出生前山羊小脑皮质神经元超微结构的观察

应用超薄切片技术研究了第6周到出生前山羊小脑皮质神经元超微结构发育的变化。结果表明:(1)出生前山羊小脑皮质内颗粒层细胞在第10周龄以前一直处于未分化状态,第10周龄以后开始分化,但直到出生前山羊小脑皮质内颗粒层细胞内细胞器的种类和数量都增加缓慢。(2)小脑浦肯野氏细胞在第7周龄以前处于未分化状态;在第7周龄开始分化,第7～14周龄处于不成熟期;第15～18周龄浦肯野氏细胞处于发育成熟期,细胞内各种细胞器均出现并充满整个胞体,细胞核膜趋于成熟,核内常染色质发达,中央核仁发育成熟;浦肯野氏细胞自第19周龄开始进入成熟期,细胞内尼氏小体开始形成并发育,但其体积较小,界限不明显,这表明浦肯野氏细胞在出生前尚未完全成熟,出生后仍存在一个较长生后发育过程。     

SAHA处理供体细胞对山羊克隆胚胎早期发育的影响

为探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂羟肟酸(SAHA)对体细胞和山羊核移植胚胎早期发育的影响,采用不同浓度SAHA处理山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblasts,GEFs),并检测其AcH3K9水平、细胞增殖能力、细胞周期及胚胎发育情况、乙酰化水平、多能性基因的表达水平。结果显示,SAHA处理后GEFs的AcH3K9水平显著上升(P0.05),2.5μmol/L SAHA处理浓度即可显著提高GEFs组蛋白H3K9的乙酰化水平;浓度≤2.5μmol/L时,对细胞增殖能力无明显影响;浓度为5.0μmol/L和10.0μmol/L时,细胞活力显著下降(P0.05)。AcH3K9上调会引起G0/G1和S期的细胞比例下降(P0.05)。因此,选择经2.5μmol/L SAHA处理的供体细胞进行核移植。试验组的胚胎卵裂率和囊胚率显著高于对照组(P0.05),其卵裂率接近于卵胞质单精子注射(ICSI)组。试验组的囊胚率乙酰化水平显著高于对照组,且低于ICSI组(P0.05)。与对照组相比,试验组囊胚的Oct4、Sox2和Nanog的mRNA表达水平均上升(P0.05),且均接近于ICSI组。说明,选用2.5μmol/L SAHA处理供体细胞可提高体细胞核移植效率和胚胎品质。     

转EGFP基因猪羊水干细胞的体外分化

目的：获得转EGFP基因猪羊水干细胞并监测其自我更新、增殖和多向分化潜能。方法：利用羊水干细胞培养技术体系,从胎龄30 d猪胎儿羊水中分离培养羊水干细胞,通过脂质体介导转染技术,将EGFP基因导入羊水干细胞,诱导转基因羊水干细胞贴壁分化,观察其体外增殖、分化特点。采用RT-PCR技术检测干细胞和分化细胞表面标志或相关基因。结果：成功分离培养出羊水干细胞,获得转EGFP基因羊水干细胞,羊水干细胞在表达EGFP的同时仍具有多向分化潜能。羊水干细胞中β-Actin、NogoA、DCX、CyclinD2、CD133、Hes1、Oct4、Desmin、CD-90、Nanog和Sox2表达阳性;体外诱导的羊水干细胞可以分化为星形胶质细胞(表达GFAP)、少突胶质细胞(表达GalC)和神经元细胞(表达NF、NSE和MAP2);能分化为脂肪细胞（表达LPL和PPARγ-D）、成骨细胞（表达Osteonectin和Osteocalcin）、肌细胞（表达myf-6和myoD）和内皮细胞（表达CD31、CD34、CD144 和eNOS）。结论：从猪胎儿羊水分离羊水干细胞具有可行性和有效性,转EGFP基因羊水干细胞具有自我更新、增殖和多向分化潜能,可以用EGFP对羊水干细胞进行标记、追踪。     

世界唯一棕白色大熊猫“丹丹”部分组织的光镜观察

对世界唯一一例人工圈养的棕白色大熊猫“丹丹”的肝胀、脾胀、子宫、癌变皮和口皮部分组织进行光镜观察。结果表明：肝窦和脾窦不同程度扩张，其中有大量红细胞和枯否氏细胞，可见大量黄褐色的含铁血黄素颗粒。部分肝细胞变性、坏死；大量肝细胞肿胀，胞浆内可见许多大小不一的脂肪空泡；肝细胞胞核浓缩、碎裂、溶解甚至消失。白髓淋巴小结里淋巴细胞增多。子宫的固有膜由富有血管的胚性结缔组织构成。癌变皮的棘细胞出现不典型增生，未见恶性细胞团向深层组织生长浸润。口皮的棘细胞未出现增生。     

