NDV和IBV感染对肉鸡大肠杆菌病发病的影响

为了解新城疫弱毒苗和传染性支气管炎弱毒苗接种对肉鸡大肠杆菌病发病的影响。对8日龄肉仔鸡用不同剂量NDVclone-30株或IBV-H120株进行滴鼻及饮水,48h后相同途径接种2株不同“O”血清型的致病性大肠杆菌。结果表明,致病性大肠杆菌单独接种鸡死亡率在20%-25%之间,而NDVclone-30株或IBVH120株与致病性大肠杆菌联合接种鸡死亡率有明显增加达40%-75%。     

9种中药成分对猪传染性胃肠炎病毒体外增殖的抑制作用

运用MTT法结合细胞病变方法测定黄芩苷、穿心莲内酯、大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素甲醚、苦参碱、氧化苦参碱和苦马豆素9种中药成分对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在ST细胞上增殖的抑制作用,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)进一步检测黄芩苷对TGEV在ST细胞上增殖的抑制作用。结果显示,9种中药成分在体外对TGEV在ST细胞上的增殖均有一定的抑制作用,其中黄芩苷对TGEV的生物合成、吸附保护和直接灭活作用的抑制率分别为58.23%、88.12%和100.00%;Real-time PCR检测黄芩苷3种给药方式均能在转录水平显著降低TGEV mRNA的相对表达量,与病毒对照组相比差异极显著(P0.01)。结果表明,9种中药成分在体外对TGEV在ST细胞上的增殖均有一定的抑制作用,以黄芩苷作用最好。     

增益素对免疫鸡体液免疫功能的影响

以雏鸡为试验动物模型，研究增益素对免疫体液免疫功能的影响。试验鸡分为饲喂增益素和不饲喂益素2组。分别于接种前（0d)、接种后3、10、15、21和27d测定鸡新城疫HI抗体效价；接种后28d进行攻毒保护试验，统计各组鸡的发病率和死亡率，结果表明，增益素对疫苗免疫鸡 体液免疫功能有明显的增强作用。     

猪Jiv基因的克隆表达与多克隆抗体制备

【目的】克隆猪Jiv蛋白核心区的2 112bp的基因片段,构建其原核表达载体后进行蛋白的表达和纯化,制备抗猪Jiv蛋白的多克隆抗体。【方法】利用RT-PCR方法,从猪脾脏组织RNA中扩增得到猪Jiv基因,将其克隆到pMD19-T载体并测序,以此为基础构建原核表达载体pET32a-Jiv,转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,利用IPTG诱导表达,获得大量包涵体形式的猪Jiv融合蛋白。通过镍离子螯合层析柱对表达的目的蛋白进行纯化,对纯化后的包涵体蛋白进行透析复性,以每只新西兰白兔400μg蛋白的初次免疫剂量和500μg蛋白的加强免疫剂量进行免疫,共免疫5次,采集血清,采用间接ELISA法检测抗体效价达到一定水平后,收集抗体,利用Western blot检测抗体特异性。【结果】克隆得到长度为2 112bp的猪Jiv基因片段;构建的pET32a-Jiv在E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中经诱导后高效表达,SDS-PAGE结果显示,纯化得到分子质量约为95ku的猪Jiv融合蛋白;测得的猪Jiv蛋白多克隆抗体效价达1∶6 400;Western blot检测结果证实,所获得抗体能够有效地应用于猪Jiv蛋白抗原的检测。【结论】成功地克隆了猪Jiv基因,制备了抗猪Jiv蛋白的多克隆抗体。     

猪瘟病毒E2基因自杀性DNA疫苗的构建及动物免疫试验

从含有猪瘟病毒(CSFV)Shimen株E2全长基因的重组质粒pMD18-T-E2上扩增得到带有BamHⅠ酶切位点的E2基因片段,构建重组克隆质粒pMD19-T-E2.用BamH Ⅰ酶切pMD19-T-E2和"自杀性"DNA疫苗表达载体pSCA1,构建"自杀性"DNA疫苗重组质粒pSCA1-E2.对目的基因E2的大小、插入位置、方向和读码框经PCR、酶切和序列测定进行鉴定.用纯化的阳性质粒pSCA1-E2转染PK-15细胞,转染后48 h荧光抗体法检测E2蛋白的表达;纯化的pSCA1-E2质粒分别免疫小鼠(10 μg/只)和试验猪(600μg/头),二免后分别检测小鼠脾淋巴细胞刺激指数和猪血清抗猪瘟特异性抗体水平.结果表明,构建的重组质粒中E2基因的大小、插入位置、方向和读码框均正确,获得了重组表达质粒pSCA1-E2;转染后48 h可检测到转染的PK-15细胞中E2蛋白的表达.免疫小鼠产生较高水平的淋巴细胞刺激指数,免疫猪可检测到抗CSFV特异性血清抗体;表明构建的pSCA1-E2重组质粒能激发实验动物的免疫反应.     

