柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d基因的酵母表达分析

在毕赤酵母真核表达系统中表达柔嫩艾美耳球虫真核起始因子3d(Emeria tenella eukaryotic initiation factor 3d,EteIF3d)基因,并获得具有天然构象的活性蛋白。将EteIF3d基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,将构建正确的重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115,用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选,获得含重组质粒的酵母表达细胞。在含1%甲醇的BMMY培养基中诱导培养,收集1~3 d的表达上清。表达产物进行SDS-PAGE检测,并用Western blot进行免疫学分析。结果表明,本研究成功构建了重组质粒pPIC9k-EteIF3d,并成功表达该蛋白,且该蛋白能与兔抗EteIF3d血清特异性结合,具有良好的抗原性。EteIF3d基因可在真核表达系统毕赤酵母中表达,且获得蛋白具有抗原性,从而为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。     

亚麻油日粮抗感染柔嫩艾美耳球虫的效力研究

采用2因子多水平试验设计研究了亚麻油日粮抗感染柔嫩艾美耳球虫的效力.结果表明感染球虫显著地影响试鸡的增重率(P<0.05);感染组试鸡的日采食量均大于不感染组,但差异不显著(P>0.05);根据抗球虫指数ACI的公式计算获得,4%亚麻油日粮抗球虫指数为145,6%亚麻油抗球虫日粮指数为147,8%亚麻油的日粮抗球虫指数达162.7.该研究证明适宜比例的亚麻油日粮能防止球虫的感染.     

合理使用抗鸡球虫药

1　如何合理使用抗球虫药1.1　合理选择药物　目前市售抗球虫药品种繁多 ,选择余地较大。但每种药物对球虫的作用峰期、有效虫种不尽一致 ,各种药物间的配伍禁忌、协同效果不完全一样 ,药物的安全性也相差很大。理想的抗球虫药标准 :一是抗球虫谱广 ,性质稳定 ;二是能够提高饲料报酬 ,促进鸡的生长发育 ;三是组织中残留量少 ,无毒性 ,多用途 ,又不影响鸡产生免疫力 ;四是价格低廉 ,容易与饲料混合或易溶于水。但是对一个具体的鸡场而言 ,还要结合自身特点加以考虑。这些因素包括 :鸡场的不同优势虫种、鸡场球虫的抗药性特点、鸡的品种 (是肉…     

亚麻油日粮抗感染柔嫩艾美耳球虫的效力研究

采用2因子多水平试验设计研究了亚麻油日粮抗感染柔嫩艾美耳球虫的效力。结果表明：感染球虫显著地影响试鸡的增重率(P＜0．05)；感染组试鸡的日采食量均大于不感染组，但差异不显著(P＞0．05)；根据抗球虫指数ACI的公式计算获得，4％亚麻油日粮抗球虫指数为145，6％亚麻油抗球虫日粮指数为147，8％亚麻油的日粮抗球虫指数达162．7。该研究证明适宜比例的亚麻油日粮能防止球虫的感染。     

用RAPD技术进行鸡球虫不同种株的多态性研究

本文以随机引物成对组合的方式，对和缓艾美耳球虫（Eimeria,mitis)、巨型艾美耳球虫（E.maxima)和柔嫩艾美耳虫（E.tenella)3个种各2个单卵囊感染纯株、E.tenella6个抗药性表型不同的单卵囊感染性株进行了RAPD分析，结果发现，RAPD技术能非常有效地用于上述球虫种、株间的鉴别。     

