牛ATP5B基因启动子与组织差异性表达研究

本研究旨在检测前期构建的牛ATP5B基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒在3T3L-1细胞系中的表达活性,检测ATP5B基因在不同组织中的差异表达情况。经脂质体法转染3T3L-1细胞系后,检测7个重组质粒的荧光素酶相对活性,结合生物信息学软件进一步确认牛ATP5B基因可能的核心启动子;利用试剂盒从秦川牛的16个不同组织提取RNA,反转录后,先检测cDNA,再设计ATP5B基因定量引物和1对β-actin内参引物,进行实时荧光定量反应,最后,结合软件比对不同物种的ATP5B基因近端启动子和氨基酸序列。结果,通过转染细胞和荧光素酶活性分析,统计学分析证实重组质粒pATP5B-462荧光素酶活性最高,软件分析所对应的启动子区域-547~-230bp存在TATA盒、CAAT盒、GATA盒、v-Myb、deltaE这些重要转录调控元件。牛的ATP5B基因组织表达谱结果分析显示,该基因在后腿肌和背最长肌中相对高水平表达,在睾脂、心、瓣胃、皱胃、大肠、小肠、背脂、肾和肝中相对中度表达,在脾、肺、盲肠、瘤胃和网胃中相对微量表达。氨基酸序列比对结果显示,牛ATP5B基因与山羊、绵羊、小鼠、猪和人的ATP5B基因的相似性较高,牛ATP5B基因编码的氨基酸序列与山羊和绵羊的相似性分别高达99%、98%,与人和小鼠的相似性均为96%,与猪的相似性为91%。本研究初步确认了牛ATP5B基因可能的核心启动子,并得到了牛ATP5B基因在16个组织的表达谱结果,软件比对基因序列的结果进一步表明,ATP5B基因是一个较为保守的基因,这为进一步研究牛ATP5B基因的转录调控机制及功能都奠定了基础。     

羊绒生长期、休止期陕北白绒山羊皮肤组织中KAP9.2和Hoxc13基因的表达

【目的】研究角蛋白相关蛋白9.2基因(KAP9.2)和Hoxc13基因在羊绒生长不同阶段皮肤组织中的表达量对产绒量的影响,为羊绒生长的调控机理研究奠定基础。【方法】以陕北白绒山羊为研究对象,以奶山羊作为对照,利用qRT-PCR方法,检测羊绒生长期和休止期高产、低产绒量陕北白绒山羊皮肤组织中KAP9.2和Hoxc13基因的表达量。【结果】 对于KAP9.2基因,在羊绒生长期高产绒量陕北白绒山羊的相对表达量极显著低于低产绒量陕北白绒山羊（P＜0.01）,而在羊绒休止期高产绒量陕北白绒山羊的相对表达量却显著高于低产绒量陕北白绒山羊和奶山羊（P＜0.05）;对于Hoxc13基因,在羊绒休止期高产和低产绒量陕北白绒山羊的相对表达量极显著高于奶山羊（P＜0.01）。高产和低产绒量陕北白绒山羊皮肤组织中KAP9.2和Hoxc13基因在生长期、休止期平均相对表达量的变化趋势相似,均表现为生长期极显著低于休止期（P＜0.01）。【结论】KAP9.2对绒毛生长有抑制作用;Hoxc13对KAP9.2基因的表达可能具有调控作用。     

环境温度对动物肠道微生物菌群影响的研究进展

温度是一个重要的非生物环境变量,能够驱动动物谱系的适应轨迹和动物群落的组成。环境温度作为影响动物肠道微生物菌群变化的众多因素之一,能够影响肠道微生物菌群的组成及丰度,进而调控宿主生长、发育、繁殖、免疫等生物学过程及功能。动物肠道核心菌群的组成及其代谢产物在不同温度下存在显著差异,在单胃动物、反刍动物等中都有相应的报道。极端温度主要通过诱导肠道微生物菌群产生结构和功能上的差异,进而对宿主表型产生影响。目前,对于温度如何影响动物肠道菌群的了解仍非常有限。本文针对不同环境温度条件下,肠道微生物菌群结构和功能的差异及相关研究进行了总结及综述。探讨由环境温度引起的肠道微生物菌群与宿主适应机制之间的关系,包括对宿主产热机制、消化系统和免疫系统等其他方面的影响并开展研究,将为肠道微生物对宿主健康的调节提供参考和思路。     

红鳍东方鲀受精卵孵化育苗关键技术

红鳍东方俗称红鳍、东方、河，因其味道鲜美、营养价值高而在国际市场上颇受欢迎，尤其是日本市场，需求量较大。近几年来，我国人工养殖红鳍东方发展迅速，对苗种的需求量不断上升，因此沿海省份纷纷开展人工育苗，由于我国红鳍东方的自然资源不多，多数单位是从日本等地购入受精卵进行育苗，生产很不稳定。现将红鳍东方受精卵人工育苗的关键技术介绍如下：１ 水质控制 海水水质符合《渔业水质标准》，取水区滩涂面积少，海水交换量大，海水比重１．０１５～１．０２５ｐＨ值７．５～８．５。前期育苗用海水需经完全沙滤后使用。２ 受精卵…     

