FcRn介导Fc与金黄色葡萄球菌毒力因子融合蛋白跨细胞转运至局部免疫触发位点

为了探究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌毒力因子的重组蛋白能否经上皮屏障被转运至特定的乳腺局部免疫触发位点,本研究对金黄色葡萄球菌毒力因子重组蛋白FnBPB-ClfA和Fc融合蛋白Fc-FnBPB-ClfA的跨细胞转运机制、新生儿Fc受体(FcRn)是否参与此进程进行了验证。原代奶牛乳腺上皮细胞(pbMECs)接种于Transwell嵌套内的多孔膜上,培养至极性状态且细胞屏障完整,用于胞吞转运试验。将pbMECs对重组蛋白的胞吞转运试验设置为温度处理组(37℃和4℃)、蛋白A处理组、胞转途径抑制剂处理组。结果表明,2种重组蛋白均可被转运跨过pbMECs屏障,该转运作用呈温度依赖性,可能与囊泡介导的转运路径及FcRn受体有关,排除了细胞旁路扩散的可能。蛋白A对FnBPB-ClfA的跨细胞转运及亚细胞定位无明显影响,但明显减少了Fc-FnBPB-ClfA的跨细胞转运及其在细胞膜蛋白、骨架蛋白中的数量,说明Fc-FnBPB-ClfA的Fc与FcRn的结合在胞吞转运作用中发挥重要作用。LY294002、非律平以剂量-效应关系分别降低了FnBPB-ClfA、Fc-FnBPB-ClfA的跨细胞转运。结果表明,Fc融合蛋白Fc-FnBPB-ClfA能经胞吞转运作用跨过pbMECs屏障至局部免疫触发位点,且FcRn参与并促进了Fc融合蛋白的胞吞转运作用。     

白色瘤胃球菌DNA提取的优化试验

<正>由于纤维素酶具有降解纤维素的能力,在饲料工业上功效卓著,但是纤维素酶菌株产酶量低、活力低、成本高及储存加工影响酶稳定性等问题一直困扰着人们,所以筛选高纤维素酶活性的菌株和对菌株进行生物技术的改造是人们研究的主要方向之一。反刍动     

奶牛环境性乳房炎临床分离株免疫原性分析

试验选择2株大肠杆菌(A1、A2)及2株克雷伯菌(K1、K2 )对其菌体蛋白图谱和全菌抗原转印图谱进行了研究,用建立的全菌包被ELISA试验检测兔血清中抗体水平和交叉保护性,筛选到2株具有典型抗原谱、保护性抗原全面的菌株.     

鸡败血霉形体致病性研究

本项研究以内蒙古地区分离株ＭＧ－Ｈ３和ＭＧ－ＢＲ１作为研究对象,以ＭＧ－Ｓ６作为参考对象,分别对２０ｄ龄雏鸡进行人工感染,８ｄ后以ＩＰ－Ｈ１２０作激发感染。结果试验鸡全部发病,呈现血清学反应阳性并伴有较明显的临床症状,病理剖检以呼吸道病变为主,心、肝、肺等器官也发生不同程度的损伤,攻毒２０ｄ后剖检全部鸡,气囊平均病变计分Ｈ３株为２．９,ＢＲ１株为２．３,Ｓ６株为２．８。     

奶牛微生态制剂中几种益生菌生物学特性的研究

该试验对益生菌酿酒酵母、产朊假丝酵母、嗜酸乳杆菌、地衣芽孢杆菌、丙酸丙酸杆菌的生物学特性进行了研究。试验结果表明，这几种益生菌可以用于研制防治奶牛隐性乳房炎的微生态制剂。     

鸡大肠杆菌多价油乳剂

以往防治鸡大肠杆菌病主要采用抗生素,由于大肠埃希氏菌抗药性的产生,药物使用剂量越来越大,造成禽产品中抗生素的残留,危害人类健康,我们从1987年至今,在内蒙古中西部地区分离到鸡源致病性大肠埃希氏菌273株。经详细鉴定发现内蒙古中西部地区流行的鸡致病性大肠埃希氏菌主要是O78、O1、O2、O8、O9、和O132。因此,我们以这6株菌作为制苗菌株,进行了鸡大肠杆菌病多价油乳剂灭活苗的研制。1材料与方法1.1材料制苗菌株为内蒙古中西部地区分离的鸡源致病性大肠埃希氏菌O78、O1、O2、O8、O9和O132;肉汤培养基、甘油琼脂培养基按文献介绍的方…     