柔嫩艾美耳球虫伴侣蛋白TCP-1亚基α的特性和功能初步分析

柔嫩艾美耳球虫是一种重要的寄生于鸡盲肠细胞内的寄生原虫,可引起危害严重的鸡球虫病。目前,对鸡球虫病的预防和治疗主要依靠抗球虫药,而药物的广泛使用使球虫产生了严重的耐药性。为研究球虫耐药性产生的机制,本实验室前期对诱导的地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株和亲本敏感株进行转录组测序,经分析发现TCP-1亚基α为耐药株和敏感株的差异表达基因且在耐药株上调表达。本文以柔嫩艾美耳球虫敏感株为模板,成功克隆出TCP-1亚基α基因,构建了原核表达重组质粒p ET-Et TCP-1α,并成功诱导表达了重组蛋白r Et TCP-1α,用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔和BALB/C小鼠获得多克隆抗体。用荧光定量PCR和Western blot方法检测柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株和马杜拉霉素耐药株TCP-1亚基α基因的m RNA转录和翻译水平,同时检测了该基因在球虫不同发育阶段的转录水平和翻译水平。结果显示,Et TCP-1α在2个耐药株的m RNA转录和蛋白翻译水平明显高于敏感株,而且该蛋白在第二代裂殖子的表达最高;间接免疫荧光实验显示该蛋白主要位于子孢子和第二代裂殖子表面,当虫体入侵DF-1细胞进行裂殖生殖后,该蛋白分布于整个虫体,且表达量明显升高。因此,推测Et TCP-1α在柔嫩艾美耳球虫细胞内的生长发育和耐药性的产生过程中发挥了一定的作用。     

堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子的克隆和表达

本研究扩增和克隆了堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子,并在大肠杆菌中表达出MIF重组蛋白。根据GenBank中的MIF mRNA序列,设计特异引物,采用PCR方法以堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库为模板扩增获得MIF基因,将MIF基因片段连接到原核表达载体pET-28a（＋）,构建重组表达质粒pET28a—MIF,并在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达,对表达产物进行Western blot分析。结果从堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库中扩增出MIF基因片段,长度为709bp;经序列分析,扩增片段的核苷酸序列与GenBank中登录的MIF序列的同源性为99．5％;经SDS-PAGE检测表明重组质粒pET（28a）-MIF在大肠杆菌中以包涵体形式表达;Western blot分析证明堆形艾美耳球虫抗血清可与重组表达蛋白特异性结合。本研究结果为进一步研究该基因的功能奠定了基础。     

奶·牛·球·虫·卵·囊·检·测·方·法

牛球虫病是由牛球虫寄生在牛小肠下端和整个大肠的上皮细胞内引起的以出血性肠炎为特征的寄生性原虫病,在多雨季节,长期在低洼、多沼泽的草甸上放牧,或牛舍潮湿,均易引起此类疾病的发生,主要发于犊牛。该病对养牛业的危害较大,据报道美国养牛业每年因球虫病导致的经济损失达几亿美元。我国牛球虫病发病率可高达87．5％,危害十分严重。该病的诊断还主要是根据临床症状和剖检变化以及粪检卵囊来确诊。     

柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株的实验室诱导

采用药物浓度逐渐递增的方法 ,以 0 .0 5× 10 - 6 地克珠利和 2 .0× 10 - 6 马杜拉霉素为起始诱导浓度 ,分别经过 18次和 2 0次传代 ,在实验室诱导了柔嫩艾美耳球虫 (Eimeria tenella)对地克珠利和马杜拉霉素的抗药性虫株。经抗药性检测 ,以最适抗球虫指数 (POAA)、病变记分减少率 (RL S)、相对卵囊产量 (ROP)和抗球虫指数 (ACI) 4项指标综合判定及综合抗药性指数 (GI) 2种方法共同判定 ,获得的地克珠利抗药株对 1.2× 10 - 6地克珠利具有完全抵抗力 ,而对马杜拉霉素完全敏感 ;马杜拉霉素抗药株对 7.0× 10 - 6 的马杜拉霉素具有完全抵抗力 ,而对地克珠利完全敏感。     

上海警犬蜱病的调查

对上海市公安局警犬基地发生的警犬蜱病流行病学进行了调查,确认危害病原为血红扇头蜱(Rhipi-cephalussanguineus),并进行了蜱在警犬体表出没时间,感染率等方面的调查,为控制警犬蜱病提供了基础。