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81.
牛传染性鼻气管炎病毒gE基因的截短克隆与表达 总被引:6,自引:0,他引:6
以牛传染性鼻气管炎病毒Baaha Nu/67株的DNA作为模板,用PCR扩增gE基N并克隆至pGEM-T Easy裁体,再以此质粒作为模板将gE基因分成6个片段,分别插入原核表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行了表达。蛋白电泳结果表明6个片段中有2个片段以可溶形式表达,1个片段以包涵体形式表达,另外3个片段没有表达。采用固定化金属离子亲和层析法在非变性条件下对两个可溶性片段进行了纯化。经免疫印迹试验,间接ELISA和交叉试验证明,两个纯化的重组蛋白均与牛传染性鼻气管炎阳性血清样品发生反应,而与牛传染性鼻气管炎阴性血清无任何反应,显示其具有良好的抗原性和特异性,可用于牛传染性鼻气管炎gE-ELISA诊断方法的建立。 相似文献
82.
本试验参考GenBank上发表的CAEV-63株的env基因核苷酸序列设计一对引物,以CAEV甘肃株前病毒DNA为模板,PCR扩增产物约2.9kb,与预期的目的片段大小一致。回收目的基因片段并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR及酶切鉴定阳性的重组质粒测序,结果表明所扩增2893个核苷酸片段含有CAEV囊膜基因的全序列,编码964个氨基酸。核苷酸和氨基酸序列分析显示,CAEV甘肃株env基因与CAEV-63美国株的env基固核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和98.1%。 相似文献
83.
猪戊型肝炎病毒大庆株DQ1全基因序列分析 总被引:5,自引:0,他引:5
本试验采用RT.-PCR的方法对戊型肝炎病毒大庆株(DQ1HEV株)的全基因进行分片段扩增,并对其两个末端采用末端快速扩增法(RACE)进行扩增、克隆,测序。与已报道的人的14株HEV的4个基因型的核苷酸和氨基酸进行比较,与IV型HEV的同源性最高。ORF1区与IV型HEV核苷酸的同源性为82.6%~83.6%.氨基酸同源性为93.5%,ORF2区与IV型HEV核苷酸的同源性为87.0%~88.4%,氨基酸同源性为95.8%~97.4%。ORF3区与IV型HEV核苷酸的同源性为94.4%~96.5%,氨基酸同源性为90.3%~96.5%。其结果表明DQ1 HEV株为IV型HEv。 相似文献
84.
2008年从湖北省分离到1株H3N8亚型马流感病毒A/equine/Hubei/6/08。以2002年美国KENTUKY株为模板设计HA基因测序引物,进行RT-PCR,然后测定该分离株的HA基因核苷酸序列。经NCBI上Blast同源性比较发现,与A/equine/Newmarket/5/2003(H3N8)同源性较高为98.7%。HA蛋白遗传进化分析表明该毒株隶属于H3N8亚型马流感病毒中的美洲系福罗里达亚系。该株与OIE现在推荐的疫苗候选株A/equine/Kentuck-y/5/2002(H3N8)HA1蛋白氨基酸序列比对发现有3处氨基酸替换位点;与OIE以往推荐的疫苗候选株A/e-quine/Kentucky/1/1994(H3N8)比对发现有11处氨基酸替换位点。研究结果表明该分离株可作为中国研制马流感疫苗的候选株。 相似文献
85.
新疆地区一株马流感病毒的分离及鉴定 总被引:4,自引:3,他引:4
2007年10月,我国新疆维吾尔自治区阿勒泰地区富蕴县发现马匹出现呼吸道疾病,发病马表现出典型的流行性感冒症状。经过临床诊断、病原分离、电镜观察以及病毒基因序列分析,确定病原为马流行性感冒病毒,属于H3N8亚型,该株病毒与近年来马流行性感冒病毒北美洲流行株的同源性较高,命名为A/equine/xinjiangFuyun/3/2007(H3N8)。 相似文献
86.
我国茶叶由于产量大、质量优、价格低廉等原因长期以来深受国外消费者的喜爱。因此,茶叶出口贸易从很早开始就处于贸易顺差的状态。一些发达国家尤其是欧洲发达国家为了维护本国经济市场,纷纷筑起了"贸易壁垒"试图扭转本国茶叶进出口逆差的局势。这在无形中对我国茶叶的出口造成了一定的阻碍。我国中小茶企一方面要面临大型茶企的竞争压力,另外一方面要面临外国的贸易政策的阻碍。但是中小茶企也有自身的优势,如何充分利用这些优势巧妙地避开贸易壁垒的阻碍是其发展的关键。对此,本文围绕贸易壁垒这个主题,结合我国中小茶企的实际情况,有针对性地提出最有利于实现贸易突破的可行性策略。 相似文献
87.
根据GenBank马疱疹病毒1型(EHV-1)和4型(EHV-4)gD基因进行分析,选取同源性较高且抗原性强的C端序列设计一对引物进行扩增。将扩增的基因插入pET-30a的BamHⅠ和SalⅠ之间构建原核表达载体pET-gD。然后将pET-gD质粒转化至BL21(DE3)宿主菌,对培养和表达条件进行优化,实现EHV gD蛋白主要抗原区域的高效表达。将重组pET-gD蛋白进行纯化并接种长白兔制备高免血清。经免疫印迹试验鉴定,证实所得纯化表达产物具有良好的抗原性。 相似文献
88.
H3N8亚型马流感病毒间接ELISA抗体检测方法建立及应用 总被引:5,自引:0,他引:5
为建立马流感血清学ELISA诊断方法,本研究以马流感病毒中国分离株A/马/新疆/07(H3N8)通过SPF鸡胚培养和增殖,收取含病毒尿囊液经蔗糖密度梯度离心纯化后作为ELISA包被抗原,首次在我国建立了检测H3N8亚型马流感抗体的间接ELISA诊断方法。试验的最佳反应条件为:最佳抗原稀释度7μg/mL,封闭液5%脱脂乳,血清稀释度1∶100,二抗稀释度1∶10000,稀释液PBS(pH7.4),血清反应时间1.5h,二抗反应时间1h。通过本方法对555份临床样品进行检测并与血凝抑制(HI)试验检测结果比较,证明本方法特异、敏感,具有良好的稳定性和可重复性,适于马流感的流行病学调查和监测工作。 相似文献
89.
90.