猪圆环病毒引发的断奶仔猪多系统衰竭综合征致病机理

断奶仔猪多系统衰竭综合征于1997年首次在加拿大西部发现,随后许多国家报道了本病的存在和发生,相继证实该病是由圆环病毒科(Circoviridae)猪圆环病毒2型(Porcinecircovirus 2,PCV-2)引起的。PMWS典型特征是全身性淋巴肿大。病毒感染后引发机体免疫抑制,可继发多种病原混合感染。经证实,PCV2感染对胸腺淋巴细胞的损伤在PMWS致病机理中发挥主导作用,巨噬细胞和树突状细胞浆内PCV-2检出率较高,但至今还不清楚哪些细胞亚群最先被PCV-2感染并提供了病毒复制的场所。PCV-2与细小病毒一样,需要依赖细胞生长S周期合成的聚合酶复制。许多研究者试图通过加强抗原刺激以提高进入S周期细胞数,却很难提高病毒在细胞培养中的增殖量。文章着重阐述PCV-2感染引发PMWS的致病机理以及未来需要开拓的研究方向。     

致病性犬瘟热病毒CDV-JT1株的分离与鉴定

应用MDCK细胞从吉林某地犬瘟热(Canine distemper,CD)疑似发病犬肺脏组织中分离出1株病毒,该分离毒株经MDCK细胞传至第6代时出现典型的合胞体细胞病变(CPE)。经病毒形态观察、理化特性鉴定、RT-PCR和直接免疫荧光鉴定可知该分离毒株为犬瘟热病毒(CDV),命名为CDV-JT1;动物试验表明,试验犬接种CDV-JT1后21 d内都出现典型的犬瘟热症状;H基因序列分析表明,CDV-JT1株的H基因与中国分离株CDTaiChung株、TN株、SHLJ(07)1株、日本Hamamatsu株、Ueno株、Yanaka株和KDK-1株在基因型上同属于Asia-1型。CDV-JT1株含有包括CDV野毒株特有的309~311位在内的8个潜在的N-连接天冬酰氨糖基化位点。CDV-JT1强毒株的分离成功,对进一步开展疫苗研发、流行病学调查以及致病机理等方面的研究具有重要意义。     

国家二级保护野生植物红椿抢救性移栽技术探索 ———以白鹤滩水电站库区红椿移栽为例

为保护白鹤滩水电站建设范围内国家二级保护野生植物红椿,采用抢救性移栽方法,移栽野 生红椿1 513 株,移栽后成活率达94.5%,2年后保存率90.9%。对抢救性移栽结果进行分析,认为 在移栽地选择适宜、采用技术得当的情况下,影响红椿抢救性移栽成败的关键因素中,起挖和栽植 间隔时间影响最大,其次是土球保留完整程度,再次是树体的损伤程度。移栽成活后,管护是影响 保存的关键,尤其是牲畜破坏和人为破坏造成的影响往往是不可逆的。     

果子狸源细小病毒分离鉴定及VP2基因遗传进化分析

【目的】探究果子狸源细小病毒流行特点及其VP2基因遗传变异情况,为细小病毒防治提供理论依据和技术支撑。【方法】采用猫肾细胞(CRFK细胞)对患有肠炎的果子狸肠道组织样品进行病毒分离,通过血凝试验、免疫荧光试验鉴定分离的病毒,并对病毒VP2基因进行PCR扩增和遗传进化分析。【结果】分离到的毒株在CRFK细胞中培养出现细胞脱落、崩解和破碎等典型细小病毒细胞病变效应(CPE);血凝试验结果显示,此病毒可凝集猪红细胞,血凝效价为1∶512;免疫荧光试验结果显示,在接种分离毒株的CRFK细胞内可观察到亮绿色荧光,而对照细胞没有荧光。将分离毒株命名为MPCPV-SX。VP2基因进化树分析发现,其与犬细小病毒处于同一分支,位于CPV-2和CPV-2a型之间,同时VP2氨基酸的87和101位显示为CPV-2型,而300和305位氨基酸则与CPV-2a型一致。【结论】本研究成功从果子狸肠道组织样品中分离出1株细小病毒MPCPV-SX,其VP2基因是介于CPV-2和CPV-2a之间的中间型,表明细小病毒通过果子狸等野生动物跨越宿主流行传播,可能在细小病毒遗传进化方面起到一定的过渡作用。     

饲用植物蒲公英水提物HPLC特征图谱研究及聚类和主成分分析

研究旨在运用高效液相色谱法（HPLC）建立饲用植物蒲公英水提物的特征图谱，并用聚类分析和主成分分析对蒲公英水提物进行质量评价。采用Sunfire C18色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸水为流动相，流速为0.8 m L/min，进样量10μL，柱温35℃，检测波长329 nm，将22批蒲公英水提物色图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件（2012年版）中，选取分离度、峰型较好的8个峰为特征峰，得到蒲公英水提物特征图谱，并进行相似度评价、聚类分析和主成分分析。结果表明：试验建立的蒲公英水提物HPLC特征图谱共确定了8个特征峰，指认了单咖啡酰酒石酸、绿原酸、咖啡酸和菊苣酸4个色谱峰，相似度结果为0.869～0.999，说明22批蒲公英水提物质量相对稳定；当欧氏距离为4时，聚类分析将22批不同产地的蒲公英分成3类，S6一类，S4一类，其余批次为一类；主成分分析中单咖啡酰酒石酸和菊苣酸具有最大的贡献度。通过相似度评价、聚类分析和主成分分析与特征图谱相结合，可为蒲公英水提物质量评价提供参考。     

