鸡球虫广东清远分离株对七种药物的抗药性试验

为了了解广东清远某鸡场球虫抗药性的产生程度,并制定出合理的用药方案,给延长药物的使用周期提供科学的依据,我们从该鸡场现场采集了新鲜粪便,实验室分离和繁殖卵囊,并在实验室进行球虫的抗药性研究.经检测粪中含堆型艾美耳球虫(E.acervulina)和变位艾美耳球虫(E.mtvati)共81.3%,柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)18.7%.试验选择目前常用的7种抗球虫药物,分别为球佳(地克珠利Diclazuril)、杜球(马杜拉霉素Madu-ramicin)、欲可胖(莫能菌素Monensin)、球安(拉沙里霉素Lasalocid)、氨丙啉(Amprolian)、球克(海南霉素Hainan-mycm)、氯苯胍(Robenidine).试验设7个药物组和感染不用药、不感染不用药2个对照组,每组10只鸡.在15日龄,除不感染不用药组外,每组接种孢子化卵囊12×104个.以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)、最适抗球虫活性百分率(POAA)为试验指标,进行综合评定.结果显示鸡球虫广东清远株对球佳为轻度抗药,对杜球、欲可胖、球安、氨丙啉为完全抗药,对球克、氯苯胍为中度抗药.     

冷冻保存卵囊及繁殖一代的活性测定

球虫卵囊的保存,在没有找到更好的方法之前,仍置于普通冰箱中,一般3个月内要繁殖1次,以保持其应有的活力.为减少繁殖次数,避免污染,对球虫卵囊保存方法的改进就列上了工作日程.低温冷藏是延长保存期的常用方法,但是否适合于球虫卵囊的保存,有待研究.我们将球虫卵囊保存于-20℃的冰柜中,在保存1个月后,对其活性和该卵囊繁殖一代的活性进行了测定.     

鸡球素防治鸡球虫病舍饲试验

鸡球素防治鸡球虫病舍饲试验黄兵，赵其平，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所２００２３２）鸡球素（Ｊｉｑｉｕｓｕ）是国内最新研究开发的抗球虫药预混剂，其有效成份为海南霉素（Ｈａｌａｎｍｙｃｉｎ）。海南霉素是由中国科学院上海药物研究...     

两种球虫感染鸡血液生理指标测定

两种球虫感染鸡血液生理指标测定黄兵，赵其平，吴薛忠，史天卫，陈兆国（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所）球虫是鸡的常见寄生虫，不同虫种引起的临床表现不同．寄生于鸡盲肠的柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）致病性最强，临床反应呈急性，“血痢”是...     

日粮蛋氨酸对感染柔嫩艾美耳球虫肉仔鸡血糖值的影响

采用单因子多水平的试验设计法研究5个日粮蛋氨酸水平(0.25%～1.04%)对人工感染(前、后)3×104的肉仔鸡血糖值变化的影响.结果表明人工感染柔嫩艾美耳球虫前,当日粮蛋氨酸高水平(1.04%)时,鸡血糖显著地低于0.45%组(P<0.05),其余各组间无显著性差异(P>0.05);感染后鸡的血糖值均高于感染前,但组间无显著性差异(P>0.05).     

柔嫩艾美耳球虫抗马杜拉霉素、地克珠利虫株特异消减文库的构建

 以遗传背景一致的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）敏感株孢子化卵囊为驱动组，马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊为试验组，利用抑制消减杂交（SSH）方法，通过两轮杂交和两次PCR分别构建了富含两个抗药株孢子化卵囊与敏感株孢子化卵囊之间差异表达基因的消减cDNA文库。随机从两个消减文库中分别挑取50个克隆，经PCR鉴定马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊的消减文库重组率分别为96%和98%，差异基因片段大小分布在250 bp～1.0 kb之间。从每个文库中随机挑取65个阳性克隆经斑点杂交试验，分别选择表达量上调的6个克隆进行序列分析和同源性比较。结果发现，有4个cDNA片段可能是新基因片段，与地克珠利抗药株的产生有关；有3个新的cDNA片段可能与马杜拉霉素抗药株的产生有关。这些结果将为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生及发展的分子机理奠定了一定的基础。     

宿主GAPDH对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响

目前,关于宿主细胞应对球虫感染机制的研究极其有限。在前期研究中,我们利用相对和绝对定量同位素标记技术结合液相色谱串联质谱技术分析了感染柔嫩艾美耳球虫子孢子72 h后鸡胚成纤维(CEF)细胞的蛋白质组表达变化,作者拟进一步研究其中一个上调蛋白——甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响。克隆鸡GAPDH基因并构建原核重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,表达重组GAPDH蛋白,用Western blot对表达进行验证。使用q-PCR、Western blot和免疫组织化学的方法检测感染柔嫩艾美耳球虫子孢子后DF-1细胞中GAPDH的表达量,并使用抗体抑制试验检测GAPDH多克隆抗体对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响。结果显示:成功克隆1 123 bp的GAPDH基因,并获得61.7 ku的重组GAPDH蛋白。q-PCR和免疫组织化学检测均显示,GAPDH在柔嫩艾美耳球虫子孢子感染的DF-1细胞中的表达显著升高。抗体抑制试验表明,与相同浓度的正常兔IgG相比,50、100、200、300和400μg·mL~(-1)的抗GAPDH抗体均能明显抑制子孢子的入侵。以上结果表明,子孢子感染会引起宿主细胞GAPDH蛋白的上调,并且宿主GAPDH蛋白在子孢子入侵过程中起正调控作用。     

IMMUCOX球虫疫苗对后备蛋鸡的安全有效性试验

ＩＭＭＵＣＯＸ球虫疫苗已经在加拿大、美国、阿根廷、巴西、秘鲁、墨西哥等许多国家做过安全效力试验并使用多年。在亚洲，ＩＭＭＵＣＯＸ球虫疫苗也已在印度和越南完成注册，开始使用。到目前为止，ＩＭＭＵＣＯＸ球虫疫苗已在五大洲的１４个国家注册销售［１］。然而，因为不同国家后备蛋鸡的田间生产条件可能有所不同，为防止ＩＭＭＵＣＯＸ疫苗的使用不当，我们受加拿大卫泰克兽医技术有限公司的委托，对ＩＭＭＵＣＯＸ疫苗进行了本项试验，测验ＩＭＭＵＣＯＸ球虫疫苗在中国后备蛋鸡田间生产条件下的安全性和有效性。１．材料和方法１…     

银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因

以柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料，用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板．用Oligo（dT）12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RTPCR，产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5务差异条带，进行2次PCR扩增，产物回收后与PGEM—T—easy Vector连接转化。经PCR鉴定正确后，再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现，地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段（可能为新的基因片段），这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。     

堆型艾美耳球虫早熟株和母株对8种抗球虫药的敏感试验

[目的]探讨堆型艾美耳球虫早熟株和母株对常用抗球虫药的敏感性。[方法]选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西8种抗球虫药,进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比（POAA）、病变记分减少率（RLS）、相对卵囊产量（ROP）和抗球虫指数（ACI）4项指标进行综合评定。[结果]堆型艾美耳球虫早熟株和母株均对地克珠利、氯苯胍、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感,对盐霉素轻度敏感,对二硝托胺不敏感。[结论]遗传背景相同的虫株,其药物敏感性也相同。