兔瘟病毒VP60蛋白原核表达及其应用

为获得活性良好的兔出血症病毒基因工程抗原,本研究对兔出血症病毒ZB分离株的VP60基因进行了原核表达与初步应用。参照ZB株分离病毒VP60基因序列,设计合成一对特异性引物,PCR扩增长876bp的VP60基因片段。将目的片段定向克隆至pET30a表达载体中,经鉴定正确后,重组质粒转化BL21表达菌,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组蛋白,重组蛋白纯化后,Western blot检测表明具有良好的抗原性与特异性,以该蛋白作为诊断抗原,初步建立了检测兔瘟病毒抗体的间接ELISA诊断方法。本研究为RHDV分子流行病学调查提供了参考,为VP60蛋白结构与功能研究、RHDV抗体检测试剂盒及新型疫苗的研制奠定基础。     

神经型犬瘟热病毒鸡胚培养实验

此试验旨在利用现有神经性犬瘟热病例病料通过鸡胚培养的方法分离提取犬瘟热病毒,并研究出鸡胚培养犬瘟热病毒的最佳条件.同时提取的病毒可以用于后续抗体制备.试验共进行六次鸡胚培养,使用犬瘟热快速检测试纸进行鉴定,成功分离鉴定了 CDV病毒.结果表明:鸡胚培养犬瘟热病毒的方法是可行的,犬瘟热病料研磨液接种鸡胚的较佳接种部位是尿...     

猪圆环病毒2型Cap蛋白特异性纳米抗体的原核表达研究

为利用大肠埃希菌表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白特异性纳米抗体,并对其抗原结合活性进行鉴定,以Cap蛋白特异性纳米抗体基因(vhh_cap)序列为模板,利用Primer 5.0软件设计一对通用vhh_cap特异性扩增引物,通过PCR方法扩增vhh_cap基因片段,经双酶切处理后分别克隆到pCold-SUMO和pET-32a(+)载体上,转化宿主菌E.coli BL21(DE3),使用IPTG进行诱导表达,表达产物通过Ni²⁺亲和层析柱进行纯化,经SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定,同时使用ELISA方法对两种载体表达的纳米抗体ELISA效价进行检测和对比分析。SDS-PAGE结果显示pCold-SUMO和pET-32a(+)载体均能实现VHH_cap纳米抗体重组蛋白的原核可溶性表达,Western blotting表明纳米抗体重组蛋白可通过6×His-Tag进行检测;ELISA结果显示pCold-SUMO载体表达的纳米抗体重组蛋白效价为1∶500,ELI...     

3-O-甲基-1,2:5,6-二-O-异亚丙基-D-肌醇的高效合成试验

以天然产物多元醇D-Pinitol为原料,经与丙酮发生缩合反应,得到了两个异亚丙基保护的肌醇衍生物(2)和(3),试验得到了此反应的最佳条件,并通过红外光谱(IR)、核磁氢谱(1H-NMR)和核磁碳谱(13C-NMR)对产物的结构进行了确认.     

鸡传染性贫血病毒CRISPR/Cas13a检测方法的建立及初步应用

为了快速、准确和简便地检测鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus, CIAV),本研究参照GenBank中CIAV的VP2基因设计了特异的RPA引物和用于LwCas13a反应系统的crRNA,通过优化反应条件建立了检测CIAV的CRISPR/Cas13a方法，并验证了该方法的特异性、敏感性和复合性。结果显示，该法对感染鸡的其他常见病毒的检测均为阴性，特异性良好无交叉反应；灵敏度为50 copies/μL;与PCR的检测结果有很好的符合率。本研究建立的CRISPR/Cas13a检测方法配合试纸条显色在1.5 h内可对CIAV进行快速的鉴别诊断，为该病的诊断及防控净化提供了强有力的技术支撑。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪肺炎支原体双重荧光PCR检测方法的建立

