柔嫩艾美耳球虫抗药性相关基因M20的克隆与表达

利用前期构建的柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株与各自母株之间的抑制性消减文库而获得的ESTs序列,选择其中一个差异表达的EST序列(克隆号为M20),采用RACE技术,以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA为模板,扩增获得了该基因的全长cDNA序列,命名为M20,该基因全长847 bp,包括一个525 bp的开放阅读框,编码174个氨基酸,预测理论分子量约为19 ku。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在敏感株中表达量高于地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株;在不同发育阶段中,未孢子化卵囊表达量高于孢子化卵囊、子孢子以及裂殖子阶段虫体。将该基因克隆于原核表达质粒pET28b中,构建重组质粒pET28b-M20,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导表达获得了重组蛋白,分子量约约为23 ku,该蛋白以包涵体形式存在,在IPTG诱导8 h后表达稳定,Western blot检测表明,其具有较好的免疫原性。     

柔嫩艾美耳球虫A08基因的阶段表达分析与毕赤酵母表达系统构建

对A08蛋白基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)的转录情况进行分析,同时以A08蛋白cDNA为模板扩增出1 083 bp的目的基因片段,将该基因连接到pGEM-T-easy载体上,经序列测定和双酶切鉴定表明为A08基因.用EcoRI和NotI酶切回收目的片段连接至用同样酶切的真核表达载体pPIC9k上,构建了重组质粒pPIC9k-A08,转化大肠杆菌TOP10后,提取质粒,经酶切鉴定正确后用SacI将重组质粒线性化,再电转入毕赤酵母GS115菌株,G418筛选抗性重组子,经PCR鉴定正确重组子后做甲醇诱导表达.RT-PCR结果显示该基因在子孢子阶段的转录拷贝数显著高于其他发育阶段,是一个子孢子高表达基因.重组酵母诱导表达产物经SDS-PAGE检测证实,柔嫩艾美耳球虫A08基因在毕赤酵母中获得表达.Western-blot初步分析表明,表达产物具有免疫学反应活性.     

上海市市售青蛙寄生蠕虫感染情况初步调查

为了解上海市市售青蛙蠕虫的感染情况,对52只黑斑蛙(Rana nigromaculata)进行剖检,按脏器检查、收集寄生虫虫体,统计寄生虫的感染率与感染强度。结果显示,青蛙蠕虫感染率为90.38%,平均感染强度为20.21条。不同种类寄生虫的感染情况明显不同,线虫、吸虫、绦虫和棘头虫的感染率分别为50.00%、86.54%、17.31%和51.92%,感染强度分别为3.38、15.00、5.11和5.22条。不同脏器寄生虫的感染情况不同,肠道的寄生虫感染率最高,为90.38%;肠道、肌肉与皮下寄生虫的感染强度分别为15.34和11.38条,明显高于其他器官。不同种类寄生虫的寄生虫部位明显不同,线虫、吸虫和棘头虫主要来源于肠道,绦虫主要来源于肌肉与皮下。通过对检出虫体的形态进行初步观察,吸虫、线虫、绦虫和棘头虫种类分别约有6、3、1和2种,但具体种类尚需进一步鉴定。本调查结果为掌握上海市市售青蛙寄生虫感染状况和做好寄生虫病防控提供了基础数据。     

上海市市售蟾蜍寄生蠕虫感染情况初步调查

为了解上海市市售蟾蜍寄生蠕虫的感染情况,对60只中华大蟾蜍进行剖检,按脏器检查、收集寄生虫虫体,统计寄生虫的感染率与感染强度。结果显示,蟾蜍寄生虫感染率为100%,平均感染强度为28.23条。不同种类寄生虫的感染情况明显不同,线虫、吸虫、绦虫和棘头虫的感染率分别为93.33%、73.33%、8.33%和15.00%,感染强度分别为17.52、14.48、10.40和2.67条。不同脏器寄生虫的感染情况不同,肠道和肺脏的寄生虫感染率最高,分别为100%和88.33%;肠道、肺脏、肌肉寄生虫的感染强度分别为15.63、12.28和11.33条,明显高于其他器官。不同种类寄生虫的寄生虫部位明显不同,线虫主要来源于肺部和肠道,吸虫和棘头虫主要来源于肠道,绦虫主要来源于肌肉。通过对检出虫体的形态进行初步观察,吸虫、线虫、绦虫和棘头虫种类分别约有3、4、1和1种,但具体种类尚需进一步鉴定。本调查结果为掌握上海市市售蟾蜍寄生虫感染状况和做好寄生虫病防控提供了基础数据。     

