柔嫩艾美耳球虫A08基因的阶段表达分析与毕赤酵母表达系统构建

对A08蛋白基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)的转录情况进行分析,同时以A08蛋白cDNA为模板扩增出1 083 bp的目的基因片段,将该基因连接到pGEM-T-easy载体上,经序列测定和双酶切鉴定表明为A08基因.用EcoRI和NotI酶切回收目的片段连接至用同样酶切的真核表达载体pPIC9k上,构建了重组质粒pPIC9k-A08,转化大肠杆菌TOP10后,提取质粒,经酶切鉴定正确后用SacI将重组质粒线性化,再电转入毕赤酵母GS115菌株,G418筛选抗性重组子,经PCR鉴定正确重组子后做甲醇诱导表达.RT-PCR结果显示该基因在子孢子阶段的转录拷贝数显著高于其他发育阶段,是一个子孢子高表达基因.重组酵母诱导表达产物经SDS-PAGE检测证实,柔嫩艾美耳球虫A08基因在毕赤酵母中获得表达.Western-blot初步分析表明,表达产物具有免疫学反应活性.     

奶牛球虫流行病学调查研究

自半开发式分隔栏引入养牛业后,球虫病便成为养牛业最严重的疾病之一。本文对内蒙古、上海三个奶牛场球虫病流行情况进行了调查研究。结果表明,该3个牛场优势流行种均为牛艾美尔球虫、椭圆艾美尔球虫和邱氏艾美尔球虫。此3个牛场奶牛一般从4~5周龄开始感染球虫,感染率随周龄增加而增大,上海2牛场在第14周龄感染率达最高,以后随之减少,内蒙古1牛场在第14周龄感染率达最高,以后随之减少。据此,再结合不同环境和饲养管理条件,可以确定不同牛场的最佳治疗时机。     

鸡球虫广州虫株对三种药物的抗药性研究

球虫病是阻碍养鸡业发展最重要的寄生虫病，本病分布广、感染率高，几乎养鸡的地方都有球虫。我国是养鸡大国，数量居世界首位，据FAO估计，我国在１９９８年的存栏鸡数为３１．１１亿只，占世界总数的２３．０８％。若不能有效控制球虫病，其现场发病率可达５０％～７０％，死亡率可达２０％～３０％，严重爆发时其死亡率更高，每年给养鸡业造成的经济损失可达数亿元。为有效防制鸡球虫病，国内外学者在免疫预防和药物防治等方面进行了大量的研究，取得了非常可喜的成绩，先后批准上市的抗球虫药近５０个品种，目前国内应用的抗球虫药也…     

柔嫩艾美耳球虫抗药性相关基因M20的克隆与表达

利用前期构建的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株与各自母株之间的抑制性消减文库而获得的ESTs序列,选择其中一个差异表达的EST序列(克隆号为M20),采用RACE技术,以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA为模板,扩增获得了该基因的全长cDNA序列,命名为M20,该基因全长847 bp,包括一个525 bp的开放阅读框,编码174个氨基酸,预测理论分子量约为19 ku。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在敏感株中表达量高于地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株;在不同发育阶段中,未孢子化卵囊表达量高于孢子化卵囊、子孢子以及裂殖子阶段虫体。将该基因克隆于原核表达质粒pET28b中,构建重组质粒pET28b-M20,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导表达获得了重组蛋白,分子量约约为23 ku,该蛋白以包涵体形式存在,在IPTG诱导8 h后表达稳定,Western blot检测表明,其具有较好的免疫原性。     

亚麻油日粮抗感染柔嫩艾美耳球虫的效力研究

采用2因子多水平试验设计研究了亚麻油日粮抗感染柔嫩艾美耳球虫的效力。结果表明：感染球虫显著地影响试鸡的增重率(P＜0．05)；感染组试鸡的日采食量均大于不感染组，但差异不显著(P＞0．05)；根据抗球虫指数ACI的公式计算获得，4％亚麻油日粮抗球虫指数为145，6％亚麻油抗球虫日粮指数为147，8％亚麻油的日粮抗球虫指数达162．7。该研究证明适宜比例的亚麻油日粮能防止球虫的感染。     

