猪口蹄疫病毒受体β8亚基的基因克隆与分子特征

口蹄疫病毒利用整联蛋白作为病毒受体进入宿主细胞。本试验在国际上首次从口蹄疫病毒感染猪的舌皮组织中克隆到了β8亚基基因,并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比较分析。猪β8亚基基因的编码区含有2 304个核苷酸,编码767个氨基酸,其中信号肽由42个氨基酸组成,胞外域由637个氨基酸组成,含有7个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)和49个半胱氨酸残基,跨膜区由30个氨基酸组成,胞浆域由58个氨基酸组成,猪β8基因与牛、人、犬、猕猴、家鼠和挪威大鼠的β8基因核苷酸序列同源性分别为94.3%、91.4%、91.7%、91.4%、83.5%、83.5%,推导的氨基酸序列同源性分别为95.0%、91.8%、92.8%、91.5%、84.0%、84.8%。猪与牛β8亚基同源性最高。猪β8亚基存在复杂多变的二级结构,其中1-42、680-709位氨基酸区段疏水性较强,形成表面蛋白结构的可能性较小,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。本试验为进一步深入研究β8亚基在口蹄疫感染过程中所扮演的角色奠定了基础。     

RT-PCR和nested-PCR技术在猪瘟病毒检测中的应用

根据已发表的CSFV核苷酸序列，设计并合成CSFV特异性引物及nested-PCR引物对。从待检猪脾脏，淋巴组织或实验感染的细胞培养物中提取总RNA，用AMV反转录酶进行反转录后，进行PCR扩增，一扩产物再nested-PCR引物对进行二次扩增，用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。进一步将该片段纯化回收后，克隆到T载体并进行测序。测序结果同已知的CSFV、BVDV和BDV核苷酸序列进行同源性比较分析，即可快速，准确地区别于BVDV和BDV，又可以确定CSFV的血清型。该方法可有效用于猪瘟的病理学和流行病学研究。     

双峰驼诱导排卵机理的研究Ⅲ--双峰驼诱导排卵因子分布与代谢途径的研究

从公驼精清内经DEAE－DE52柱上分离的诱志排卵活性蛋白（Ovulation-inducing bioactive protein,OIP)应用^125I标记后输入母驼阴道，通过血液循环到达垂体。经测定，OIP遍布母驼体内各脏器，其中以垂体、肝脏、心脏、舌肌等浓度较高，而在眼角膜、耳尖部以及被毛中含量很少。消除半衰期长达72.6h，其代谢主要经肝胆排泄，也有部分活性蛋白通过泌尿、生殖道排泄。     

瘟病毒致细胞病变的遗传机制及其非结构蛋白的功能

牛病毒性腹泻—黏膜病病毒(bovine viral diarrhea—mucosal disease virus，BVDV)、边界病病毒(border disease virus，BDV)以及猪瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)在黄病毒家族中构成了瘟病毒属(Pestivirus)。瘟病毒是能够引起畜牧业严重损失的重要病原。这些具有囊膜的病毒粒子内包含长为9．5-12．3kb的单股正链RNA，其基因组包含有长的开放阅读框架，在病毒或细胞蛋白酶的作用下，通过共翻译或翻译后修饰途径产生成熟的病毒蛋白^[1]。从其基因组5’→3’方向依次编码N^pro、C、E^ms、E1、E2、P7(NS1)、NS2—3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B蛋白，其中C、E^ms、E1、E2为结构蛋白，其余为非结构蛋白。     

猪瘟兔化弱毒株E~(rns)基因的克隆及序列分析

从兔脾组织中提取猪瘟病毒兔化弱毒株RNA,利用RT-PCR技术,扩增了猪瘟兔化弱毒的第一个囊膜糖蛋白基因Erns,并对其进行了序列分析。核苷酸序列比较发现,CSFV与Brescia株和GPE-株的同源性为94.6 %,与石门毒株和Alfort/A19株的同源性为95.0 %,与ALD株的同源性为95.4 %。根据核苷酸序列推导出氨基酸序列,并进行氨基酸序列同源性比较,结果表明,CSFV与Alfort/A19株和ALD株的同源性为93.8 %,与GPE-株的同源性为93.0 %,与石门毒株和Brescia株的同源性分别为94.7 %和95.2 %。 rns     

逆转录病毒载体介导的T7RNA聚合酶在猪源细胞PK15及SK6中的稳定表达

本研究旨在利用逆转录病毒载体系统将T7RNA聚合酶基因导入猪源细胞,并对该基因的遗传稳定性进行分析。作者克隆并构建含T7RNA聚合酶基因的逆转录病毒重组载体pBABEpuro/T7。将pBABEpuro/T7与水泡性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获重组病毒并用该病毒在Polybrene的介导下分别感染PK15和SK6细胞,用嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。对此阳性细胞进行传代,并对不同代次细胞中的T7RNA聚合酶基因进行扩增,确定其遗传稳定性。用直接荧光法和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测细胞中T7RNA聚合酶基因的表达及其活性。结果表明T7RNA聚合酶能够被稳定地整合进靶细胞基因组内,细胞系内的T7RNA聚合酶具有较好的转录活性,其活性传代不减弱。免疫荧光检测发现所表达的T7RNAP蛋白具有良好的反应原性。本研究表明T7RNA聚合酶基因稳定整合进猪源细胞,该基因的稳定整合为建立高效体内病毒拯救系统提供了良好的工具。     

札幌病毒研究进展

札幌病毒(Sapovirus)可感染人和动物,引起急性病毒性胃肠炎.随着分子生物学、病毒细胞培养和动物模型研究方面的进展,不同类群札幌病毒全基因组测序完成、病毒体外增殖和衣壳蛋白体外表达,从而对该病毒的特性有了一些新的认识.本文从札幌病毒的基因组结构与功能、流行病学、细胞培养、检测方法和疫苗发展5个方面人手,系统介绍了该病毒国内外的研究现状以及存在的问题,其中流行病学及其检测技术的研究成为研究的热点.本文还对札幌病毒分子进化、疫苗研制和病毒的传播等提出了新的观点.     

猪口蹄疫病毒对三种动物细胞嗜性的研究

将猪FMDV毒株(O/GD/MSH/86)分别适应牛肾细胞(Bovinekidney,MD-BK)、幼仓鼠肾细胞(Babyhamsterkidney,BHK-21)和猪肾细胞(Porcinekidney,PK-15),研究了FMDV在宿主细胞上的嗜性。结果发现,该毒株在MD-BK细胞上不产生细胞病变(CPE),从细胞液中也未检测到病毒,而在BHK-21和PK-15细胞上能够稳定产生CPE。可见,猪FMDVO/GD/MSH/86毒株不能在MD-BK细胞上增殖,而在BHK-21和PK-15细胞上则增殖较好。     

猪瘟C—株和野毒株p80基因的序列分析

利用RT-PCR及nPCR技术扩增出了C-株免脾组织毒和广西玉林野毒（GXYL）p80基因的一段长942bp的序列，并将其克隆互PMD-18T载体中，测定其核苷酸序列并推导出了相应的氨基酸序列，比较C-株，GXYL株和已发表的Alfort株、Brescia株相应核苷酸序列及氨基酸序列同源性，核茜酸同源性最低为87.46%，最高为98.08%，氨基酸同源性最低为94.27%，最高为98.09%，进一步证实了HCV p80基因的高度保守性。