复方中药提取物对REV诱发的免疫抑制鸡的免疫增强作用

 【目的】探讨复方中药提取物对REV诱发的免疫抑制鸡的免疫增强作用,建立测试某些中药制剂免疫增强作用的实验模型。【方法】分别在临床健康鸡和在1日龄感染网状内皮增生病病毒（REV）诱发了免疫抑制状态的鸡测试了中药制剂对鸡的免疫增强作用。【结果】随饮水饲喂黄芪、党参、淫羊藿和甘草复方中药浸出物,在健康鸡对鸡新城疫病毒（NDV）和H5亚型禽流感病毒（H5-AIV）灭活疫苗免疫后的血凝抑制（HI）抗体滴度没有明显影响。但是在REV诱发了免疫抑制的鸡,该中药浸出物可显著提高对NDV和H5-AIV的HI抗体滴度（P＜0.01）,虽然仍显著低于未经REV感染的对照鸡。【结论】REV诱发的免疫抑制状态下的鸡,可作为测试某些中药制剂免疫增强作用的一种实验模型。     

超低温冷冻保藏法在菌种保藏中的研究

菌种在工业发酵生产中对生产水平具有决定性的作用,在生产中一个合适的菌种保藏方法也很重要。超低温冷冻保藏法通过AIDCS测控系统把超低温冰箱的测温装置连接到电脑上,进行实时在线监测冰箱内温度,进行在线温度记录。通过菌种验证对比得出超低温冷冻保藏法具有保存时间长、保存费用低、不容易发生变异、利于操作的特点。得出这种方法在菌种保藏中值得推广。     

复合益生菌对宠物猫肠道健康的影响

<正>随着宠物受到越来越多家庭的喜爱,宠物数量日渐庞大,宠物的疾病问题也日渐凸显,宠物个体健康和生活质量不容忽视。由于我国宠物治疗技术和手段尚未成熟,时有抗生素滥用的情况发生,尤其是在治疗细菌感染时。滥用抗生素一方面容易使细菌产生抗药性,进化出“超级细菌”,另一方面,过度的抗生素残留还会破坏宠物肠道的菌群平衡,对宠物肠道产生有害刺激,可能导致便秘、拉稀、消化不良等肠道疾病,威胁到宠物健康。随着人们对抗生素的正确认识,宠物微生态制剂因安全无毒、无副作用,可作为兽药和宠物食品添加剂,并逐渐受到人们的重视。     

不同卡介苗(BCG)免疫剂量和接种的小鼠日龄对牛羊结核病的免疫保护和IFN-γ/ IL-4表达的影响

选用BalB/C乳鼠和成年BalB/C小鼠进行卡介苗（bacillus calmette-guerin, BCG）接种, 攻毒后用体外培养法观察脾细胞内病原生长特性以及用enzyme-linked immunospot (ELISPOT)方法检测脾细胞诱导表达γ-干扰素（interferon -γ,IFN-γ）和白细胞介素-4（interleukin -4,IL-4）的变化。结果显示,低剂量（2×103 cfu）BCG对7日龄乳鼠可产生100%的免疫保护,高剂量（4×104 cfu）BCG产生75%的免疫保护;而低剂量（2×103 cfu）BCG对35日龄小鼠产生的免疫保护为67%。低剂量（2×103 cfu）BCG诱导乳鼠产生以IFN-γ为主的Th1类细胞免疫反应明显增强,以IL-4为主的Th2类免疫反应降低;而高剂量（4×104 cfu ）BCG诱导产生的IFN-γ/IL-4均增多。低剂量（2×103 cfu）BCG接种诱导35日龄小鼠产生的IFN-γ/IL-4亦均增多。结果表明,卡介苗BCG对小鼠的保护率与BCG免疫剂量和免疫动物日龄间存在紧密的相关性,这种差异可能与BCG诱导产生的Th1/Th2类细胞免疫反应的变化有关。     

