柔嫩艾美耳球虫表面抗原（EtSAG）基因的分离及鉴定

利用本实验室前期获得的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）孢子化卵囊和未孢子化卵囊差异表达ESTs序列,选取编号为BW4-C03的孢子化卵囊,采用RACE技术,获得该基因全长序列。经BLAST分析,该序列与柔嫩艾美耳球虫表面抗原有72%以上的同源性,命名为EtSAG。利用荧光定量PCR（Real-time PCR）检测发现该基因在孢子化卵囊的转录拷贝数最高,且随着孢子化时间的延长,转录拷贝数逐渐增加。采用原核表达载体pET-28C表达该基因,得到的融合蛋白大小约为36 kDa,符合预期大小。经Western blot分析,该重组蛋白可被兔抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。本研究结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。     

"叭咪宝"防治犬体外寄生虫的试验

犬的寄生虫病,特别是一些体外寄生虫病,如疥螨虫、跳蚤、虱子和蜱等的感染是一件令人头痛的事情。对犬寄生虫病采用注射和口服药物进行治疗,需要通过兽医进行,对常规的防治带来一定的麻烦。参考国外的经验,采用在犬的沐浴液中添加一定的抗寄生虫药物,在制剂技术上给予一定的改造,可以使犬主人在亲近和护理工作中达到防治犬体外寄生虫病的目的,使防治犬寄生虫病的工作更普及化、经常化。     

柔嫩艾美球虫地克珠利和马杜拉霉素抗药株与敏感株孢子化卵囊18SrDNA基因的差异

为探讨抗球虫药物地克珠利和马杜拉霉素对柔嫩艾美球虫18SrDNA的影响，分别对人工诱导的柔嫩艾美球虫地克珠利抗药株（ETAD）、马杜拉霉素抗药株（ETAM）和药物敏感株（ETDS）孢子化卵囊的18SrDNA基因进行了克隆测序，并通过生物信息软件进行对比差异分析。结果显示，ETAM株有3个碱基发生突变（T170突变为C，T646突变为C，G694突变为C）；ETAD株有1个碱基发生突变（T646突变为C）。经进一步分析比较，发现ETAM株18SrRNA的二级结构与ETDS株的差异很大，而ETAD株18SrRNA的二级结构则与ETDS株的完全相同。这些碱基的突变有可能是导致E．tenella产生抗药性的原因之一。     

奶牛球虫流行病学调查研究

自半开发式分隔栏引入养牛业后,球虫病便成为养牛业最严重的疾病之一。本文对内蒙古、上海三个奶牛场球虫病流行情况进行了调查研究。结果表明,该3个牛场优势流行种均为牛艾美尔球虫、椭圆艾美尔球虫和邱氏艾美尔球虫。此3个牛场奶牛一般从4~5周龄开始感染球虫,感染率随周龄增加而增大,上海2牛场在第14周龄感染率达最高,以后随之减少,内蒙古1牛场在第14周龄感染率达最高,以后随之减少。据此,再结合不同环境和饲养管理条件,可以确定不同牛场的最佳治疗时机。     

青海省祁连县绵羊球虫感染情况和种类调查研究

对青海省祁连县默勒镇96只绵羊进行了球虫感染情况和种类调查研究。结果显示:总感染率为70.8%,其中1岁绵羊感染率83.3%,2岁羊感染率76.7%,成年羊感染率46.7%;多为2～5种球虫混和感染;平均OPG值为154.1(20～1460)。显微镜下对孢子化卵囊进行形态学观察,测量卵囊大小,显微照相,并列出了各种球虫的主要鉴别特征,绘制了卵囊形态图,进行虫种鉴定,共检出12种艾美耳球虫,其中确定的有11种:小型艾美耳球虫(Eimeria.parva)、类绵羊艾美耳球虫(E.ovinoidalis)、槌形艾美耳球虫(E.crandallis)、威布里吉艾美耳球虫(E.weybridgensis)、苍白艾美耳球虫(E.pallida)、阿撒他艾美耳球虫(E.ahsata)、浮氏艾美耳球虫(E.faurei)、卵状艾美耳球虫(E.oodeus)、巴库艾美耳球虫(E.bakuensis)、颗粒艾美耳球虫(E.granulosa)以及错乱艾美耳球虫(E.intricata),前4种为优势虫种;未定种一种。     

NP-AC-1中草药添加剂抗鸡E.acervulina和E.necatrix效力试验

鸡球虫病是一种危害极其严重的全球性寄生虫病,全世界每年因球虫病造成的经济损失约20多亿美元.长期使用化合药预防所产生的耐药性、药物毒副作用和高残留已经引起了社会各界极大关注.中草药饲料添加剂具有促进家禽生长、提高机体免疫力等多种生物学效应,并因其低毒、无害、无残留、不易产生耐药性等独特优势愈来愈被我国畜牧工作者重视.鸡球虫病是由艾美耳属(Eimeria)球虫引起,其中柔嫩艾美耳(E.tenella)的致病性最为严重,本课题组开发的中草药饲料添加剂(主要由青蒿、仙鹤草等等组成)在临床试验中对E.tenella所引起的鸡球虫病有良好的预防效果.本试验观察了该添加剂对堆型艾美耳球虫(E.acervulina)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)的疗效,为临床用药提供更为科学依据.     