牛IgG Fc片段与FnBPB-ClfA串联表达及其对金黄色葡萄菌性奶牛乳腺炎的免疫效果

为了提高金黄色葡萄球菌(S.aureus)黏附素FnBPB-ClfA基因表达蛋白对奶牛的免疫效力,应用RT-PCR扩增奶牛IgG Fc基因片段与构建的金黄色葡萄球菌(S.aureus)FnBPB-ClfA黏附素基因串联构建质粒pMD19T-Fc-FnBPB-ClfA,并通过双酶切将其克隆于pET32a(+),以构建质粒pET32a-Fc-FnBPB-ClfA并进行诱导表达。以盐酸左旋咪唑(LH)或氢氧化铝(ALUM)为佐剂,与纯化的重组蛋白(bFcFnBPB-ClfA)混合以首次免疫肌肉注射,加强免疫乳头管灌注或首次免疫、二次免疫及三次免疫均以肌肉注射方式免疫临近干奶期的奶牛。用间接ELISA和Western blot对各组牛血清中的抗体进行监测,评价免疫效果。结果显示,以LH为佐剂免疫的(A组)牛21d时抗体水平最高,可达到1∶1 600;而以ALUM为佐剂免疫的B组和C组抗体水平分别为1∶800和1∶400。IgG水平动态监测结果表明,以LH为佐剂免疫牛的血清中特异性抗体上升趋势明显高于其他免疫组。研究结果表明,以首次免疫肌肉注射,加强免疫乳头管灌注的方式较好,并且bFc-FnBPB-ClfA与LH佐剂混合后免疫奶牛能最有效激发奶牛免疫反应。     

鸡大肠杆菌多价油乳剂灭活苗的制作

以往防治鸡大肠杆菌病主要采用抗生素,由于大肠埃希氏菌抗药性的产生,药物使用剂量越来越大,造成禽产品中抗生素的残留,危害人类健康,我们从1987年至今,在内蒙古中西部地区分离到鸡源致病性大肠埃希氏菌273株.     

乳酸菌发酵骨泥后上清液免疫增强作用的研究

本试验通过迟发型变态反应试验(足跖增厚法)、抗体生成细胞的检测(jeme改良玻片法)、小鼠碳廓清试验，观察灌服不同剂量乳酸菌发酵骨泥的上清液后小鼠的反应。结果证明：经乳酸菌发酵鲜骨泥后的上清液可以增强小鼠的迟发型变态反应，增加小鼠的抗体细胞生成数，加强其巨噬细胞吞噬能力。因此，说明此上清液具有增强机体细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫功能的作用。     

鸡毒霉形体H3株TM-1基因与鸡白细胞介素2基因串联子在大肠杆菌中的共表达

运用DNA重组技术将鸡白细胞介素2基因和鸡毒霉形体H3株TM-1基因进行串联,插入到pET-30a（＋）质粒的EcoRⅠ和HindⅢ多克隆位点间,经PCR鉴定、双酶切鉴定和序列测定,表明已成功构建了含鸡毒霉形体H3株TM-1基因和鸡白细胞介素2基因的融合基因,将含有此融合基因的重组质粒命名为pET-30a（＋）-TM-1-IL-2.将此重组质粒转化E.coli BL21（DE3）菌株.经IPTG 37℃诱导表达4 h后,SDS-PAGE电泳结果显示,此融合基因得到了表达,所表达出的融合蛋白的分子质量约为43 ku,主要以包涵体形式存在.表达产物在尿素存在下经超声波处理,获得了纯化的融合蛋白.这为进一步研究鸡白细胞介素2及鸡毒霉形体的生物学活性奠定了基础.