花鲈人工繁殖的研究

１９９３～１９９５年，作者从浙江沿海三门湾及象山港采捕花鲈亲鱼，经暂养促熟处理（控制水温、盐度、溶氧水平，投喂、填喂活饵，不定期注射适量的ＬＲＨ－Ａ等），雌鱼的性腺可发育到Ⅳ＿３期，对外源激素能引起正常的排卵反应。试验用的催产剂及剂量为：雌鱼每千克体重用１．５～２．５ｍｇＰＧ＋１２００～２２００ＩＵＨＣＧ＋７０～１４０μｇＬＲＨ－Ａ，或用６～１０ｍｇＤＯＭ＋２００～３８０μｇＬＲＨ－Ａ；雄鱼的注射剂量减半。在水温１４．５～１６℃的条件下，注射后的效应时间为３６～９７小时。本试验的平均受精率为８９．２２％，平均孵化率为７５．４３％。     

冷季补饲对那曲牦牛生长性能和血液生化指标的影响

[目的]为明确高寒牧区牦牛冷季补饲效果。[方法]本试验通过测定日增重和采集血液去分析补饲精饲料对不同年龄那曲牦牛生长速度和血液生化指标的影响。[结果]研究表明,2岁、3岁牦牛试验组和对照组的日增重均显著高于1岁、4岁(P0.05);在不同年龄间,牦牛各个年龄的试验组日增重均高于对照组,但1岁、2岁试验组极显著高于对照组(P0.01),3岁、4岁试验组日增重显著高于对照组(P0.05)。不同年龄阶段淀粉酶(AMY)、尿素氮(BUN)、尿素(UREA)差异极显著(P0.01),钙(Ca)、磷(P)和尿素氮/肌酐差异显著(P0.05)外,其余指标差异均不显著(P0.05),同一年龄的牦牛在不同的饲养管理水平下,各项生化指标中补饲牦牛的淀粉酶(AMY)、尿素氮(BUN)、尿素(UREA)极显著高于放牧牦牛(P0.01),钙(Ca)和尿素氮/肌酐显著高于放牧牦牛(P0.05),磷(P)显著低于放牧牦牛(P0.05)。[结论]表明冷季补饲有效补充了那曲牦牛的机体能量,为其机体冷季正常生长发育提供了动力,从而提高了其越冬能力和适应性。     

金头鲷海水网箱养殖技术

金头鲷(Sparus aurata)属鲈形目鲷科,鱼体稍呈侧扁型,身体黄色,头部有一金黄色环带,故名金头鲷。广泛分布于大西洋沿岸东侧的不列颠群岛、直布罗陀海峡到佛得角岬角以及金丝雀岛周围、地中海和黑海等地,为近海大型暖温性底层鱼类,所以又名"大西洋鲷"。肉食性,生性凶猛,喜捕食小型鱼虾、贝类,为底层栖息鱼类。金头鲷具有广温、广盐的特性,在适宜的环境中,食欲极为旺盛。该鱼生长迅速、抗病能力强、肉质细嫩、营养丰富,欧州人称为"皇家鲷鱼",是一种名贵的经济鱼类,也是欧美和南亚国家水产养殖中最重要的鱼种之一。     

秦川牛PLAG1基因启动子克隆及转录因子预测

【目的】探究秦川牛多形性腺瘤基因1(pleomorphic adenoma gene 1,PLAG1)的组织表达规律,并克隆其启动子区序列,预测分析其关键转录因子结合位点,为探究其转录调控机制提供理论参考。【方法】采集3头20月龄秦川牛成年公牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、皮下脂肪、背最长肌、瘤胃组织,用实时荧光定量PCR方法检测PLAG1基因在不同组织中的相对表达量,同时克隆PLAG1基因上游启动子区序列,利用生物信息学软件预测PLAG1基因转录起始位点及启动子核心区域,分析、筛选核心启动子区域的关键转录因子结合位点。【结果】PLAG1基因在秦川牛各组织中均有表达,且在背最长肌中的表达量显著高于其他组织(P<0.05)。PLAG1基因启动子序列全长1 861 bp,生物信息学预测分析发现PLAG1基因核心启动子区位于-297―+42 bp,存在高度保守的Krüppel样因子5(KLF5)、cAMP反应元件结合蛋白1(CREB1)和早期生长反应因子1(EGR1)转录因子结合位点,且CpG岛位于PLAG1基因核心启动子区域内。【结论】PLAG1基因在肌肉组织中高表达,其核心启动子区...     

腺病毒与慢病毒感染牛肌肉原代细胞的研究

[目的]比较腺病毒和慢病毒侵染牛肌肉卫星细胞MOI值的差异,选择较优的侵染方式。[方法]从新生牛犊背最长肌中分离并纯化出牛肌肉卫星细胞,通过病毒侵染靶细胞的方法比较腺病毒和慢病毒对牛肌肉卫星细胞的侵染能力,确定最佳感染复数(Multiplicity of infection,MOI)。[结果]成功分离出牛肌肉卫星细胞,经过体外培养,可以用于细胞侵染研究;随着MOI值的增大,腺病毒和慢病毒侵染的细胞荧光强度均逐渐增强;当腺病毒侵染牛肌肉卫星细胞的MOI值为3 000,慢病毒侵染靶细胞的MOI值为300时,荧光强度均较强,细胞形态即将发生变化。相对而言,慢病毒较腺病毒更易侵染原代肌肉细胞,并且荧光强度较强,但侵染效率比较低。[结论]对于原代细胞,选择慢病毒侵染更为合适。该试验结果为应用腺病毒或慢病毒介导的功能基因在牛肌肉卫星细胞中的过表达或干扰沉默研究提供了参考资料。