犬瘟热病毒Yunnan株H基因的克隆与表达

根据已发表的犬瘟热病毒(CDV)Onderstepoort株的序列设计两对引物,以犬瘟热病毒云南株感染的Vero细胞收获病毒提取的总RNA为模板,RT-PCR扩增出H基因的939 bp(H基因前段,H1)和920 bp(H基因后段,H2)片段,分别将其定向克隆于PET-28a( )中,将重组质粒转化宿主菌BL21(DE3)plysS,在35℃1、.0 mmol/L IPTG诱导下获得良好表达,经SDS-PAGE鉴定,表达的融合蛋白为34 ku,与预期大小一致。免疫印迹试验显示,该重组蛋白可被CDV Onderstepoort株多克隆抗体识别,表明该重组蛋白具有抗原性。     

驯化克隆的CAV-2大斑株的实验免疫研究

对MDCK细胞上驯化克隆产毒量高的大斑株 (LP)的第 5 0代毒和 75代毒进行了实验免疫研究 ,结果表明该毒株具有安全性好 ,通过静脉和口鼻接种CAV易感犬 ,无任何致病反应 ;用10 4 .0 TCID50 以上的该毒免疫CAV易感犬 ,即获得 97.5 %以上的免疫保护 ;将其在CAV易感犬连续传 5代 ,其安全性与原毒相同 ,表明该毒株在 5 0～ 75代之间遗传性稳定 ,免疫原性良好 ;与CPV和CDV弱毒联合免疫 ,结果与各弱毒单独免疫所产生的抗体无差异 ,说明该毒株不但可以单独用于免疫 ,也可与其他弱毒联合免疫。是一株较好的疫苗候选株 ,具有开发应用价值。     

犬型钩端螺旋体外膜蛋白OmpL1基因的克隆与序列分析

作者以犬型钩端螺旋体菌株的DNA为模板,采用PCR方法扩增目的基因OmpL1,克隆到pVAX1载体上,并对OmpL1基因测序后进行序列分析。结果获得960 bp片段,DNA序列分析结果表明,该菌株的OmpL1基因与报道的七日热型、秋季型、波摩那型、澳洲型钩体的OmpL1基因核苷酸序列相似性分别为99.38%、93.77%、99.58%、99.38%,氨基酸序列相似性分别为100%、95%、100%、100%。证明OmpL1为致病性钩体所具有的保守性抗原成分,可在钩体病的预防和诊断中发挥重要作用。     

云南地区马流感病毒检测及其HA基因序列分析

马流感能引起马属动物的高度接触性呼吸道传染病。该病毒已知仅存在H7N7(马流感病毒1型)、H3N8(马流感病毒2型)两个亚型,目前仅H3N8亚型毒株在全球范围内引起马流感流行和暴发。采用A型及H3亚型特异性RT-PCR技术,检测云南疑似马流感病例鼻腔棉拭子样品;HA基因PCR扩增产物经纯化后,克隆至pMD18-T载体进行测序,并与已知代表性毒株对应序列进行比对及系统发育分析。研究发现云南马流感病毒与已知代表毒株血凝素基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别介于91.2%~99.2%和89.5%~98.4%,属于美洲谱系(American lineage)佛罗里达亚谱系(Florida sub-lineage)毒株。     

不同型犬腺病毒纤突蛋白基因序列的比较分析

根据已发表的CAV纤突基因序列,用PCR方法,对4个CAV-2毒株和4个CAV-1毒株的纤突基因进行了扩增和测序,测定的核甘酸序列经推导得到分别编码543和542个氨基酸CAV纤突蛋白垒序列。测定的CAV-2比较表明：我国流行的CAV-2SY强毒株与国外标准强毒株TorontoA26／61株相同．其驯化致弱的毒株与驯化前相比在1134位发生碱基颇换。测定的CAV－1比较表明：我国流行的CAV－1株与标准强毒R1261株差异相对较大,而国内CAV-1毒株互相之间相对差别较小CAV-2与CAV-1纤突基因的同源性为80．48％。     