体外培养的牛乳腺上皮细胞形态研究

通过有效的细胞培养方法获得了牛乳腺上皮细胞系,并系统观察了乳腺上皮细胞的长出、贴壁、聚集、迁移、分裂、分化、凋亡等一系列形态变化。结果发现,原代培养的乳腺上皮细胞大多数呈卵圆形,细胞之间连接成片,单层生长,如鹅卵石铺过路面,乳腺上皮细胞和成纤维细胞混生时分区生长,界线明显。传代的乳腺上皮细胞呈岛屿状聚集生长,细胞核呈圆形或椭圆形,核仁2～4枚;在含雌激素的培养液中,细胞出现双核或多核现象,但仍表现一定的接触抑制现象。多次传代后的乳腺上皮细胞含不同的细胞类型,通过光镜观察,部分细胞仍保持较快的分裂增殖能力;部分细胞渐渐分化,出现长形细胞、三角形细胞。上皮细胞增殖分化可形成圆顶型结构,乳腺上皮细胞可产生并分泌乳汁,分泌到细胞外的乳汁流动形成网状结构。     

哺乳动物胎肺发育的形态学研究

哺乳动物胎肺的发育可以分5个时期：胚胎期、假腺期、小管期、囊状期和肺泡期。人、绵羊和山羊胎儿至出生时肺的发育已基本完善，处于肺泡期；而兔、大鼠和小鼠的胎儿至出生时肺的发育尚处于囊状期。甩泡表面上皮细胞的分化和气血屏障的形成是肺发育的形态学标志。呼吸功能的建立，与Ⅱ型上皮细胞的分化密切相关。Ⅱ型细胞的分化标志有以下几点：①糖原的变化；②粗面内质网池扩张，并出现絮状物质；③多泡体出现及高尔基小泡增多；④胞质内微管出现；⑤腔面生成微绒毛；⑥致密小体内板层的出现等。     

山羊胎儿肺的形态学观察

本文观察了３６例胎龄为７～２２周山羊胎儿肺的外部形态和内部结构,结果为：１胎龄为７～２２周的山羊胎儿肺的外部形态与胎龄无关,肺的外部形态以左二右四叶者为多见,肺的叶间裂和右肺副裂常不完整,以浆膜、肺组织或混合性组织（肺组织及浆膜）融合;２胎龄为７～２２周山羊胎儿肺的发育分为腺状期、小管期、囊状期和肺泡期。     

哺乳动物肺发生的调控

哺乳动物肺的发育起始于从前肠内胚层发育而来的成对肺芽突起，它以分支形态发生和肺特异性细胞分化的遗传预定模式侵入周围的中胚层间质。呼吸上皮 分化很可能受复杂的细胞－细胞间相互作用的影响，并且受影响前肠组织中转录因子表达的自分泌、旁分泌和体液信号的影响。在肺形态发生和基因表达中，若干个转录因子家庭起关键作用，包括同源[异型]域蛋白甲状腺转录因子－1（TTF－1），翼状－螺旋家族成员肝细胞核因子－3β（HNF-3β）和GIi家族中的锌指转录因子。TGF－β诱导不同类型停滞细胞（包括肺上皮细胞）的生长的一批蛋白的表达，其中一些蛋白沉积于肺泡外基质中。     

山羊胚胎肝脏组织发生的形态学观察

运用常规光镜技术对关中奶山羊胚胎期肝脏的发育进行了组织学研究，结果表明：早在50日胚龄的肝组织中，就已经形成血管、窦状隙、幼稚型血细胞和成熟的红细胞。随着胎龄的增长，窦状隙先增大，然后减小。小叶间胆管在大约60日胚龄形成。小叶间动脉在大约66日胚龄形成，并且此时造血灶的数量最多。肝板在105日胚龄形成。     

牛胎儿皮肤成纤维细胞的分离培养及转染Ipr1基因

为了为核移植提供供体细胞,本研究构建了真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1,并研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的体外分离培养,进行了Ipr1基因转染.克隆Ipr1基因和SR-A启动子,并构建了巨噬细胞特异性真核表达载体.用组织块贴壁法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞,在体外经传代、纯化后,用电穿孔法将真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1转染至经体外纯化的第4～10代牛胎儿成纤维细胞,24 h后观察荧光表达,48 h后加入600μg·mL-1 G418,筛选1周,300 p.g·mL-1持续筛选,然后挑选单克隆,继续扩大培养.对稳定转染的牛胎儿成纤维细胞进行PCR检测和核型分析.结果,转染24 h后有绿色荧光蛋白表达,并经G418筛选获得稳定转染PEGFP-SRA-Ipr1的牛胎儿成纤维细胞株,经PCR检测在大约1500 bp处有目的片段,经流式细胞仪分析转染细胞染色体倍型未发生变化,仍是二倍体.说明目的基因已经成功整合,同时保持了遗传稳定性.可以作为核移植进行转基因克隆牛研究.