抗鸡球虫病的新型三嗪类化合物AC-2的疗效试验

自20世纪80年代初盐霉素(Salinomycin)的问市到80年代末地克珠利(Diclazuril)的推出，期间，世界上一些大制药公司还相继开发了那拉霉素(Narasin)、马杜拉霉素(Marduramicin)等多个新型抗球虫药。进入20世纪90年代后，由于研究开发成本的不断提高，新型抗球虫药的研究处于相对停滞     

复方球立清等四种药物治疗鸡柔嫩艾美耳球虫的笼饲试验(二)

鸡球虫病是危害养鸡业主要疾病之一,尽管经过几代人的努力,但是鸡球虫病依然时常发生。目前鸡球虫病主要依靠药物预防为主。然而,由于耐药性、制剂技术、原料质量及其它一些不合理用药因素,往往造成抗球虫药物药效     

柔嫩艾美耳球虫（E，Etenella）马杜拉霉素抗药株和敏感株孢子化卵囊的蛋白质差异分析

利用双向电泳技术，对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析，发现两者之间差异有4个蛋白质斑点，利用MALDI—TOF—TOF质谱技术对3个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定，获得3个明确的肽质量指纹图谱，通过在NCBInr数据库中检索分析，确定了其中1种蛋白质为球虫子孢子表面抗原TA4。另外2种蛋白质与疟原虫的Pfjl和线粒体转运蛋白受体Tom40具有很高的同源性，上述蛋白的鉴定将对球虫的抗药性产生机理和柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株的分之标志物提供了研究方向。     

0.5%地克珠利可溶性粉剂预防鸡球虫病试验

对0.5%地克珠利(Diclazuril)可溶性粉剂,以0.2×10-6、0.5×10-6、1.0×10-6 3种浓度饮水预防鸡艾美耳球虫(Eimeria)混合种人工感染,并用地克珠利预混剂(商品名球佳)以1.0×10-6浓度饲喂作对照,结果发现0.5%地克珠利可溶性粉剂以0.5×10-6、1.0×10-6两种浓度饮水预防鸡球虫病,具有良好的效果,抗球虫指数均在176.6以上,与地克珠利预混剂以1.0×10-6浓度混饲效果相当,证实0.5%地克珠利可溶性粉剂是地克珠利又一种高效预防鸡球虫病新剂型.     

鸡口福(鸡调味剂)对肉鸡的饲养效果

随着生活水平提高,人们对禽肉需要量大增,据统计,1991年我国人均消费禽肉量已占肉类总量的13.6％,禽肉中鸡肉量超过85％。特别是近年猪肉价格大幅上涨,多数地区的猪肉售价已超过鸡,大家对鸡肉的消费更加频繁,同时对鸡肉的品质也提出了更高要求。鸡调味剂是国内最新研制的一种饲料添加剂新品种,由数种植物经科学提炼而成的一种纯天然物质,用于鸡能提高饲料报酬,改善鸡肉品质。笔者对用鸡调味     

鸡球虫广州虫株对三种药物的抗药性研究

球虫病是阻碍养鸡业发展最重要的寄生虫病，本病分布广、感染率高，几乎养鸡的地方都有球虫。我国是养鸡大国，数量居世界首位，据FAO估计，我国在１９９８年的存栏鸡数为３１．１１亿只，占世界总数的２３．０８％。若不能有效控制球虫病，其现场发病率可达５０％～７０％，死亡率可达２０％～３０％，严重爆发时其死亡率更高，每年给养鸡业造成的经济损失可达数亿元。为有效防制鸡球虫病，国内外学者在免疫预防和药物防治等方面进行了大量的研究，取得了非常可喜的成绩，先后批准上市的抗球虫药近５０个品种，目前国内应用的抗球虫药也…