋白的表达,利用夹心ELISA猪瘟病毒抗原检测试剂盒检测证明表达的融合蛋白为猪瘟病毒E2基因编码蛋白。     

猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR快速鉴别检测方法的建立

【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测后发现,利用该方法可以从中分别检测出CSFV强毒和疫苗毒。【结论】建立了可鉴别检测CSFV强毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR方法,为猪瘟的早期诊断及疫苗免疫猪和野毒感染猪的鉴别提供了技术参考。     

屠宰生猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为调查屠宰生猪副猪嗜血杆菌（Hps）的隐性感染情况,本研究从陕西省某规模化生猪屠宰场采集80份病变肺脏,应用PCR方法进行Hps核酸检测,无菌取阳性肺脏,通过平板划线分离获得疑似Hps,进一步对分离菌进行形态观察、培养特性分析、卫星现象观察、生化试验和分离菌核酸片段序列分析,纯化获得Hps分离菌;用药敏纸片法分析Hps分离菌株对常用药物的敏感性。结果显示,从80份病变肺脏中检出39份Hps阳性,阳性率48.75%（39/80）;从39份Hps阳性肺脏中分离获得3株疑似Hps,分离菌在显微镜下呈革兰氏阴性、短杆状;在添加有胎牛血清和NAD的TSA平板上生长良好;在金黄色葡萄球菌周围呈现出典型的"卫星现象"生长;能发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、麦芽糖和阿拉伯糖,不发酵甘露醇;PCR扩增序列与Hps同源性在98%以上。药物敏感性试验结果显示,3株分离菌对环丙沙星、恩诺沙星和氟苯尼考等抗菌药物高度敏感,对青霉素、林可霉素和甲氧苄啶等抗菌药物耐药。本研究获得的Hps分离株为疫苗研制提供了基础材料,为生猪养殖场选择敏感药物防控Hps感染提供了参考依据。     

增益素对鸡细胞免疫功能的影响

给8周龄鸡人工感染传染性法氏囊病病毒(IBDV),破坏鸡的法氏囊器官,从而造成鸡的免疫缺陷。在9周龄时,实验组1饲喂增益素,实验组2接种鸡新城疫(ND)油乳剂疫苗,通过测定淋巴细胞转化率来监测细胞免疫效果。结果表明,饲喂过增益素的鸡外周血T淋巴细胞活化指数增加的百分数高于仅接种ND疫苗的鸡(P<0.01),说明增益素对感染了传染性法氏囊病病毒的鸡细胞免疫有增强作用。     

水通道蛋白在动物疾病发生过程中的作用研究进展

水通道蛋白(AQP)是细胞上存在的一种膜孔道蛋白.动物、植物、微生物细胞上均有水通道蛋白的表达,其主要功能是参与机体的水与电解质代谢.近年来,针对水通道蛋白在机体所发挥的功能方面研究较多,发现水通道蛋白不仅参与机体生理方面的调控,而且在一些疾病的发生发展过程中也发挥重要的作用.综述概括了水通道蛋白在脑、肺、肾脏、肠道等...     

牦牛源副乳房链球菌的分离鉴定及部分生物学特性分析

从青海省某养殖场牦牛肺脏中分离出3株细菌,通过生化试验、16S rDNA序列分析、小鼠致病性试验和药敏试验检测.结果发现,这3株细菌为革兰氏阳性链球菌,与副乳房链球菌(Spu)同源性为99％;分离株在TSA琼脂培养基上呈光滑圆形,半透明的菌落,在血琼脂上呈α溶血;其中Spu-1分离株对小鼠具致病性;药敏试验显示,分离菌...     

猪圆环病毒2型分离株优势基因型分析与检测

为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)流行株基因型的变化,本研究对1999年～2009年NCBI中登录的556个PCV2分离株全基因序列进行分析。结果表明,1999年～2002年所登录的PCV2的优势流行毒株为基因A型(PCV2A);从2003年开始基因B型(PCV2B)逐渐为优势流行毒株,在PCV2分离株中基因B型所占比例,2004年为95.4%,2007年～2009年均超过76.0%。2003年～2009年国内的PCV2分离株有287个,其中250个为PCV2B,37个为PCV2A,表明PCV2B是国内猪群中的主要优势毒株。通过建立PCV2A和PCV2B PCR检测方法,对70份临床病料的检测显示,PCV2检出率为34.29%(24/70),基因型均为PCV2B,无PCV2A的检出,表明PCV2B为检测猪群中的主要优势毒株。     

人工感染猪支原体肺炎的病理学观察

用猪肺炎支原体人工感染仔猪。发病猪临床表现轻度咳嗽和气喘。尸体剖解可见肺呈心叶、尖叶、中间叶和膈叶边缘胰样变,支气管淋巴结肿胀,切面湿润;右心室肥大、心包积液;肾脏稍肿大,色褐黄;肝脏轻度肿大,色泽较黄。病理组织学变化为细支气管周围有淋巴细胞增生,形成"管套"或结节,肺泡壁上皮细胞变性、坏死;肝细胞、肾小管上皮细胞颗粒变性。     

端粒酶基因转染猪气管黏膜上皮细胞增殖特性的研究

为了研究外源性端粒酶(hTERT)基因导入后对原代培养猪气管黏膜上皮细胞(STECs)增殖活性的影响,试验将外源性hTERT基因转染至原代分离培养的STECs中,以脂质体法用重组质粒pCI-neo-hTERT转染STECs;通过倒置显微镜观察细胞形态,间接免疫荧光法鉴定8型角蛋白的上皮源性;用PCR和Western-blot法检测转染后STECs中hTERT基因的表达情况;用MTT法和流式细胞仪分别检测转染细胞的活力和增殖周期。结果表明:脂质体和质粒体积比会影响转染效率,当二者比例为1∶3时,转染效率最佳;转染细胞经PCR扩增得到大小为461 bp的片段,Western-blot检测得到大小为125 ku的条带;转染后的细胞仍然符合上皮源性细胞的生长特点;细胞活力曲线显示,在接种后的第3～5天细胞增殖速度最快;细胞周期测定显示,转染细胞的细胞核型为2倍体,S期细胞达到48.35%。说明原代培养的STECs转染外源性hTERT基因后,细胞增殖活性增高,并保持了基本的细胞生物学特征,有进一步建立稳定传代细胞系的可能。