果子狸源细小病毒分离鉴定及VP2基因遗传进化分析

【目的】探究果子狸源细小病毒流行特点及其VP2基因遗传变异情况,为细小病毒防治提供理论依据和技术支撑。【方法】采用猫肾细胞(CRFK细胞)对患有肠炎的果子狸肠道组织样品进行病毒分离,通过血凝试验、免疫荧光试验鉴定分离的病毒,并对病毒VP2基因进行PCR扩增和遗传进化分析。【结果】分离到的毒株在CRFK细胞中培养出现细胞脱落、崩解和破碎等典型细小病毒细胞病变效应(CPE);血凝试验结果显示,此病毒可凝集猪红细胞,血凝效价为1∶512;免疫荧光试验结果显示,在接种分离毒株的CRFK细胞内可观察到亮绿色荧光,而对照细胞没有荧光。将分离毒株命名为MPCPV-SX。VP2基因进化树分析发现,其与犬细小病毒处于同一分支,位于CPV-2和CPV-2a型之间,同时VP2氨基酸的87和101位显示为CPV-2型,而300和305位氨基酸则与CPV-2a型一致。【结论】本研究成功从果子狸肠道组织样品中分离出1株细小病毒MPCPV-SX,其VP2基因是介于CPV-2和CPV-2a之间的中间型,表明细小病毒通过果子狸等野生动物跨越宿主流行传播,可能在细小病毒遗传进化方面起到一定的过渡作用。     

国家二级保护野生植物红椿抢救性移栽技术探索 ———以白鹤滩水电站库区红椿移栽为例

为保护白鹤滩水电站建设范围内国家二级保护野生植物红椿,采用抢救性移栽方法,移栽野 生红椿1 513 株,移栽后成活率达94.5%,2年后保存率90.9%。对抢救性移栽结果进行分析,认为 在移栽地选择适宜、采用技术得当的情况下,影响红椿抢救性移栽成败的关键因素中,起挖和栽植 间隔时间影响最大,其次是土球保留完整程度,再次是树体的损伤程度。移栽成活后,管护是影响 保存的关键,尤其是牲畜破坏和人为破坏造成的影响往往是不可逆的。     

猪圆环病毒2型细胞培养适应毒株的培育和鉴定

从临床表现为仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）淋巴组织病料，经聚合酶链式反应（PCR）证实为猪圆环病毒2型（PCV2）感染，采用无污染的猪肾细胞系（PK15）分离培养，并连续传代培育成一株细胞培养适应毒，命名为PCV2／LG株。分离毒株经细胞培养，于第25代后毒价显著升高，于第35代毒价可达10^5.6TCID 50/mL。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法（IPMA）、免疫电镜技术、分子克隆及核酸序列分析等鉴定表明，分离株感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核及细胞质中；病毒感染的阳性细胞呈散在分布，阳性细胞数可达50％以上；免疫电镜观察到与PCV2特异抗体结合形成的病毒免疫复合物呈实心小颗粒样粒子团，病毒粒子直径约为17nm；病毒抗原基因组由1768个核苷酸组成，与GenBank登录的8个PCV2基因组序列同源性达96．2％以上。用2mL的病毒细胞培养物（10^5.6TCID 50/mL）接种30日龄PCV2抗体阴性仔猪3头，可引起典型PMWS临床症状。本研究为进一步开展该病毒的致病性、疫苗免疫、诊断及分子生物学等研究奠定了基础。     

致病性犬瘟热病毒CDV-JT1株的分离与鉴定

应用MDCK细胞从吉林某地犬瘟热(Canine distemper,CD)疑似发病犬肺脏组织中分离出1株病毒,该分离毒株经MDCK细胞传至第6代时出现典型的合胞体细胞病变(CPE)。经病毒形态观察、理化特性鉴定、RT-PCR和直接免疫荧光鉴定可知该分离毒株为犬瘟热病毒(CDV),命名为CDV-JT1;动物试验表明,试验犬接种CDV-JT1后21 d内都出现典型的犬瘟热症状;H基因序列分析表明,CDV-JT1株的H基因与中国分离株CDTaiChung株、TN株、SHLJ(07)1株、日本Hamamatsu株、Ueno株、Yanaka株和KDK-1株在基因型上同属于Asia-1型。CDV-JT1株含有包括CDV野毒株特有的309~311位在内的8个潜在的N-连接天冬酰氨糖基化位点。CDV-JT1强毒株的分离成功,对进一步开展疫苗研发、流行病学调查以及致病机理等方面的研究具有重要意义。     