一种柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白单抗的制备及初步应用

利用原核表达的柔嫩艾美耳球虫棒状体蛋白（EtRP）的重组蛋白免疫BALB／c小鼠,经4次免疫后取脾脏制备免疫脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合,经间接ELISA和Western blot筛选获得一株抗EtRP蛋白的特异性单克隆抗体细胞株,命名为2E3,亚类鉴定为IgG2a。细胞上清和小鼠腹水的效价分别为1：40和1：2．56×10^4。利用该单抗对EtRP在柔嫩艾关耳球虫子孢子中的分布进行分子定位,结果显示该蛋白主要分布于子孢子的顶端;而当子孢子在DMEM培养基中41℃孵育1h后,该蛋白则分布于整个虫体。研究结果表明,成功制备了EtRP单克隆抗体,为进一步研究球虫相关蛋白功能奠定了基础。     

亚麻油日粮抗感染柔嫩艾美耳球虫的效力研究

采用2因子多水平试验设计研究了亚麻油日粮抗感染柔嫩艾美耳球虫的效力.结果表明感染球虫显著地影响试鸡的增重率(P<0.05);感染组试鸡的日采食量均大于不感染组,但差异不显著(P>0.05);根据抗球虫指数ACI的公式计算获得,4%亚麻油日粮抗球虫指数为145,6%亚麻油抗球虫日粮指数为147,8%亚麻油的日粮抗球虫指数达162.7.该研究证明适宜比例的亚麻油日粮能防止球虫的感染.     

合理使用抗鸡球虫药

1　如何合理使用抗球虫药1.1　合理选择药物　目前市售抗球虫药品种繁多 ,选择余地较大。但每种药物对球虫的作用峰期、有效虫种不尽一致 ,各种药物间的配伍禁忌、协同效果不完全一样 ,药物的安全性也相差很大。理想的抗球虫药标准 :一是抗球虫谱广 ,性质稳定 ;二是能够提高饲料报酬 ,促进鸡的生长发育 ;三是组织中残留量少 ,无毒性 ,多用途 ,又不影响鸡产生免疫力 ;四是价格低廉 ,容易与饲料混合或易溶于水。但是对一个具体的鸡场而言 ,还要结合自身特点加以考虑。这些因素包括 :鸡场的不同优势虫种、鸡场球虫的抗药性特点、鸡的品种 (是肉…     

上海市郊家鸭球虫感染情况调查研究

为了解上海市郊家鸭球虫感染状况,于2008年9～10月,从上海市郊10个鸭场采集了457份粪样,采用饱和盐水漂浮法检查球虫卵囊,并将球虫卵囊置于2.5%重铬酸钾溶液中培养至孢子化,根据形态与结构进行种类鉴定.结果发现,10个鸭场的球虫阳性率为100%,总感染率为61%(278/457).按不同月龄统计,3月龄以内感染率为100%,6,3～6月龄感染率为82%,6～9月龄感染率为70%,9～12月龄感染率为47%,12月龄以上感染率为54%.每克粪便卵囊数(OPG)为300～112 200,平均OPG为4 841.3月龄以内鸭的球虫感染强度最高,平均OPG为37 015.观测了100个孢子化卵囊,鉴定出艾美耳科球虫3属10种,其中艾美耳属(Eimeria)5种(占36%)、温扬属4种(占52%),等孢属1种(占12%).调查表明,上海市郊鸭群普遍感染球虫,3月龄以内鸭的感染率和感染强度最高,是鸭球虫病预防控制的重点;鉴定出的10种球虫中,未检出致病性强的毁灭泰泽球虫(Tyzzeria perniciosa).     

刚地弓形虫18S rDNA基因的克隆与序列分析

采用PCR方法从弓形虫RH株和CN株总DNA中分别扩增到18S rDNA基因，与pGEM-T easy vector连接，并进行DNA测序分析。结果表明，2个虫株均扩增出1745bp的片段，用DNAMAN软件对其与GenBank上2个虫株相应序列进行同源性比较，4个虫株的同源性为99．34％。刚地弓形虫虫株在不同宿主和不同区域上存在着一定的差异。