嵌合口蹄疫病毒抗原表位的重组塞内卡病毒A的构建及其鉴定

塞内卡病毒A（SVA）与口蹄疫病毒（FMDV）引起猪的临床症状难以区分,并且以SVA作为载体插入FMDV抗原表位外源基因的研究,目前还没有报道。为了构建一种嵌合FMDV抗原表位的重组SVA毒株并进行鉴定,本研究利用基因克隆技术将O型FMDV的B细胞表位与白蛋白信号肽（human albumin signal peptide,HAS）基因串联插入到SVA基因组中,成功构建了重组质粒,转染细胞后拯救出重组病毒rSVA-HAS-OB。结果显示：RT-PCR扩增与基因测序结果表明目的基因正确插入;细胞间接免疫荧光和Western blot鉴定了嵌合抗原蛋白的有效表达;遗传稳定性分析表明重组病毒在25代次的传代过程中仍稳定存在B细胞表位;病毒蚀斑表型和一步生长曲线结果表明,重组病毒与亲本毒株具有相似的增殖特性。本研究成功构建并拯救出能够表达FMDV抗原表位的重组SVA毒株,为以SVA为基础的嵌合病毒及疫苗的研究提供了理论和实验基础。     

蛋白质组学样品处理方法研究进展

蛋白质组学研究已经成为后基因组时代的研究热点,是生命科学研究领域又一个新的突破口。以双向凝胶电泳为主的蛋白质分离技术以及基于生物质谱的蛋白质鉴定技术是目前该领域主要研究技术手段。在双向凝胶电泳蛋白分离和蛋白质谱鉴定中,样品处理影响甚至决定着蛋白分离效果和鉴定结果。因此有效的样品处理技术是获得真实、可靠实验数据的关键,在比较蛋白质组学研究中样品处理尤为重要。本文针对双向电泳前的蛋白质样品处理及质谱鉴定前的样品处理技术的研究进展作以综述。     

猪瘟病毒C-株(脾淋毒)3′-UTR的克隆和二级结构分析

根据已发表的CSFVC—株序列，设计合成了3′—UTR特异性PCR引物对F—R及半套式上游引物F′。从兔脾组织中提取总RNA，应用RT—PCR及Half—nested PCR，成功地扩增出了C-株3′—UTR，克隆到pMD-18T载体后进行了序列测定。与AID株、Alfort/187株、Brescia株、F114株、Eystrup株、Riems株和Shimen株的相应区段进行了序列比较分析，同源性分别为98．7％、98．2％、98．2％、98．7％、97．8％、97．8％和98．7％。C—株3′—UTR中存在一富含T的插入序列，可能是C—株在兔化致弱时产生的变异标记，对其二级结构具有较大影响。在其它疫苗株的3′—UTR不同位置，亦存在相似的插入序列，该序列可能与病毒的毒力有直接关系。     

瘟病毒非结构蛋白的结构和功能

猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和边界病病毒(BDV)均为黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的成员。它们在结构、抗原性和遗传上关系密切。据推测CSFV、BVDV和BDV是由一个共同的祖先为适应不同动物演变而来。BVDV和BDV可感染反刍动物和猪，CSFV仅     

山羊痘病毒P32基因的克隆与序列分析

应用PCR技术,用特异性引物扩增出羊痘病毒结构蛋白P32基因,连接于pMD18-T载体,转化到JM109感受态细胞,对重组质粒双酶切、PCR鉴定与序列分析得出:P32结构蛋白基因全长969 bp,编码323个氨基酸.与山羊痘病毒和绵羊痘病毒P32基因序列同源性分别达99%和97%;与山羊痘病毒和绵羊痘病毒P32基因编码的氨基酸同源性分别达98.9%和96%.     

猪流行性腹泻病毒N蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

旨在建立一种猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白阻断ELISA抗体检测方法.本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原,通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件,建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法,并对其进行特异性、敏感性和重复性试验.对140份临床血清样品进行检测,并将检测结果与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测...     

猪繁殖与呼吸综合症GP5蛋白的纯化与免疫活性分析(英文)

[Objective] The purification and immunocompetence of GPS protein in porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) were analyzed in this study, which provided basis for establishing the corresponding serological method. [Method] The recombinant expression plasmid pGEX-6P-5 was transformed into BL21 and expressed after being induced with IPTG. The solubility analysis of expression products was carried out, and then the recombinant protein was purified for SDS-PAGE identification and Western-blot analysis. Finally, the recombinant antigen was used in the immune experiment of guinea pigs. [Result] The target protein content accounted for 30% of the total cells protein content according to the chromatography scanning, and the purity of target protein after purification reached 80%. The purified protein was analyzed by Western-blot and immune experiment of guinea pigs, and the results showed that the expressed protein had good reactionogenicity and immunogenicity. [Conclusion] This study provides materials for further studies on the function between PRRSV ORF5 gene and its editing protein, which also lays a foundation for porcine reproductive and respiratory syndrome virus genetic engineering products.     

猪圆环病毒2型的全基因克隆和序列分析

参考GenBank中发表的猪圆环病毒2型(PCV-2)全基因序列,设计一对PCR引物,从病料中扩增获得4株PCV-2的全基因组序列,分别命名为SDNY-PCV-2、ShD-PCV-2、HBbd-PCV-2、GSLN-PCV-2,经测序确定长度均为1 767 bp。应用DNA Star序列分析表明,4个PCV-2分离株与国外部分分离株的核苷酸序列同源性达95.5%~99.8%,与PCV-1毒株的序列同源性为76.2%~77.6%。与国内外部分分离毒株序列进化树分析表明,4个PCV-2分离毒株处于不同分支中,存在一定差异。     

不同饲养模式下肉羊疫病特点及综合防控

我国幅员辽阔,不同地域肉羊饲养方式差异很大。如在牧区以散养放牧为主,并实施围栏化和分区轮牧;半农半牧区采用放牧加舍饲相结合的饲养模式,在农区以舍饲为主建立规模化育肥基地,实施异地育肥。不同饲养模式下肉羊疫病种类和发病特点差异显著,本文就不同饲养模式下肉羊疫病特点及综合防控作如下简述,以期为同行提供参考。