不同剂量CpG-ODN佐剂与ALV-Jgp85重组蛋白联合免疫诱导种母鸡血清抗体和母源抗体的比较

为比较不同剂量非甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)免疫佐剂与J亚群禽白血病病毒(Subgroup J Avian leukosis virus,ALV-J)gp85重组蛋白联合免疫后诱导母鸡血清抗体和母源抗体的效果,利用原核表达系统制备包含gp85基因的重组蛋白作为免疫原,与不同剂量CpG免疫佐剂联合接种成年海兰褐父母代种母鸡(Gallus domesticus),首免后2周加强免疫一次,于接种前和接种后每周动态检测血清抗体,接种后部分鸡只每周收集种蛋,检测卵黄抗体。结果显示,利用原核表达系统制备的gp85重组蛋白能与ALV-J单克隆抗体JE9特异性结合;与3个不同剂量CpG联合免疫成年种母鸡后均诱导鸡只产生一定效价的血清抗体,首免后28 d效价最高;所诱导的卵黄抗体效价首免后第4周最高。其中以50μg/羽剂量的CpG联合重组蛋白接种鸡只诱导的血清抗体和卵黄抗体效价和阳性比例最佳,100μg/羽剂量的CpG次之。3个不同剂量的CpG与ALV-J gp85重组蛋白联合免疫均能诱导母鸡产生一定的血清抗体和卵黄抗体,50μg/羽剂量的CpG联合免疫的效果明显优于较高剂量的免疫效果。本研究为使用CpG联合ALV-J gp85重组蛋白诱导母鸡产生母源抗体,阻断ALV-J早期感染提供科学依据。     

日粮添加大豆黄酮对去势仔猪生长性能及有关内分泌的影响

断奶仔猪 (公母均去势 )随机分为对照组和实验组 ,分别饲喂基础日粮和基础日粮添加 5mg/kg日粮的大豆黄酮 ,试验期持续一个月。与对照组相比 ,实验组的增重和饲料利用率均有所改善 ,但存在明显的性别差异 :雄性去势仔猪增重提高 5 9.15 % (P <0 .0 1) ,但雌性去势仔猪低 2 6 .39% (P <0 .0 5 ) ;血液胰岛素样生长因子 (IGF I)含量平均提高 2 6 .6 0 % (P <0 .0 5 ) ,公、母分别为提高 5 0 .91%和降低 9.6 6 % ;睾酮含量提高 17.4 6 % (P <0 .0 5 ) ,其中雄性提高 18.4 1% ,而雌性降低 6 .86 % ;血钙含量提高 11.78% (P <0 .0 5 ) ,其中雄、雌分别提高 17.92 % (P <0 .0 5 )和 6 .4 7%。上述实验结果表明 ,大豆黄酮对去势仔猪生长和有关激素状态表现明显的性别差异性。能够显著促进去势仔公猪生长和睾酮、IGF I分泌 ,而对雌性去势仔猪则起抑制性影响     

山东省肉种鸡群三种家禽肿瘤性疾病流行病学调查

为调查山东省家禽肿瘤性疾病的流行情况,本研究以血清学、病理组织学、免疫组织化学、病原学等检测手段,在山东省境内17家AA种鸡场进行检测.血清学试验结果显示:马立克氏病病毒(MDV)平均抗原阳性率为1.87%;禽白血病病毒J亚群(ALV-J)和网状内皮组织增生症病毒(REV)平均抗体阳性率分别为9.52%和39.78%;双重及三重感染,MDV+ALV-J、MDV+REV、ALV-J+REV及MDV+ALV-J+REV感染率分别为1.12%、1.21%、3.92%和0.65%.对57羽疑似肿瘤病的病鸡检测显示:MDV、ALV-J和REV的抗体阳性率分别为19.3%、47.37%和57.89%;MDV+ALV-J、MDV+REV和ALV-J+REV的双阳性率分别为1.75%、3.5%和19.3%;无三重感染.病理组织学观察显示:病鸡体内既有各病毒引起的单纯肿瘤,也有双重肿瘤共存的现象.免疫组织化学检测显示,MDV、ALV-J和REV抗原阳性信号在病鸡中的比例分别为38.6%、54.39%和28.07%.PCR检测结果表明:MDV、ALV-J和REV的阳性率分别为43.86%、64.91%和33.33%;MDV+ALV-J、MDV+REV、ALV-J+REV和MDV+ALV-J+REV阳性率分别为15.79%、10.53%、12.28%和7.02%.本研究结果表明,山东省境内AA肉鸡群中仍存在较高的肿瘤性病毒感染率.     

