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将AsiaⅠ型FMDV全衣壳蛋白P12A基因插入到带有蜂毒溶血肽信号序列的杆状病毒转移载体pMel-Bac中,构建重组转移载体pMel-P12A。然后将含有目的基因的转移载体与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。以感染复数(MOI)10的重组病毒感染Sf9细胞,72h后收获细胞,经Western blotting、间接免疫荧光检测,结果表明P12A基因在昆虫细胞中获得表达,相对分子质量约82ku,与预测蛋白大小一致,且能被FMDV阳性血清所识别。免疫荧光检测表明表达蛋白主要集中在细胞膜部分。夹心ELISA检测结果表明一部分表达蛋白分泌至培养基中,而有一部分蛋白仍在细胞中未能分泌。表达蛋白加入等量佐剂乳化后免疫豚鼠,间接ELISA检测结果表明豚鼠免疫后15d即产生了特异性FMDV抗体。本研究为空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究进行了有益的探索。 相似文献
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利用PCR方法扩增到VP1基因,序列测定后利用Mega4.0、swiss—model、GOR4和RasMol软件预测了VP1基因的二、三级结构。将VP1基因融合EGFP基因后定向克隆入PcDNA3.1(+)真核表达载体,构建正确的重组质粒命名为PVP1E,在脂质体介导下将PVP1E质粒转染BHK-21细胞,WesternBlotting试验证实VP1基因成功表达,经DAPI细胞核染色后在共聚焦显微镜下观察VP1亚细胞定位。结果表明本研究预测了VP1基因的二、三级结构,其在BHK-21细胞中呈现以细胞核为主的弥散性分布,VP1基因亚细胞定位及结构预测为进一步深入探究AsiaI型FMDVVP1结构和功能提供丰富的资料。 相似文献
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根据口蹄疫病毒(FMDV)china99流行毒株基因序列设计特异引物,以阳性质粒pGEM—p1为模板,扩增p1基因。p1片段经Nco1和Xho1酶消化后,得到目的基因VP2—3—1,将其与经相同酶消化的表达载体pProEx—HTb连接并转化BL21(DE3),经PCR、酶切鉴定和序列分析筛选阳性克隆,经IPTG诱导后SDS—PAGE检测,结果表明VP2—3—1基因得到表达;Western blotting结果显示,该表达蛋白能被口蹄疫病毒阳性血清所识别。 相似文献
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拟合闽北杉木干形曲线的三次样条函数的节点选择 总被引:1,自引:0,他引:1
收集闽北杉木解析木材料,运用统计学的知识并结合计算机技术,用三次样条函数拟合杉木干形曲线,以样本相关系数均值为主要评价指标,筛选出拟合杉木干形曲线的三次样条函数的节点,即从树干基部算起,依次为树高的0,10%,15%-20%,50%-60%,80%-85%和100%处。经3处方案的拟合比较和实例验证,结果表明所选节点的似合效果明显优于用传统经验节点的拟合效果;所选节点整体拟合精度高,适应性好,能够全面确切反映杉木完整形状。表4参8 相似文献
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药用植物半夏生物碱类成分研究进展 总被引:3,自引:0,他引:3
生物碱为半夏药理作用的主要有效成分之一,具有镇咳、祛痰、止呕、抗心律失常、抗炎等作用,在抗癌和对帕金森病的防治方面也有重要作用。文章对近5年来有关半夏生物碱的含量分布、代谢调控及相关药理研究进展进行了综述,并对相关研究现状进行了展望,以期为半夏生物碱类成分的开发利用提供参考依据。 相似文献
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