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鸡传染性支气管炎病毒的快速检测 总被引:4,自引:0,他引:4
本试验建立了一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒的通用性PCR方法。通过对纯化后IBV核蛋白基因进行的直接PCR及套式PCR扩增表明,两次PCR产物的大小为0.7kb和0.5kb,与实际设计相符。而对照的NDV主IBDV的PCR扩增产物均为阴性。用IBV HB(华北)株感染SPF鸡后,应用我们所建立的PCR方法去检测不同时期所采集的肾脏、气管、盲肠扁桃体、肺脏和肝脏中的IBV,在SPF鸡感染IBV后的21天仍然能够检测到IBV的基因组,Southern blot杂交试验证明了我们获得的PCR产物为IBV的核蛋白基因。对30份自然感染病料的检测表明,本实验所建立的PCR方法检测阳性数为15份,阳性率为50%(15/30);鸡胚接种检测的阳性数为17份,阳性率为56.7%(17/30);IFA检测的阳性数11 ,阳性率为36.7%(11/30)。PVR检测法与鸡胚接种方法的阳性符合率为93.3%(14/15),统计学分析表明,P>0.05,差异不显著,而PCR检测法与IFA的阳性符合率为60%(9/15)。结果证明本实验所建立的PCR检测方法具有敏感、特异、快速等特点,适用于不同来源及不同血清型IBV的检测。 相似文献
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多年来 ,喹乙醇纯粉在蛋鸡中广泛应用 ,对促进蛋鸡生长及一些疾病预防起到很好作用 ,但很多养殖户对其毒副作用了解不足 ,常造成中毒。喹乙醇中毒属慢性蓄积中毒 ,不易察觉 ,因此造成中毒致死率极高 ,损失巨大。笔者报道两例喹乙醇中毒诊治全过程 ,以示广大蛋鸡养殖户。1 病例 相似文献
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为筛选减毒肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)菌株,本研究以含有Mini-Tn5转座子的重组自杀质粒pUT对S.enteritidis SM6株进行转座诱变,利用双亲本滤膜杂交方法与供体菌E.coliβ2155进行接合转移,构建并优化接合转移体系,利用卡那抗性和DAP营养缺陷培养平板筛选法构建了SM6的随机转座突变体库。其中包含5个子库,共计获得364株突变体,经PCR鉴定表明转座子均插入SM6株的基因组中。通过Caco-2细胞侵袭试验筛选S.enteritidis侵袭力减弱并在细胞内增殖受到抑制的减毒突变株,经初筛及验证最终获得3株稳定减毒菌株,为进一步研究减毒菌株突变毒力基因的定位及SM6株的侵袭及感染机制奠定了基础。 相似文献
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应用间接免疫荧光抗体法对免疫攻毒后小鼠肺脏中的APP抗原进行了定位,比较了灭活疫苗和重组亚单位疫苗对小鼠肺脏中APP抗原的清除能力,同时与各组小鼠的存活率及其肺脏的病理学变化进行相关性比较。结果表明,灭活疫苗组和重组亚单位疫苗组小鼠肺脏的荧光强度、数量均明显弱于对照组,而重组亚单位疫苗组又明显弱于灭活疫苗组。说明两种疫苗均对APP抗原有一定的清除和中和作用,且重组亚单位疫苗的作用强于灭活疫苗。该结果与各组小鼠的存活率和肺脏病理学损伤的结果一致。说明通过间接免疫荧光定位免疫攻毒后小鼠肺脏中的APP抗原作为疫苗保护效果的一种评价方法是可行的。 相似文献
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为了开发出能有效防控副结核病的减毒疫苗,试验采用同源重组的方法构建MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株,以MAP K-10菌株基因组为模板,扩增PanCD基因的上下游同源臂,构建pHAE159-p0004s-PanCD重组质粒,转化入耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Msg)感受态细胞中获得噬菌体,并感染MAP K-10菌株,然后挑取单克隆扩大培养,提取基因组进行PCR鉴定;绘制MAP K-10菌株与MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株的生长曲线;用MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株感染小鼠并评价其毒力,解剖取肝脏和脾脏,分析组织荷菌量和肝脏病理变化。结果表明:成功扩增出PanCD基因的上下游同源臂,经PCR扩增和酶切鉴定成功构建出pHAE159-p0004s-PanCD重组质粒,将重组质粒电转化入Msg感受态细胞中获得噬菌体,感染MAP K-10菌株后成功构建出MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株;与MAP K-10菌株相比,MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株的生长速率明显下降;攻菌2周时,MAP K-10ΔPanCD基因缺失菌株感... 相似文献
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牛结核病体外免疫诊断技术 总被引:1,自引:1,他引:0
牛分支杆菌感染的主要特征是引起 细胞免疫反应。现在牛结核病的诊断试验是 以T细胞反应机制为基础的。低敏感性的结 核血清学试验是不值得提倡的,血清学试验 最好作为细胞学试验的补充而不是替代。最 近,发现了牛结核γ干扰素试验是一种快速 的(24h)惟一使用全血的体外试验,该方法 在澳大利亚应用,结果表明,比传统的结核菌 素法诊断牛结核更敏感。假阳性反应的难题 归因于所使用的抗原制品间的交叉反应特 性,设动物对牛PPD和禽PPD的γ干扰素反 应作对照可解决假阳性的问题。虽然牛结核 特异性蛋白已确认并被分类,这些特异性蛋 白可能在血清学或细胞学诊断试验中使用, 但是它们可能因牛对牛分支杆菌感染的免疫 反应的遗传多样性而受到限制。 相似文献
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牛抗菌肽Bac7-Bac5-β defense串联基因在昆虫杆状病毒系统中的表达及其产物的活性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
根据GenBank中公布的牛抗菌肽bac7、bat5和βdefense(LAP基因)成熟肽基因序列,人工合成了抗菌肽融合基因Bac7-BacS-β defense,克隆到BAC-TO-BACTM重组杆状病毒表达系统的pFAST HTb载体中,构建了重组转座载体pFASTBac-Bac7-Bac5-βdefense,转化DH10Bac大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞,PCR方法筛选阳性菌落,抽提大分子质粒DNA,获得重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-Bac7-Bac5-βdefense,转染昆虫草地夜蛾(Bombyx mandarina)Sf9细胞出现病变后,收集含有重组病毒颗粒的培养上清,重新感染草地夜蛾St9单层细胞,收集Si9细胞超声破碎,12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见表达的融合蛋白带,分子量大小为20 kD,表达量约占细胞总蛋白的10.6%.体外抑菌实验表明重组的rBac7-Bac5-βdefense蛋白对大肠杆菌,具有抑菌活性. 相似文献
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