水貂肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】 肺炎克雷伯菌是人畜共患的条件致病菌, 是引起水貂肺炎的常见病原菌之一。试验主要对吉林省某水貂养殖场送检的6只患有肺炎的病死水貂进行细菌分离鉴定及耐药性分析, 为指导临床合理用药提供依据。【方法】 通过分离纯化方法从样品中分离菌株并进行PCR鉴定, 应用多位点序列分型技术(MLST)进行菌株ST分型。通过感染小鼠了解菌株的致病性, PCR检测血清型及毒力基因的携带情况; 运用琼脂稀释法检测分离菌株对18种药物的敏感性, 并通过PCR检测分离菌株耐药基因的携带情况。【结果】 分离得到的6株菌株经PCR鉴定为肺炎克雷伯菌; MLST分析结果表明6株菌株分别有6种ST型, 分别为: ST2594、ST1782、ST2844、ST2330、ST86和ST661。致病性分析结果显示, 6株菌株均可引起小鼠死亡, 共检测出6种毒力基因, 未检测到毒力较强的血清型。药敏试验结果显示, 6株肺炎克雷伯菌对头孢他啶、头孢曲松、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星较敏感, 对链霉素、庆大霉素、卡那霉素、青霉素、氨苄西林、环丙沙星、恩诺沙星、左氧氟沙星、多西环素和氟苯尼考较耐药。耐药基因检测结果显示, 6株菌株共检测出bla_SHV、bla_TEM-1、bla_CTX-M-1G、aadA1、aac(3’)-Ⅳ、aac(3’)-Ⅱc、aph(4’)-Ⅰa、aph(3’)-Ⅶ、aph(3’)-Ⅳ、aph(2’)-Ⅰb、rmtB、qnrB、qnrD、qnrS、qepA、oqxAB、floR和mcr-1 18种耐药基因。【结论】 分离到的6株肺炎克雷伯菌株为不同的种系进化, 并具有较强的致病性和耐药性, 为临床用药治疗带来困难。     

湘乡市早稻软盘育秧及配套栽培技术

介绍湘乡市的早稻软盘育秧关键技术，集成了适合湘乡的早稻品种配套高效生产技术体系，践行了水稻降镉生产理念，强化了水稻绿色、安全生产技术，以期为湘乡市早稻生产提供一套丰产增效的早稻生产模式。     

肉食兽细小病毒阳性血清的制备与应用

为了研制用于检验肉食兽细小病毒相关制品的阳性血清，试验采用猫细小病毒(FPV)-A株对健康易感狐狸进行基础免疫，再用具有致病性的水貂肠炎病毒(MEV)-ZJ1株攻毒免疫的狐狸进行加强免疫，攻毒后第14天无菌采集血液，分离血清，并参照《中华人民共和国兽药典》中的方法对该血清进行细菌、支原体和外源病毒检验及中和抗体效价测定。通过观察细胞病变情况和进行免疫荧光检测测定中和指数，并用阳性血清对3个不同批次的水貂犬瘟热和细小病毒性肠炎二联活疫苗进行外源病毒检验和鉴别检验。结果表明：所制备的血清无细菌、支原体和外源病毒污染。对不同动物来源的肉食兽细小病毒均具有良好的中和作用，中和抗体效价为1∶2 330。对不同动物来源的肉食兽细小病毒的中和指数均大于1×10^4.7。3个批次的水貂犬瘟热和细小病毒性肠炎二联活疫苗顺利通过复合检验。说明试验制备的阳性血清能够用于肉食兽细小病毒相关生物制品的外源病毒检验和鉴别检验。     

PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠免疫保护效果的评价

为评价猪圆环病毒2型-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗(以下简称二联苗)对小鼠的免疫保护效果，本研究将猪圆环病毒2型(PCV2) cap基因克隆至p MAL-c5X载体中，并通过原核系统表达了重组Cap蛋白(rCap)。通过western blot检测显示原核表达的r Cap与PCV2单克隆抗体发生特异性结合，表明r Cap具有良好的反应原性。利用本研究室已经纯化并保存的副猪嗜血杆菌(HPS)重组蛋白r Cdt B、r Afua和r OPPA，与r Cap蛋白以及佐剂ISA201VG混合乳化后制成PCV2-HPS二联亚单位疫苗，疫苗中各蛋白(rCdtB、r Afua、r OPPA、r Cap)浓度均为50μg/300μL。将60只6周龄BALB/c小鼠随机均分成免疫组和对照组，采用背部多点注射方式免疫，首免后间隔14 d二免。一免后以及二免后的14 d分别通过颌下采血方法采血，通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清中的特异性抗体，结果显示，二免后14 d，免疫组小鼠血清中CdtB、OPPA、Afua抗体水平分别与PBS+ISA201VG对照组和免疫之前比较均极显著提高(P<0.0001...     

低温贮藏对布氏潜蝇茧蜂生物学特性的影响

布氏潜蝇茧蜂是橘小实蝇等多种实蝇害虫的重要寄生性天敌。为满足生物防治所需的大量虫源，常常需要对分批饲养的布氏潜蝇茧蜂蛹进行贮藏备用。因此，本文研究了贮藏温度及贮藏时间对不同蛹龄布氏潜蝇茧蜂羽化的影响，基于此，进一步研究了4个低温贮藏处理对羽化成虫生物学特性的影响。结果表明，贮藏温度、时间、蛹龄及其交互作用对布氏潜蝇茧蜂的羽化率具有显著影响，仅9日龄蛹在13℃下贮藏10 d及15 d后对其羽化率无显著影响，分别为73.10%及68.31%。此外，进一步研究表明上述两种冷藏处理对布氏潜蝇茧蜂羽化成虫的干重、飞行能力、寿命、繁殖子代数及生命表参数不产生任何负面影响。本研究对优化布氏潜蝇茧蜂的低温贮藏技术具有参考价值。