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101.
102.
103.
以牛分枝杆茵Vallee III株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得MPB83基因,克隆后.亚克隆至腺病毒穿梭栽体pShuttle-CMV中,构建的重组穿梭质粒pShuttle-CMV-MPB83经Pme I酶切,转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy-I的BJ5183-AD-1感受态细胞,经同源重组获得复制缺陷型重组腺病毒载体pAd-CMV-MPB83.Pac I酶切线性化该质粒,转染AD-293细胞进行病毒包装,转染细胞10 d后出现细胞病变(CPE).PCR、RT-PCR、western blot检测到重组病毒含MPB83基因并成功表达. 相似文献
106.
107.
广东省新城疫病毒HN基因系统发育分析 总被引:2,自引:0,他引:2
用套式RT-PCR一步法扩增了九株NDV地方强毒的HN基因,并对其中3株的HN基因片段进行了克隆、测序及同源性分析。本试验还对该毒株的系统发育情况进行了分析:广东省NDV各毒株与欧美国家I至V基因群明显分离,遗传关系较远。台湾省NDVT各毒株归属为一组并且与中国大陆毒株的遗传距离较近。其中一支FS1/95株不能归类到任何一个基因群中。广东地区从鹅群中分离到的副黏病毒GPMV株与我们从鸡体中获得的NDV FS2株有相近的亲缘关系。 相似文献
108.
用光敏生物素标记鸡新城疫病毒cDNA,制备核酸探针,经斑点杂交和碱性磷酸酶显色后,探针同该cDNA的PCR产物、PCR产物重组子和新城疫强弱毒株呈现阳性反应,与IBV、ILTV、MG和正常尿囊液等均呈阴性杂交反应,田间病料的杂交试验也表明,该cDNA探针是敏感且特异的检测方法 相似文献
109.
110.
华南地区三株新城疫地方强毒株的序列测定及其系统发育分析 总被引:4,自引:0,他引:4
用设计的特异性引物,通过一步法RT-PCR扩增出5个毒株的897bp片段,对其中的3株病毒cDNA分析表明:各毒株的半胱胺酸位点和个数及糖化位点基本没有改变。各毒株在抗原决定簇氨基酸位点HN基因346-353处的碱基突变甚多,且氨基酸也出现了部分的突变。针对HN基因897bp片段构建了相应的系统发育树,系统发育分析表明:中国(华南)地区NDV各毒株与欧美国家的Ⅱ至Ⅴ基因群明显分离,遗传规律较远;NDV-WS1和NDV-HY与台湾省NDV各毒株归属为一组,与中国毒株的遗传距离较近,均属新近出现的基因型Ⅶ型,NDⅦ型在远东和西欧(Ⅶb)和及中东和南非(Ⅶa)广泛存在,可能形成了ND的第4次大流行。这些一方面说明NDV的变异可能已突破种源屏障,在鸡与鹅之间进行相互传播;另一方面说明中国古老的NDV毒株仍然持续存在,并逐渐向强毒株突变,与其他新出现的基因型毒株“共循环“。 相似文献