贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药性及耐药基因检测

为考察贵州省猪源大肠杆菌对四环素类抗菌药的耐药情况和耐药基因的流行情况,本试验采用微量肉汤稀释法测定783株分离于贵州省8个地区规模化养殖场的猪源大肠杆菌对6种四环素类药物的敏感性,并通过PCR方法检测其携带四环素耐药基因情况。结果显示,猪源大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素、米诺环素和替加环素的耐药率分别为97.3%、97.6%、96.6%、89.3%、48.0%和34.2%;土霉素和四环素的耐药水平最高,其MIC₅₀分别为256 和128 μg/mL,而MIC₉₀均为512 μg/mL,四环素的耐药倍数高于土霉素;米诺环素和替加环素的耐药水平最低,其MIC₉₀分别为32和4 μg/mL,耐药倍数相同;耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD和tetM的检出率分别为92.60%、41.50%、58.75%、58.62%和70.10%;耐药菌株中主要以tetA基因为主,且大多数以携带复合基因的形式存在;大肠杆菌对土霉素、四环素、金霉素、多西环素和米诺环素的耐药性分别与耐药基因tetB和tetM呈极显著相关（P<0.01）,tetD基因分别与对米诺环素和替加环素的耐药性呈极显著相关（P<0.01）。贵州省猪源大肠杆菌对四环素类药物的耐药情况十分普遍,尤其是四环素和土霉素,金霉素和强力霉素有高度耐药的趋势;外排泵是四环素类药物主要的耐药机制;在兽医临床上越来越严重的耐药情况与耐药基因的广泛存在有很大关系。     

穿心莲内酯对小鼠呼吸道非特异性免疫的影响

穿心莲为爵床科穿心莲属植物,具有清热解毒、凉血消肿等作用,人医临床常用于呼吸道感染和肠道感染的治疗.在兽医领域,穿心莲制剂常作为替代抗生素的中药材,广泛用于动物保健、疾病防治及免疫调节等方面[1-3].目前,对穿心莲内酯的研究主要集中在抗炎、抗菌、抗病毒机理及临床疗效等方面[4-6],而对呼吸道非特异性免疫方面的研究少见报道.本试验应用穿心莲内酯对细菌性肺炎模型小鼠进行治疗,观察其对小鼠呼吸道非特异性免疫的影响,探索穿心莲对治疗呼吸系统疾病的作用机理.     

贵阳市大肠杆菌耐药性监测

为了调查贵阳市猪、鸡及环境中的大肠杆菌的耐药情况,从贵阳市花溪区、乌当区等7个县区采集了猪、鸡肛门拭子及排污口处的粪便,共420份样品,分离鉴定出300株大肠杆菌,应用琼脂稀释法测定其对10种常用抗菌药物的MIC值,并统计抗菌药物的平均耐药倍数、敏感率、耐药率等。结果表明:大肠杆菌对10种药物的耐药率整体偏高,除庆大霉素接近50%外,土霉素和氟苯尼考超过80%,链霉素、头孢噻呋、阿莫西林和磺胺嘧啶超过70%,恩诺沙星和环丙沙星超过60%。300株分离菌均多重耐药菌株,主要集中在5~10耐之间。结果表明贵阳市猪、鸡源大肠杆菌的耐药较严重。     

红曲霉中麦角固醇皂化条件的优化

应用单因子和正交两种优化方法,考察红曲霉Monascus菌株-ZZ产麦角固醇皂化的最佳条件。单因子实验结果表明:最佳皂化条件碱体积分数为20%,醇碱比为2∶1,物料与碱的比例为1∶1,皂化时间为2 h,皂化温度为90℃。正交优化结果显示:不同因子对麦角固醇提取的影响顺序是皂化温度皂化时间物料皂化剂比碱体积分数醇碱比;最佳条件是物料皂化剂比为1∶1,碱体积分数为15%,醇碱比为4∶1,皂化温度为90℃,皂化时间为3 h。     

