肠毒性大肠埃希菌肠毒素LTa基因特异性EMA-PCR检测方法的建立

由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,为避免因样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,本研究根据肠毒性大肠埃希菌(ETEC)不耐热肠毒素LTa基因设计特异性引物,利用叠氮溴乙锭(EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法。肠毒性大肠埃希菌CVCC196、CVCC197、CVCC200均能扩增出大小为438bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带。经EMA处理,除了完全死菌组外,含有10mL/L～1 000mL/L活菌的混合悬液均可扩增出目的片段。因此,成功建立了一种快速、有效的检测肠毒性大肠埃希菌活菌肠毒素基因的EMA-PCR方法,该方法较传统PCR大大提高了检测的准确性,灵敏度可达19cfu/mL。     

EMA-PCR检测金黄色葡萄球菌活菌的方法

根据金黄色葡萄球菌(SA)耐热核酸酶编码基因(nuc基因)设计特异性引物,对试验菌株进行PCR检测,结果显示,金黄色葡萄球菌扩增出大小为480 bp的特异性条带,而其他对照菌株未扩增出条带.由于传统PCR技术无法区分样品中的死细菌与活细菌,从而使检测结果往往出现很高的假阳性.本试验利用EMA能穿过死细菌的细胞膜并在光激活的作用下能与基因组DNA共价结合,从而能抑制死菌DNA进行PCR扩增的特性,建立了一种快速、有效的检测金黄色葡萄球菌活菌的EMA-PCR方法,较传统PCR大大提高了检测的准确性和可靠性,该方法检测灵敏度可达15 CFU/mL.     

元宝枫黄酮对肉鸡免疫机能的影响

黄酮类化合物能提高饲料转化率,促进动物生长,提高畜禽机体免疫力,具有抗菌消炎、提高抗氧化应激能力和保健等作用。试验选用375只1日龄艾维茵肉仔公鸡,采用随机分组的方法分成5组,每组3个重复,每个重复25只鸡,用于研究添加不同水平(0、5、102、0、40 mg/kg)的元宝枫黄酮对免疫机能的影响。结果表明:与对照组相比,添加适当剂量的元宝枫黄酮能够极显著提高胸腺指数(P<0.01)、法氏囊指数(P<0.01)及T淋巴细胞转化率(P<0.01),但对脾脏的发育影响不大(P>0.05),对3周龄和5周龄血清新城疫抗体水平有显著影响(P<0.05)。这些结果表明,日粮中添加元宝枫黄酮可提高肉鸡的细胞免疫和体液免疫功能。     

中国牦牛的遗传多样性

本文作者详细论述了中国牦牛的遗传多样性。中国牦牛在世界上数量和类群（或类型）最多，可分为高原型和横断高山型。主要分布在以青藏高原为中心地带及其东部边缘的青海、基本和四川的西部。它是当地人民基本的生活来源和重要的经济支柱，通过细胞水平、生化水平、分子水平等的研究结果表明，中国牦咎各地方类群间存在一定的差异，但遗传变异程度较小，遗传多样性贫乏，这些结果对于中国牦牛的保种、选育、开发利用都具有重要的指导意义。     

奶牛蹄病综合防控措施效果观察

蹄病是奶牛的主要疾病之一,能够引起奶牛泌乳量减少、繁殖力降低以及淘汰率升高,给奶牛业造成了巨大的经济损失。本研究以洪雅县某奶牛场为调查对象,于2010年全场牛群修蹄时进行了蹄病调查。通过对病因的分析并针对牛场实际情况,20l1年对综合防治措施进行了调整,实施新措施一年后,再次对奶牛蹄病进行检测,评价了调整后的措施对蹄病防治 的效果。     

猪睾丸组织与雄性生殖相关circRNA鉴定

为研究环状RNA （circRNA）在杜洛克和大白猪睾丸中的表达差异,采用去除组织总RNA中核糖体RNA （rRNA）和线性RNA的方法构建特异性猪睾丸circRNA文库,并在Illumina PE150平台上进行测序,测序数据经过质控、比对、拼接后得到用于后续分析的数据。运用生物信息学软件find_circ和CIRI识别circRNA,并进行表达水平统计,从而得到猪睾丸组织circRNA表达谱,然后用DEseq2进行组间表达差异分析,对差异表达circRNA进行功能富集分析以筛选与雄性生殖相关的circRNA。结果发现,共识别到21 743个circRNAs,其中632个circRNAs在杜洛克和大白猪中的表达差异显著（|log₂（FoldChange）|>1,P<0.05）,在杜洛克猪上调表达的circRNAs有281个,下调表达的有351个。差异表达circRNA富集结果显示,有52个GO条目与繁殖相关,其中有9个与雄性生殖相关。经进一步筛选鉴定,有6个与雄性生殖相关的circRNAs （circ_0030058、circ_0009504、circ_00178101、circ_0019933、circ_0033379和circ_0017932）,它们可能参与精原细胞分化、精子发生和精子细胞发育等生物学过程。综上所述,杜洛克和大白公猪睾丸中存在表达丰度不同的circRNA,这些circRNA可能参与精子生成,可以作为预测公猪生育能力的生物标记。     

