猪戊型肝炎病毒基因ORF2片段克隆及其原核表达

猪戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是一种无包膜的正义链RNA病毒,直径为27～32 nm,表面粗糙,呈不规则球型.由于HEV组织培养困难,难以研制减毒或灭活疫苗,因此,利用基因工程技术制备重组抗原,研制多肽疫苗成为戊型肝炎研究的热点[4].     

马传染性贫血病毒弱毒疫苗S2基因在体内变异分析

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121的S2基因在马体内的变异规律,本研究选用4匹成年马,其中2匹(#1、#2)接种EIAVDLV121,另外2匹作为对照.免疫后监测马体温、血小板含量以及病毒载量结果显示,免疫马未出现马传染性贫血体征.通过RT-PCR方法检测病毒S2基因在感染马体内不同时期的基因序列,结果显示,免疫马体内EIAVDLV121 S2蛋白的突变主要发生在氨基酸第17位、22位、39位、41位、51位和55位.另外,#1马免疫后70 d以及#2马免疫后第14 d和第28 d检测疫苗毒S2蛋白序列与EIAVDLV121亲缘关系较近,而#1马免疫后第42 d、第112 d和第140 d的疫苗毒S2蛋白序列与EIAVDLV121的致病性亲本强毒株EIAVDN40亲缘关系最近.本研究结果有助于对EIAV及EIAV疫苗株在马体内感染进程的研究.     

马疱疹病毒1型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

为建立马疱疹病毒Ⅰ型(EHV-1)的检测方法,本研究以EHV-1 gB基因的一段保守区域(1207 bp～1509 bp)作为检测的目的片段设计引物,通过对其反应条件的优化,建立了特异性检测EHV-1的SYBR Green I 荧光定量PCR方法.实验结果表明:该方法检测目的基因的灵敏度下限为10拷贝/μL,比常规PCR方法高100倍;与马疱疹病毒4型(EHV-4)及其他马传染病病原体无交叉反应;组内及组间的变异系数均小于2％.该方法检测速度快及高敏感性的特点为马鼻肺炎的防制提供了有力保障,同时也为进一步开展马鼻肺炎相关的研究提供了有效的辅助检测方法技术.     

马传染性贫血琼扩抗原生产工艺的改进

马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus，EIAV)是逆转录病毒科慢病毒属的成员之一，其基因组结构与人免疫缺陷病毒Ⅰ型(Human innunodeficiency virus type 1，HIV-Ⅰ)相似。马传染性贫血呈世界性分布，常引起慢性感染，以发热、贫血为特征，耐过马呈隐性感染并终身带毒。20世纪70年代初期，Coggins博士建立了检测感染马血清抗体的琼脂扩散试验(AGID)，成为检测EIA的标准方法。     

马传染性贫血琼扩抗原生产工艺的改进

马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus，EIAV)是逆转录病毒科慢病毒属的成员之一，其基因组结构与人免疫缺陷病毒Ⅰ型(Human innunodeficiency virus typel，HIV-Ⅰ)相似。马传染性贫血病呈世界性分布，常引起慢性感染，以发热。     

寡果糖对人源菌群仔猪肠道中IgA和IgG分泌细胞的影响

本文主要研究寡果糖对人源菌群仔猪肠道中IgA和IgG分泌细胞的影响。通过无菌剖腹产获取15头无特定病原菌(specific pathogen free,SPF)仔猪,随机分为三组。第一组为SPF组,经口灌服磷酸钠缓冲液(内含10%甘油)以示对照;第二组为人源菌群(human flora-associated,HFA)组,经口服途径接种人源菌群;第三组为寡果糖(fructo-oligosaccharides,FOS)组,口服途径接种人源菌群且灌喂寡果糖。仔猪饲养于屏障系统内,无菌条件下人工哺育45天。应用免疫组织化学方法进行研究。结果表明:(1)所有仔猪小肠和结肠的固有层中均分布有IgA和IgG分泌细胞。(2)IgA和IgG分泌细胞在十二指肠中分布最多,随着肠段的向后推移IgA和IgG分泌细胞数量有逐渐下降趋势。(3)HFA组和FOS组IgA分泌细胞数量在回肠显著高于SPF组(P<0.01);十二指肠中HFA组IgG分泌细胞数量显著高于SPF组(P<0.01)。(4)FOS组IgA分泌细胞数量在空肠显著高于HFA组外(P<0.05),其他肠段总体上低于HFA组,但差异不显著。本结果提示给新生仔猪接种人源菌群能促进仔猪肠道中IgA和IgG分泌细胞的发育,而寡果糖使肠道IgA和IgG分泌细胞数量呈现下降的趋势。     

抗猪戊型肝炎病毒重组蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

利用纯化的猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2-M1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,获得了2株稳定分泌抗HEV ORF2-M1重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为BC4和2A10。经ELISA测定,2株杂交瘤细胞培养上清效价分别为1∶1.60×103和1∶0.80×103,接种小鼠的腹水效价分别为1∶2.56×106和1∶1.28×106。2株单抗均能特异性识别重组ORF2-M1蛋白,但它们识别ORF2-M1蛋白的不同表位。间接免疫荧光试验证实,2株单抗具有良好的特异性,均能够识别HEV。     

人源菌群相关仔猪模型的建立——仔猪的饲养方法

主要介绍了人源菌群相关仔猪模型建立的中心环节,即仔猪的饲养方法。结果表明,HFA仔猪模型的建立方法已基本成熟。     

数据库的数据加密

在信息社会中,数据安全成为突出的问题.随着IT产业的发展,数据加密算法也有了进一步的拓展,从DES算法到RSA算法,其目的是使得攻击者为了破解所付出的代价应远远超过其所获得的利益.     

马疱疹病毒gD蛋白主要抗原域的表达及初步应用

根据GenBank马疱疹病毒1型(EHV-1)和4型(EHV-4)gD基因进行分析,选取同源性较高且抗原性强的C端序列设计一对引物进行扩增。将扩增的基因插入pET-30a的BamHⅠ和SalⅠ之间构建原核表达载体pET-gD。然后将pET-gD质粒转化至BL21(DE3)宿主菌,对培养和表达条件进行优化,实现EHV gD蛋白主要抗原区域的高效表达。将重组pET-gD蛋白进行纯化并接种长白兔制备高免血清。经免疫印迹试验鉴定,证实所得纯化表达产物具有良好的抗原性。