奶牛乳头专用消毒剂消毒效力研究

通过对MEDPH奶牛乳头专用消毒剂进行实验室消毒试验、现场消毒试验及同类产品的对比试验,测定了其杀菌效果。实验室消毒试验表明,MEDPH奶牛乳头专用消毒剂使用液(含有效碘0.04％)对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌的最低杀菌浓度分别为0.01％(使用液4倍稀释)、0.01％(使用液4倍稀释)、0.02％(使用液2倍稀释);最快有效时间为15s,杀菌率达99.99％,杀灭指数大于10 4。现场消毒试验表明,该消毒剂使用液对奶牛乳头表面细菌杀菌率达99.99％,杀灭指数大于10 4,且对奶中乳头无不良反应,安全可靠。对比试验表明:其杀菌效果和使用效果均优于"碘伏",与"滴宝"效果相当。     

腹泻仔猪肠道菌群的ERIC-PCR指纹图谱分析

【目的】分析腹泻仔猪周围环境菌群变化规律,为仔猪腹泻的诊断和治疗提供支持。【方法】采集健康对照和腹泻仔猪粪便、口腔以及产床和母猪乳头等样品,采用ERIC-PCR技术分析其菌群结构特征,并对粪便样品中的细菌进行分离和鉴定。【结果】对照组4类样品细菌ERIC-PCR指纹图谱十分相似,腹泻组各类样品之间电泳条带差异较大,出现了异常亮度的电泳条带,与对照组优势条带位置不同,其中口腔和母猪乳头部位电泳条带数显著低于对照组(P0.05),菌群多样性指数降低,优势度指数升高。从粪便样品中分离出2株可疑菌株b1和b2,细菌染色和生化试验初步证明分离株b1和b2分别符合大肠杆菌和奇异变形杆菌的特征;利用ERIC-PCR技术分析分离株b1和b2的指纹图谱,发现分离优势细菌的ERIC-PCR指纹图谱包含于粪便样品的ERIC-PCR图谱中,证明样品的ERIC-PCR指纹图谱能够反映出优势菌群的特征;测序结果显示,分离株b1与大肠杆菌基因组同源性为99%,分离株b2与奇异变形杆菌基因组同源性为98%。【结论】腹泻仔猪周围环境菌群发生明显变化,ERIC-PCR技术可以快速、准确地监测和诊断菌群结构的变化,有助于细菌性仔猪腹泻的诊断和治疗。     

动物性食品中抗菌药物残留检测方法研究进展

抗菌类药物在预防、治疗动物疾病中发挥了重要的作用,但不规范用药、超剂量用药甚至滥用,使动物性食品中抗菌类药物残留问题日益突出,引起人们的广泛关注。对动物性食品中抗菌类药物残留的检测是判定其安全性的重要内容,根据检测的目的和需要,可将检测方法分为现场检测和实验室检测。胶体金免疫层析法是目前使用最广的现场检测方法;实验室检测方法众多,又可分为抗菌类药物残留的定性检测法和定量检测法,前者主要包括2,3,5-三苯基氯化四氮唑法（TTC法）、纸片法（PD法）、活性检测法等,后者主要包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、超高效液相色谱-质谱联用法、毛细管电泳法、生物传感器法和免疫分析法等,可满足不同检测目的和实验条件的需要。作者对肉、蛋、奶中抗菌类药物残留的现场检测和实验室检测技术进行了总结,为更进一步研究快速、敏感、高通量、成本低廉的食品中抗菌类药物残留检测方法奠定理论基础。     

杨凌及其周边地区猪群中猪瘟抗体水平监测

对杨凌及其周边地区猪群中猪瘟免疫情况进行了调查,并采取54份血样,利用间接ELISA检测猪瘟抗体水平.调查发现,绝大部分养殖户对猪瘟都有较为严格的防疫措施,但也有部分养殖户不够重视,没有进行疫苗免疫接种.血清检测结果表明,免疫猪的猪瘟抗体阳性率为40%;未免疫猪阳性率为30%;屠宰用猪阳性率为47.06%;所有检样总阳性率为37.03%.说明杨凌及其周边地区猪群中猪瘟抗体水平偏低,应及时进行免疫接种及加强抗体监测.     

有效微生物群对仔猪生产性能的影响初探

对产后母猪和断奶仔猪饲喂有效微生物菌群(EM),研究其对仔猪生产性能的影响。从产前7d开始给母猪基础饲料中添加5mL/kg的EM菌液,选产仔数不少于8头的3头母猪及其仔猪连续饲喂EM菌28d,仔猪进行断奶,统计母猪的增重、仔猪初生重、断奶重,仔猪成活率等,分析添加EM菌后对母猪生产性能的影响。在这24头断奶仔猪饲料中添加EM菌的饲料,饲喂至60日龄,统计仔猪的增重、采食量、料重比、发病数等,分析EM菌断奶仔猪生产性能的影响。另外选取3头同品种、同批次生产、产仔数相同的母猪及其仔猪饲料中不添加EM菌作为对照。结果表明,母猪产后日均采食量较对照组提高12.07%,仔猪的初生重较对照组提高15.90%,产活仔数提高了12.09%,断奶重增加9.09%,断奶头数增多20.99%,断奶成活率提高8.81%。断奶后仔猪试验组的平均采食量较对照组提高10.26%,料重比降低了7.14%,发病率下降了50.03%。说明EM菌对母猪和仔猪的生产性能均有提高作用,研究结果为EM菌在生猪养殖中的应用提供了基础资料。