7种猪场常见高致死病原GeXP检测方法的建立

本研究旨在建立能同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、坏死梭杆菌(Fn)和副猪嗜血杆菌(Hps)7种猪场常见高致死性流行病原的多重PCR检测方法。利用7种病原体的保守序列设计7对特异性引物,同时合成了Cy-5标记的通用引物。将通用引物分别连接到特异性引物的5′端形成7对特异性嵌合引物。优化反应条件,分别使用7组嵌合引物和通用引物混合,扩增7种病原的混合cDNA/DNA,验证其单重PCR的特异性。利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,混合7种嵌合引物和通用引物,扩增单一病原的cDNA/DNA,验证其多重PCR特异性;将其他常见猪病病原的基因组作为干扰的阳性标本,利用7对混合嵌合引物和通用引物进行多重PCR分析,扩增加入了阳性标本的混合模板,验证其多重PCR的抗干扰能力。利用重组质粒和体外转录的RNA进行梯度稀释,确定GeXP多重检测体系的灵敏度。结果表明,7种不同引物分别进行GeXP单重及多重检测,均能检测出特异性目的片段的信号,无明显的干扰片段信号出现;GeXP多重检测抗干扰试验结果显示,在混入3种干扰病原模板后,依然可同时特异性检测出7种病原;GeXP多重检测灵敏度分析显示,在10~3拷贝/μL浓度条件下能检测到7种不同基因的特异性结果。本研究建立的同时检测7种猪场常见高致死性流行病原的GeXP检测方法具有高通量、高特异性和高灵敏度的特点,为快速诊断猪流行性疾病的交叉感染和混合感染提供了新型的检测方法。     

边鸡微卫星DNA标记遗传多样性的研究

利用鸡基因组中5个微卫星标记,检测了边鸡群体的遗传多样性,并以大骨鸡做了比较分析。同时探讨了边鸡在国内5个地方鸡种中的系统地位。结果表明,5个微卫星位点共检测到38个等位基因,其中ADL0146位点的等位基因数最少(5个),而ADL0136和ADL0185两个位点的等位基因数最多(9个),平均等位基因数为7.6个.边鸡群体内比大骨鸡群体有更丰富的遗传多样性。聚类分析结果显示,边鸡与大骨鸡亲缘关系最近。而与鲁西斗鸡亲缘关系最远。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EMA-PCR检测技术的建立

肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌。为建立一种特异、灵敏的O157∶H7新型检测技术,以O157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种快速、有效的O157∶H7活菌EMA-PCR检测方法。结果显示:EMA-PCR可从rfbE基因阳性菌株CVCC248和两株临床分离菌株cd0912、cd0803中扩增出大小为495 bp的特异性条带,检测灵敏度可达12 CFU/mL。经EMA处理,从含有1%～100%O157∶H7 CVCC248活菌混合悬液制备的DNA中均可扩增出目的片段。因此,成功建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的EMA-PCR检测方法;该方法可避免因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,检测的准确性和真实性较传统PCR大大提高。O157∶H7 EMA-PCR技术的建立为O157∶H7的临床诊断提供了新的方法,具有重要的实际应用价值和良好的应用前景。     

非乳用山羊乳蛋白结构基因座遗传多态性研究

为了解非乳用山羊不同群体编码乳蛋白结构基因座的遗传多态性,揭示不同群体间的遗传关系。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术,分析中国9个非乳用山羊群体共316只个体编码乳蛋白(酶)7个结构基因座的遗传多态性,并基于5个结构基因座等位基因频率计算Nei氏遗传距离,以UPMGA法作聚类分析。研究结果表明,9个山羊群体中,编码乳蛋白(酶)的-κCN,-βCN,sα1-CN,αs2-CN,-βLg,SA和LDH7个结构基因座在PAGE上均呈现出不同程度的遗传多态性;9个山羊群体中在-κCN,-βCN,αs2-CN,-βLg和SA5个结构基因座上的平均基因一致度、平均基因杂合度和平均有效等位基因数分别为0.335 0,0.655 2和1.819 9。基于-κCN,-βCN,αs2-CN,-βLg和SA5个结构基因座的等位基因频率计算Nei氏遗传距离,以UPMGA法可将中国9个非乳用山羊群体划分为2大类。非乳用山羊群体中,乳蛋白结构基因座是1个遗传多样性相对丰富的系统;乳蛋白结构基因座在非乳用山羊群体划分中具有较强的代表性。