巨型艾美耳球虫纯种鉴定和致病性研究

采用单卵囊感染技术，从鸡球虫混合种中分离出一个纯种球虫，经鉴定为巨型艾美耳球虫（ＥｉｍｅｒｉａＭａｘｉｍａＴｙｚｚｅｒ，１９２９）。该种球虫卵囊为卵圆形，测２４０个的大小范围为２１．２５～３６．２５×１７．５～３０．０μｍ，平均为２８．８１±３．０７×２２．９８±２．７７μｍ，形状指数１．２５。卵囊内有一颗折光性极粒，位于窄端，无外残体。测１２０个孢子囊的大小范围为１５．５～１８．５×７．５～１０．０μｍ，平均为１７．３５±０．６６×８．７４±０．５１μｍ。最短孢子化时间为３０小时，潜伏期１４２小时。用此卵囊对鸡作致病性试验，挑选６０羽１３日龄伊莎（ＩＳＡ）公鸡分为１个不感染组和４个感染组，每羽口服感染１万、５万、１０万或２０万个孢子化卵囊。结果所有感染组与不感染组的平均增重差异达到显著（Ｐ＜０．０５）或极显著（Ｐ＜０．０１）水平，整个试验仅在２０万个的感染组出现１６．７％的死亡率，各感染组的肠道病变记分分别为１．３３、１．８３、２．４２和３．０８。     

变位艾美耳球虫纯种的初步确定和致病性研究

从上海郊县鸡场采集粪便分离球虫，经实验室繁殖和采用单卵囊感染技术，获得了纯种变位艾美耳球虫（ＥｉｍｅｒｉａｍｉｖａｔｉＥｄｇａｒ和Ｓｅｉｂｏｌｄ，１９６４）。该种球虫卵囊较小，主要呈宽卵圆形和椭圆形，经对２００个卵受测量，平均为１５．２４±１．７９×１２．４１±１．０７微米，形状指数为１．２３。卵囊内有１～３个折光性颗粒，多数卵囊为１个，靠近卵囊窄端，少数卵囊内有一个呈颗粒状的外残体。孢子囊有斯氏体和内残体，测１２０个孢子囊，其大小平均为９．５４±０．６１×５．２２±０．４０微米。卵膜内层在印囊窄端处形成一孔状结构，未见极帽。最短孢子化时间为１２小时，潜伏期９２小时，最大裂殖体１８．７５微米。用此卵囊对鸡作致病性试验，４个感染组每只鸡分别感染１万、５万、１０万和２０万个孢子化卵囊。感染一周后结束试验，结果为感染５万、１０万、２０万组与不感染组和感染１０万、２０万组与感染１万组的平均增重差异达极显著（Ｐ＜０．０１），各组均无死亡，感染组的肠道病变记分为０．７５、１．５０、２．５０和２．６７。     

感染E.tenella对肉仔鸡生长、营养物质表观存留率及血液生理指标的影响

为了研究玉米 -豆粕型基础饲养下感染球虫对肉仔鸡生长、营养物质表观存留率、血液生理指标的影响 ,用 48只 1周龄 ( AA)肉仔鸡进行试验 ,按体重随机分为 2组 ,代谢期 1周。试验组鸡 1 4日龄时分别感染柔嫩艾美耳球虫卵囊 9万个 /只。结果表明 :试验组除饲料转化比 ,在代谢期后 4天间有显著差异外 ,其余多数生长性能指标在两组间无显著差异 ( P>0 .1 )。但感染球虫降低了试验组鸡的营养物质的表观存留率     

柔嫩艾美耳球虫延伸因子1α特性与功能初步分析

鸡球虫病在世界范围内对家禽业具有重大的经济影响，导致高死亡率、低增长、低生产力和高防治成本。由于球虫耐药性问题严峻，球虫病的防治重点倾向于研究方便安全，并且与活疫苗相比更容易生产的亚单位疫苗。因此，迫切需要新的方法来有效地控制球虫病，包括寻找特定的分子靶标。本文以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA第一链为模板，扩增了延伸因子1α（EtEF1α）的ORF序列，生物信息学分析显示，该基因编码450个氨基酸，预测相对分子质量为49.1 ku，等电点为4.7；编码的蛋白无信号肽和跨膜结构域，但都含有N-肉豆蔻酰化位点。qRT-PCR和Western blot分析EtEF1α在虫体不同发育阶段的mRNA转录水平和蛋白翻译水平，结果显示，EtEF1α在子孢子（Spz）和裂殖子（Mrz）的mRNA转录水平高于未孢子化卵囊（UO）和孢子化卵囊（SO），翻译水平在UO和Mrz高表达；间接免疫定位发现，EtEF1α主要定位于Spz一端和整个Mrz，随着虫体在细胞内发育，荧光强度逐渐增强。分泌试验显示该蛋白为分泌蛋白，但不是由微线体分泌的。入侵抑制试验结果表明，兔抗rEtEF1α多克隆抗体能抑制子孢子入侵DF-1细胞，抑制率约为22%。综上表明，该蛋白可能参与了虫体在宿主细胞内的生长发育和子孢子入侵宿主细胞的过程。     