为了建立快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪肺炎支原体(Mhp)的双重荧光PCR检测方法，本试验根据NCBI数据库中的PRRSV ORF7和Mhp P36基因，分别设计引物和TaqMan探针，通过优化扩增反应条件，建立PRRSV和Mhp的双重荧光PCR检测方法；分析所建立PCR方法的特异性、敏感性和重复性，并初步应用于临床样品检测。结果显示，25μL PCR反应体系中各引物最佳添加量：PRRSV-F 1.5μL、PRRSV-R 1.0μL、PRRSV-P 0.8μL、Mhp-F 1.2μL、Mhp-R 1.3μL、Mhp-P 0.7μL。优化后的PCR反应程序：50℃反转录20 min, 95℃预变性2 min, 95℃变性5 s, 55℃退火10 s, 72℃延伸20 s (此处收集荧光),40个循环。建立的双重荧光PCR方法特异性较好，与其他猪常见病原体无交叉反应；检测PRRSV和Mhp的敏感性分别为4.2拷贝/μL和9.6拷贝/μL;批内和批间变异系数均不高于2%,具有很好的重复性。因此，本试验建立的双重荧光PCR方法可同时检测PRRSV和Mhp,为猪繁殖与呼吸综合征...     

日粮能量源结构对小鼠生长、血清生化指标及肠道健康的影响

为了探讨日粮能量源结构对小鼠血清生化指标、肠道黏膜形态、屏障功能及盲肠菌群结构的影响，试验将72只健康且体重相近的21日龄雄性C57BL/6J小鼠分为CON组(79%蜡质玉米淀粉组)、LSB组(70%蜡质玉米淀粉+9%大豆油组)、MSB组(61%蜡质玉米淀粉+18%大豆油组)、HSB组(52%蜡蜡质玉米淀粉+27%大豆油组),每组18只，分别饲喂4种能量源结构的等能等氮日粮(蜡质玉米淀粉和大豆油提供定量蛋白之外的所有能量),试验期为36 d。试验结束时通过测定小鼠的生长性能、血清生化指标、肠道黏膜形态、屏障功能及盲肠菌群结构研究日粮能量源结构的影响。结果表明：与CON组相比，MSB组、HSB组小鼠的终末体重分别提高5.61%、7.69%(P<0.05)。与CON组相比，LSB组、MSB组、HSB组血清中的白蛋白含量均显著降低(P<0.05);HSB组小鼠血清中尿素氮含量升高了20.11%,差异显著(P<0.05);LSB组与MSB组总蛋白含量分别降低了4.10%、3.82%,差异不显著(P>0.05)。与CON组相比，MSB组小鼠十二指肠隐窝深度显著降低(P&l...     

压力蒸汽灭菌效果与监测方法

使用三种指示剂对压力蒸汽灭菌效果进行观察，结果发现，１２１℃作用２０ｍｉｎ，用嗜热脂肪杆菌芽孢菌片监测合格率为７１％，化学指示卡为５４％，指示管为１００％；１２１℃作用３０ｍｉｎ，菌片法为９５％，化学指示卡为９０％，指示管为１００％；１２６℃，合格率为１００％。物品透气性差，灭菌效果亦差。关键词压力蒸汽灭菌；化学指示剂；生物指示剂；灭菌监测方法。     

东弗里升细管冻精与洼地绵羊杂交改良研究

东弗里升绵羊是优秀的乳肉兼用品种，探究东弗里升绵羊和地方特色品种洼地绵羊杂交改良，有利于挖掘种质资源，培育新品种。本研究利用程序化冷冻方法制备东弗里升细管冻精，分析精子冷冻前后的活力和运动能力。同时对28只洼地绵羊进行同期发情内窥镜输精处理，记录受胎率及后代生长发育数据。结果表明：冷冻降低精子的运动能力，精液冷冻后曲线速度（VCL）、精子头侧摆幅度（ALH）和快速运动精子比例与鲜精相比降低（P<0.05）;28只洼地绵羊内窥镜输精妊娠率为71.43%(20/28)，产羔率为128.57%(36/28)，窝产2～3羔比例为72.22%(13/18)；随窝产羔数增加，羔羊平均出生重降低；东洼杂交F1代同时期体重均高于洼地绵羊，其中18月龄东洼杂交F1代母羊体重高于洼地绵羊母羊（P<0.05）；东洼F1代育肥期平均日增重（305 VS 264 g）、耗料增重比（4.1 VS 3.5）均高于洼地绵羊（P>0.05）。因此，通过细管冻精腹腔内窥镜技术进行东弗里升与洼地绵羊杂交能够提高洼地绵羊的生产性能。