蝉拟青霉最适液体培养基的正交试验研究

以三因素三水平的正交试验设计培养条件,接种量5%（V/V）,pH=6.5,120r/min,28℃,120h,对蝉拟青霉菌Paecilomyces cicadae进行液体培养。通过对生长的菌丝体干重的测定及分析,得到该菌生长最适培养基配方为葡萄糖：20g/L,酵母膏：5g/L,K2HPO4:1g/L,并证明碳源为其生长的最重要营养因素。     

贵阳市市售猪肉中食源性致病菌分离鉴定

为了解贵阳市市售猪肉中食源性致病菌的污染情况,采集贵阳市市售猪肉样品60份,按照相关国家标准分离鉴定样品中的沙门氏菌、志贺氏菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、肠出血性大肠杆菌。结果表明:样品中食源性致病菌总检出率为13.33%,其中沙门氏菌检出率为6.67%,金黄色葡萄球菌检出率为3.33%,志贺氏菌检出率为1.67%,单核细胞增生李斯特菌检出率为1.67%,肠出血性大肠杆菌未检出。说明贵阳市市售猪肉中沙门氏菌的污染率最高,金黄色葡萄球菌、志贺氏菌和单核细胞增生李斯特菌也存在一定污染情况。     

蝉拟青霉酯酶的产酶条件优化

为获得蝉拟青霉酯酶酶活较高的菌株及其高产量的蝉拟青霉酯酶,对8株蝉拟青霉胞内酯酶进行活力测定,从中筛选出酶活力高的菌株为GZDXIFR4611,并对其进行产酶条件的研究.结果表明,GZDXIFR4611产酯酶的最佳液体发酵培养基组成为可溶性淀粉10 g/L,酵母膏7.5 g/L,K2HPO40.35 g/L,MgSO4·7H2O 0.35 g/L.酯酶在48 h产量最高,酯酶的最适反应温度为40℃,最适pH为6.5,最适反应时间为40 min,在25℃条件下半衰期约为58 h,在40℃时稳定性最高.     

高渗对多重耐药大肠杆菌外排泵和外膜孔道蛋白基因表达及其生长的影响

为了探究高渗对多重耐药菌外排泵和外膜孔道蛋白基因表达及其生长的影响,试验应用生长曲线和相对适应性测定,对比考察不同盐胁迫条件对多重耐药大肠杆菌QL15和敏感大肠杆菌ATCC 25922的生长差异,采用RT-PCR方法考察2种盐胁迫条件下外排泵与外膜孔道蛋白基因表达差异。结果表明,大肠杆菌QL15为高水平多重耐药菌,其中对大观霉素和恩诺沙星耐药最为严重,可达耐药标准MIC的32倍;独立培养时大肠杆菌QL15对NaCl胁迫的敏感性大于大肠杆菌ATCC 25922,并且在6.0% NaCl胁迫下,大肠杆菌QL15在10 h内生长缓慢,但是在24 h细菌峰值浓度更高;混合培养时大肠杆菌QL15在6.0% NaCl胁迫时具有更高的适应性,在体外培养中更具竞争优势。大肠杆菌QL15共携带5大类、15种耐药相关基因,其中含8种外排泵基因和3种外膜孔道蛋白基因;大肠杆菌ATCC 25922在6.0% NaCl浓度下的5种基因表达量较3.5% NaCl均出现约50%的显著下调（P<0.05）,大肠杆菌QL15在6.0% NaCl浓度下除acrB、ompF基因下调外,其余3种外排泵与外膜孔道蛋白基因的表达量则显著上调（P<0.05）。推测大肠杆菌QL15对盐胁迫具有更高的适应性的原因可能与细胞膜相关蛋白的表达相关。     

木瓜蛋白酶对猪血粉蛋白的水解作用

研究了木瓜蛋白酶对猪血粉蛋白的水解作用。结果表明：木瓜蛋白酶对猪血粉水解的最适pH值为7．0，最适温度为70℃，且90℃时仍具相当的水解能力，在水解时间的12h，血粉：酶干粉＝100：2时，其表观消化率为75．77％。     

留兰香的抗炎作用研究

采用多种动物模型观察了留兰香对炎性反应的影响，结果显示，留兰香对蛋清、二甲苯引起的局部急性炎症有明显的抑制作用。