亚麻油日粮对地克珠利抗球虫效力的影响

研究采取单因子试验设计法。人工感染柔嫩艾美耳球虫6×104/鸡,分别在4%亚麻油日粮中添加0mg/kg、0.6mg/kg和0.8mg/kg抗球虫新药地克珠利,以抗球虫新药地克珠利的推荐量1mg/kg为对照。结果获得:在日粮中添加4%亚麻油后,可减少地克珠利的使用量。抗球虫指数对照组为190,4%亚麻油+0.6mg/kg组为199,4%亚麻油+0.8mg/kg为197。亚麻油对地克珠利抗球虫效力有增效作用。     

天然植物性抗柔嫩艾美耳球虫微粉制剂的效力试验

微粉技术是七十年代以后为适应现代高新技术的发展而派生的一种物料加工新技术.用中草药制剂防治鸡球虫病的报道较多,充分显示了中草药制剂对球虫病防治效果,但此类剂型都较单一.本研究在总结众多学者研究基础上,从提高鸡只自身抗击柔嫩艾美耳球虫的能力入手,精选清热燥湿、凉血和补气类中草药组方,通过对该方粗制剂和微粉制剂抗柔嫩艾美耳球虫效力测定,以确定其抗柔嫩艾美耳球虫效果.     

柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶真核表达质粒的构建与鉴定

为构建柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶(Eimeria tenella Lactate dehydrogenase,EtLDH)的真核表达质粒,分别以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子和鸡脾脏cDNA为模板,PCR扩增出EtLDH和鸡IFN-γ基因,PCR产物经酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建了真核表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ。所构建的真核表达质粒经酶切和测序鉴定为正确后转染293T细胞进行表达,分别用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtLDH基因的表达情况。Western blot结果可见大小约为37 kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光可以检测到特异性红色荧光。结果表明成功构建了EtLDH的真核重组表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ,并能在真核细胞中表达,为深入研究EtLDH的生物学功能和球虫DNA疫苗的研制奠定了基础。     

鸡堆型艾美耳球虫生物学方法鉴定

[目的]确定单卵囊分离获得的鸡球虫种类.[方法]采用生物学方法,测定该鸡球虫寄生部位、最短孢子化时间、潜伏期、孢子化卵囊和孢子囊大小等生物学特征.[结果]该鸡球虫主要寄生于十二指肠,卵囊呈卵圆形,囊壁光滑分为2层,囊内有1～3个折光性颗粒,未见卵囊残体;测100个孢子化卵囊大小为(13 ～22) μm×(11 ～ 16) μm,平均为16.96 μm×12.96 μm,形状指数1.31;测60个孢子囊大小为(8～ 13) μm×(5～8) μm,平均11.22 μm ×6.83 μm;最短孢子化时间为17 h,潜伏期为99 h.[结论]根据该鸡球虫的生物学特征及参考国内外文献,鉴定该鸡球虫为堆形艾美耳球虫(Eimeria acervulina).     

巨型艾美耳球虫早熟株选育及其相关生物学特性研究

为了选育巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)早熟株并观测其生物学特性,运用Jeffers创立的球虫早熟株选育方法,对实验室保存的E.maxima进行了早熟株选育,并比较了所获得的早熟株与母株在卵囊大小、繁殖能力、致病性、免疫保护力等生物学特性上的差异。经过17代早熟株选育,E.maxima的潜在期由母株的142 h缩短至107 h,缩短了35 h。早熟株卵囊的长、宽及大小均比母株小,且差异显著(P0.05);卵囊形状指数比母株的稍大,但差异不显著(P0.05)。早熟株的卵囊繁殖能力较母株的低,排卵囊高峰出现在接种后d6,较母株提前1 d。在同等剂量之下,早熟株的致病性低于母株,但免疫保护力和免疫原性与母株相当。早熟株的选育成功,为球虫早熟株弱毒疫苗的研制以及早熟株相关基因的筛选提供了重要材料。