饲用植物蒲公英水提物HPLC特征图谱研究及聚类和主成分分析

研究旨在运用高效液相色谱法（HPLC）建立饲用植物蒲公英水提物的特征图谱，并用聚类分析和主成分分析对蒲公英水提物进行质量评价。采用Sunfire C18色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸水为流动相，流速为0.8 m L/min，进样量10μL，柱温35℃，检测波长329 nm，将22批蒲公英水提物色图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2012年版）中，选取分离度、峰型较好的8个峰为特征峰，得到蒲公英水提物特征图谱，并进行相似度评价、聚类分析和主成分分析。结果表明：试验建立的蒲公英水提物HPLC特征图谱共确定了8个特征峰，指认了单咖啡酰酒石酸、绿原酸、咖啡酸和菊苣酸4个色谱峰，相似度结果为0.869～0.999，说明22批蒲公英水提物质量相对稳定；当欧氏距离为4时，聚类分析将22批不同产地的蒲公英分成3类，S6一类，S4一类，其余批次为一类；主成分分析中单咖啡酰酒石酸和菊苣酸具有最大的贡献度。通过相似度评价、聚类分析和主成分分析与特征图谱相结合，可为蒲公英水提物质量评价提供参考。     

水貂肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】 肺炎克雷伯菌是人畜共患的条件致病菌, 是引起水貂肺炎的常见病原菌之一。试验主要对吉林省某水貂养殖场送检的6只患有肺炎的病死水貂进行细菌分离鉴定及耐药性分析, 为指导临床合理用药提供依据。【方法】 通过分离纯化方法从样品中分离菌株并进行PCR鉴定, 应用多位点序列分型技术(MLST)进行菌株ST分型。通过感染小鼠了解菌株的致病性, PCR检测血清型及毒力基因的携带情况; 运用琼脂稀释法检测分离菌株对18种药物的敏感性, 并通过PCR检测分离菌株耐药基因的携带情况。【结果】 分离得到的6株菌株经PCR鉴定为肺炎克雷伯菌; MLST分析结果表明6株菌株分别有6种ST型, 分别为: ST2594、ST1782、ST2844、ST2330、ST86和ST661。致病性分析结果显示, 6株菌株均可引起小鼠死亡, 共检测出6种毒力基因, 未检测到毒力较强的血清型。药敏试验结果显示, 6株肺炎克雷伯菌对头孢他啶、头孢曲松、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星较敏感, 对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、青霉素、氨苄西林、环丙沙星、恩诺沙星、左氧氟沙星、多西环素和氟苯尼考较耐药。耐药基因检测结果显示, 6株菌株共检测出bla_SHV、bla_TEM-1、bla_CTX-M-1G、aadA1、aac(3’)-Ⅳ、aac(3’)-Ⅱc、aph(4’)-Ⅰa、aph(3’)-Ⅶ、aph(3’)-Ⅳ、aph(2’)-Ⅰb、rmtB、qnrB、qnrD、qnrS、qepA、oqxAB、floR和mcr-1 18种耐药基因。【结论】 分离到的6株肺炎克雷伯菌株为不同的种系进化, 并具有较强的致病性和耐药性, 为临床用药治疗带来困难。     

湘乡市早稻软盘育秧及配套栽培技术

介绍湘乡市的早稻软盘育秧关键技术，集成了适合湘乡的早稻品种配套高效生产技术体系，践行了水稻降镉生产理念，强化了水稻绿色、安全生产技术，以期为湘乡市早稻生产提供一套丰产增效的早稻生产模式。     

肉食兽细小病毒阳性血清的制备与应用

为了研制用于检验肉食兽细小病毒相关制品的阳性血清，试验采用猫细小病毒(FPV)-A株对健康易感狐狸进行基础免疫，再用具有致病性的水貂肠炎病毒(MEV)-ZJ1株攻毒免疫的狐狸进行加强免疫，攻毒后第14天无菌采集血液，分离血清，并参照《中华人民共和国兽药典》中的方法对该血清进行细菌、支原体和外源病毒检验及中和抗体效价测定。通过观察细胞病变情况和进行免疫荧光检测测定中和指数，并用阳性血清对3个不同批次的水貂犬瘟热和细小病毒性肠炎二联活疫苗进行外源病毒检验和鉴别检验。结果表明：所制备的血清无细菌、支原体和外源病毒污染。对不同动物来源的肉食兽细小病毒均具有良好的中和作用，中和抗体效价为1∶2 330。对不同动物来源的肉食兽细小病毒的中和指数均大于1×10^4.7。3个批次的水貂犬瘟热和细小病毒性肠炎二联活疫苗顺利通过复合检验。说明试验制备的阳性血清能够用于肉食兽细小病毒相关生物制品的外源病毒检验和鉴别检验。