犬2型腺病毒E3区缺失性表达载体的构建及外源基因表达

为构建可用于同源重组或体外重组的犬腺病毒（canime adenovirus,CAV)E3区缺失性表达载体，在克隆的E3区两末端设计并合成了2对突变引物，在引物中分别引入1个BgⅠⅡ酶切位点，以PBE3质粒为模板，经2次点突变后，得到含有2个BgⅠⅡ位点的重组质粒PBE3^M。该质粒经BgⅠⅡ酶切后自连得到E3缺失的质粒PBE3△。在PBE3△质粒的BgⅠⅡ位点加入接头后，产生含多个酶切位点的质粒PBE3L，经相应的酶切鉴定，证明突变，缺失和接头连接正确后，利用PBE3L分别构建了带有和不带有外源性启动子的绿色荧光蛋白基因的重组表达质粒，并分别进行转染以检测其表达。结果显示，PBE3LCGFP质粒在转染DK细胞后，于36h即可观察到荧光，72-96h无明显差别，传3代后仍可见表达荧光的细胞；而PBE3LGFP质粒转染DK细胞后经检测无表达。结果表明，构建的E3区缺失性载体不能利用E3区自身的启动子进行目的的基因的表达，外源性启动子的加入是必要的。     

西安高校图书馆人才资源建设发展探讨

 

分析了西安高校图书馆人才资源存在的问题，论述了高校图书馆人才发展的目标和

任务，同时提出了人才资源建设发展的对策。

     

动物园猫瘟热净化的新手段—聚合酶链式反应

猫泛白细胞减少症病毒 (FPV)又名猫细小病毒、猫传染性肠炎病毒、猫瘟病毒。该病以高热、呕吐、白细胞严重减少和肠炎为特征。 1 957年 (Bilin)病毒首次被分离培养成功。通过对多种动物类似疾病的病原学研究 ,证明 FPV在自然条件下感染猫科和鼬科多种动物 ,如虎、豹、狮子和浣熊 ,但以体型较小的猫科动物 ,包括水貂最为易感。FPV是目前本属病毒中感染范围最宽、致病性最强的一种。由FPV引起的猫泛白细胞减少症 ,可能存在于世界各地。在欧洲和北美已被认为是猫的重要传染病之一。我国张振兴和李刚等人 (1 982— 1 984)报道 ,我国许多省…     

犬细小病毒的分离鉴定

用猫肾(F81)细胞从沈阳某养犬场病死犬的肠内容物中,分离到1株细小病毒.根据犬细小病毒(CPV)VP2基因的核苷酸序列设计合成了两对特异性引物,对分离的病毒株进行PCR扩增,分别得到846 bp和815 bp的2个片段,PCR产物经纯化后测序,测序结果与GenBank中已发表的CPV参考株PLI-IV(typeFPV)、CPV-b(type2)、V154(type2a)、LCPV-V204(type2b)、LCPV-V139(type2c(a))和LCPV-V203(type2c(b))的VP2基因序列相比较,根据分析比较的数据结果,确定此株细小病毒为CPV-2a亚型.     

抗禽流感病毒药物的活性筛选研究

目的:观察药物对禽流感病毒抑制作用。方法:固定病毒稀释药物的微量中和实验法,采用体外细胞培养技术,将系列稀释的药物与固定量病毒在细胞上感作后,置适宜条件培养5～7d,同时设相应对照,以病毒所致的特异性细胞病变(CPE)作为观察指标,用Reed-Muench法计算中和结果,凡药物能保护细胞不出现特异性病变的定为该药对病毒有抑制作用,测定治疗指数TI值。结果:药物能减少H5N1型的禽流感病毒引起的CPE,药物对照实验也出现同样结果。结论:药物对H5N1型的禽流感病毒有抑制作用。