表达H5亚型禽流感病毒HA基因重组火鸡疱疹病毒的构建

为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因区,构建了一株表达H5亚型AIV HA基因的重组病毒HVT(rHVT-US10-HA)。经PCR、间接免疫荧光、western blot及红细胞凝集试验鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的HA蛋白。rHVT-US10-HA的构建为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。     

鸡马立克氏病双价疫苗的免疫效力试验

用“814”、B-1/att弱毒疫苗和HVT疫苗匹配组成双价疫苗,进行实验室和田间免疫效力试验。实验室试验表明,由“814”和HVT匹配构成的双价疫苗,免疫效果很好,优于单价疫苗,尤其明显优于HVT单价疫苗。此双价疫苗的田间试验,也取得了令人满意的结果。     

表达鸡新城疫病毒F蛋白的重组马立克氏病毒的构建及其鉴定

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒。将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(gpt)和MDV US2同源臂的中间转移载体pUAB-gpt中获得重组MDV转移载体pUAB-gpt-wF。将该转移载体与MDV-814疫苗株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA共转染CEF,经同源重组及gpt选择系统筛选,获得带有F基因表达盒的重组MDV(rMDV814-wF)。其体外增殖与亲本病毒没有差异。经间接免疫荧光试验、PCR、Southern-blot及western blot等试验证明,重组病毒在CEF中传至13代以上仍稳定表达NDV的F蛋白。该重组病毒的构建为MDV活载体疫苗的筛选及应用奠定了基础。     

马立克氏病三价疫苗免疫效力的研究

用814、SB-1和HVT FC-126三种血清型的马立克氏病(MD)疫菌株组合成二个MD双价疫苗和一个MD三价疫苗。免疫实验比较证明,MD三价疫苗的MD减少率均为90％以上;二个MD双价苗的MD减少率也都在80％以上。还测定了MD二价和三价疫苗中814,SB-1和HVT疫苗株组合的有效免疫配比剂量。区域性实验结果证明,MD三价疫苗可以有效地降低MD的发病率。     

鸡马立克氏病病毒耐高温毒株的培育及其主要生物学特性

用强毒MDV京-1株通过鸡胚皮肤细胞(CES)培养物连续传代.并在F_(11)～F_(43)之间以逐步提高温度的方法进行处理和克隆,培育了一株能耐受60℃30分钟的毒株。该毒株经进一步培育后,其毒力丧失速度比常规致弱毒株明显地减慢;在一定代次后,繁殖速度大大增加;而免疫原性在100代以内却不及常规致弱的毒株。木试验第一次直接用CES从鸡体分离MDV并获得了成功,MDV在CES培养物上第1代即可产生典型的致细胞病变作用(CPE)。     

牛传染性支气管炎病毒PCR诊断方法的研究

根据已发表的牛传染性鼻气管炎病毒（ＩＢＲＶ）ｇＢ基因序列,应用ｏｌｉｇｏ４．１程序设计一对引物ＰＢ１／ＰＢ２,分别对ＩＢＲＶＬＡ株、洛精、美精、ＢａｒｔｈａＮｕ／６７株、Ｂ７株、云南－１和云南－２分离株进行ＰＣＲ扩增。结果显示７株ＩＢＲ病毒ＤＮＡ均有３９９ｂｐ的特异性片段。用此引物对其同属的伪狂犬病毒（ＰＲＶ）、马立克氏病毒（ＭＤＶ）、鸡传染必喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）进行扩增。均未见特异性条带,证     

应用琼脂扩散试验诊断禽脑脊髓炎的研究

应用琼脂扩散试验证明,制备的禽脑脊髓炎病毒(AEV)抗原具有良好的抗原特异性。人工感染AEV后10天的鸡血清,100％呈现阳性反应。感染后120天,抗体效价仍可达到1∶64。该抗原与鸡支气管炎、新城疫、鸡马立克氏病、鸡传染性喉气管炎及腺病毒等感染鸡的血清均不发生交叉反应。     

DNA免疫防制鸡传染性支气管炎的探索研究

ＯＲＦ完整的ＩＢＶ类Ｍ４１株Ｓ１基因ｃＤＮＡ插入真核表达质粒ｐＣＩ ＣＭＶ启动子下游我隆位点，构成ｐＣＩＳ１用于１周龄ＳＰＦ雏鸡的ＤＮＡ免疫试验。试验鸡生疏腿部肌肉注射ｐＣＩＳ１ＤＮＡ１００ｇ，２周后加强免疫一次。二次免疫２周后，代感染ＩＢＶ Ｈ５２株。结果，ＩＢＶ人工感染后第４天气管－泄殖腔棉拭子鸡胚病毒分离阳性者，免疫试验组为１／６，而对照组为６／６，鸡胚病毒中和试验显示，二次免疫后临感染前及     

DNA免疫诱导SPF鸡对传染性法氏囊病的免疫保护反应

传染性法氏囊病病毒（IBDV）D78株VP2基因插入真核表达质粒pCI CMV启动子下游多克隆位点，构成pCIVP2用于3周龄SPF雏鸡DNA免疫。试验鸡每羽腿部肌肉注射pCI VP2 100μg，2周后加强免疫一次；二免2周后，人工感染vvIBDV G株。结果，两次免疫后血清中和抗体试验组为阳性而对照组为阴性；试验组攻毒后发病11／11，攻毒后1周存活10／11，所有存活鸡法氏囊较正常中度或轻度萎缩；对照组发病6／6，病死5／6，存活1／6；存活鸡法氏囊较正常严重萎缩。组织病理学观察表明，无论法氏囊淋巴滤面积还是其中的淋巴细胞数量，免疫试验组都要远远大于或多于免疫对照组。结果表明，VP2基因DNA免疫可诱导SPF鸡产生和中抗体，并形成对IBDV超强株致死攻击的免疫保护，虽不能阻止临床发病及法氏囊病理损伤发生，但有可能减缓法氏囊病理损伤程度。