上海市市售青蛙寄生蠕虫感染情况初步调查

为了解上海市市售青蛙蠕虫的感染情况,对52只黑斑蛙(Rana nigromaculata)进行剖检,按脏器检查、收集寄生虫虫体,统计寄生虫的感染率与感染强度。结果显示,青蛙蠕虫感染率为90.38%,平均感染强度为20.21条。不同种类寄生虫的感染情况明显不同,线虫、吸虫、绦虫和棘头虫的感染率分别为50.00%、86.54%、17.31%和51.92%,感染强度分别为3.38、15.00、5.11和5.22条。不同脏器寄生虫的感染情况不同,肠道的寄生虫感染率最高,为90.38%;肠道、肌肉与皮下寄生虫的感染强度分别为15.34和11.38条,明显高于其他器官。不同种类寄生虫的寄生虫部位明显不同,线虫、吸虫和棘头虫主要来源于肠道,绦虫主要来源于肌肉与皮下。通过对检出虫体的形态进行初步观察,吸虫、线虫、绦虫和棘头虫种类分别约有6、3、1和2种,但具体种类尚需进一步鉴定。本调查结果为掌握上海市市售青蛙寄生虫感染状况和做好寄生虫病防控提供了基础数据。     

上海市市售蟾蜍寄生蠕虫感染情况初步调查

为了解上海市市售蟾蜍寄生蠕虫的感染情况,对60只中华大蟾蜍进行剖检,按脏器检查、收集寄生虫虫体,统计寄生虫的感染率与感染强度。结果显示,蟾蜍寄生虫感染率为100%,平均感染强度为28.23条。不同种类寄生虫的感染情况明显不同,线虫、吸虫、绦虫和棘头虫的感染率分别为93.33%、73.33%、8.33%和15.00%,感染强度分别为17.52、14.48、10.40和2.67条。不同脏器寄生虫的感染情况不同,肠道和肺脏的寄生虫感染率最高,分别为100%和88.33%;肠道、肺脏、肌肉寄生虫的感染强度分别为15.63、12.28和11.33条,明显高于其他器官。不同种类寄生虫的寄生虫部位明显不同,线虫主要来源于肺部和肠道,吸虫和棘头虫主要来源于肠道,绦虫主要来源于肌肉。通过对检出虫体的形态进行初步观察,吸虫、线虫、绦虫和棘头虫种类分别约有3、4、1和1种,但具体种类尚需进一步鉴定。本调查结果为掌握上海市市售蟾蜍寄生虫感染状况和做好寄生虫病防控提供了基础数据。     

柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导

为了研究耐药性柔嫩艾美耳球虫产生耐药性的机理,本研究在实验室条件下,采用药物浓度递增的方法,以15 mg/kg为起始诱导浓度,对柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药性进行诱导.经过10次传代,获得了对60 mg/kg盐霉素耐药的柔嫩艾美耳球虫虫株.以抗球虫指数、最适抗球虫活性百分率、病变记分减少率和相对卵囊产量四项指标综合判定柔嫩...     

堆型艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究

为确定堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)早熟株合适的免疫剂量,设立7个早熟株免疫攻虫组、7个母株免疫攻虫组、1个不免疫攻虫组和1个不免疫不攻虫组,7个早熟株/母株免疫组的免疫剂量为孢子化卵囊100、200、400、600、800、1 000、2 000个/羽,经嗉囊感染,7日龄首次免疫,14日龄以同等剂量进行第二次免疫,21日龄以1.5×105个/羽的同源母株进行攻虫,28日龄结束试验,以增重、肠道病变记分和卵囊减少率为试验指标。并对早熟株中免疫保护效果较好的2个免疫剂量进行重复试验,免疫方法、试验周期、试验指标同第一批试验,攻虫剂量为2×105个/羽的同源母株。结果显示,免疫期间,各免疫组的增重与不免疫组差异不显著(P>0.05);攻虫期间,早熟株400、600、800、1 000个/羽和母株600、800、1 000个/羽免疫组的相对增重与不免疫不攻虫组差异不显著(P>0.05);肠道病变记分,除2 000免疫组明显低于不免疫攻虫组(P<0.05)外,其余各免疫组虽低于不免疫攻虫组,但与其差异不显著(P>0.05);卵囊减少率,早熟株和母株400～2 000个/羽免疫组均达90%以上,其中600、800个/羽免疫组达97%以上。用早熟株600、800个/羽进行免疫重复试验,两个免疫组攻虫期间的相对增重和肠道病变记分均与不免疫不攻虫组差异不显著(P>0.05),而与不免疫攻虫组差异显著(P<0.05),其卵囊减少率均在88%以上。研究结果表明,该堆型艾美耳球虫早熟株保持了良好的免疫原性,不同免疫剂量均能诱发鸡产生免疫保护力,其中以600、800个/羽的免疫效果更好,可考虑以600个/羽作为该早熟株在疫苗制备中的推荐免疫剂量。