山羊β雌激素受体多克隆抗体的制备及免疫组化方法的建立

本研究旨在克隆济宁青山羊雌激素受体β(ERβ)基因,进行原核表达,制备多克隆抗体,建立免疫组化分析方法,检测济宁青山羊卵巢和子宫内ERβ分布。根据GenBank发布的绵羊ERβ基因序列设计一对引物,应用RT-PCR方法从济宁青山羊卵巢组织中扩增ERβ部分基因。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体pET32a(+),构建重组表达载体pET32a(+)-ERβ,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定;经Ni-NTA纯化融合蛋白后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并检测抗体效价及特异性;使用该抗体检测济宁青山羊卵巢和子宫组织细胞中的ERβ分布。结果表明,成功扩增出ERβ部分基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量约为53ku的融合蛋白;Western blotting证明该融合蛋白能与兔抗人的ERβ多克隆抗体特异性反应。制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1∶213,以此抗体代替购置的标准兔抗人ERβ抗体,进行Western blotting反应,特异性良好;使用该抗体建立免疫组化方法检测结果表明济宁青山羊卵巢颗粒细胞和子宫内膜上皮细胞、平滑肌细胞存在ERβ的分布。本研究获得特异性兔抗山羊ERβ多克隆抗体,使用该抗体建立免疫组化方法首次报道了济宁青山羊卵巢和子宫ERβ的分布表达,为进一步研究β雌激素受体的生物学功能奠定了方法学和形态学基础。     

截短侧耳素的萃取及结晶

研究截短侧耳素的萃取和结晶。截短侧耳素闪蒸粉分别用甲醇、乙醇和K酮在20℃、40℃和60℃条件下萃取,萃取时间60min,比较萃取率;60℃的K酮饱和溶液,分别降温至50℃、45RE和40℃,加入晶种保温3h,然后以5-8℃／h的速度降温至0℃,然后保温2h,离心获得晶体,50℃干燥1h,获得截短侧耳素粉,分析干燥失重、含量、杂质和收率。K酮在60℃时的萃取率最高,均值为92％;40℃加入晶种保温3h获得产品收率最高95．01％。K酮为更加理想的截短侧耳素萃取剂,萃取温度60℃,晶体成长的第一过程选择40℃。     

不同组织样品或检测方法对ALV检测结果的影响

本研究探讨不同检测方法或样品等因素对ALV检测结果的影响,为建立我国种鸡场禽白血病净化检测和临床鉴别诊断方法提供科学依据.我们对从我国不同种禽场获得的蛋清和泄殖腔棉拭子进行ALV抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)比较检测;对上述不同检测结果区间的鸡只使用细胞培养分离病毒方法进行比较检验检测;对血清、血浆和蛋清样品使用DF1细胞和CEF进行病毒分离比较检测.结果,使用泄殖腔棉拭子和蛋清检测ALV P27的ELISA之间存在高度相关性,且蛋清检测更为灵敏(线性关系方程为y(蛋清)=1.3765X(泄殖腔)+0.0363,相关系数为0.9588).ELISA直接检测值(S/P值)不小于1.5(蛋清)或2.0(泄殖腔棉拭子)的鸡只,分离外源性ALV的比例为100％;检测值不小于1.0(蛋清)或1.5(泄殖腔棉拭子)的鸡只,病毒分离比例在90％以上;检测值为0.2以上的鸡只,病毒分离比例仅为59％(蛋清)和32.4％(泄殖腔棉拭子);而且,至少10％得检测值小于0.2的鸡只仍能用细胞分离到病毒;另外,对相同鸡只,使用蛋清分离病毒的比例为21％,而血清为8.5％;从相同蛋清中使用DF1细胞分离病毒的比例为27.84％,而CEF为17.53％.结果表明,蛋清较泄殖腔棉拭子ELISA检测更敏感;90％以上检测值在1.0(蛋清)或1.5(泄殖腔棉拭子)以上的鸡只,使用DF1细胞能够分离病毒;比较发现蛋清较血清,DF1细胞较CEF分离检测病毒更敏感.该研究结果结论对在我国种鸡群实施ALV净化建立包括泄殖腔棉拭子或蛋清进行ALV P27抗原ELISA检测以及细胞分离ALV方法相结合的综合检测方法提供科学依据.