胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗免疫仔猪前后差异表达基因的鉴定与分析

为获得胸膜肺炎放线杆菌(APP)菌影诱导的仔猪淋巴细胞差异表达基因,本研究应用代表性差异分析技术构建APP菌影免疫前后正、反两个外周血淋巴细胞cDNA差减文库,并对文库中的差异基因进行克隆、测序和生物信息学分析.试验结果表明,正向文库中获得11个表达丰度上调的基因,其中7个基因与已知基因具有相似性,4个为未知新基因,经进一步功能注解发现,正向文库功能基因包括免疫信号传导相关蛋白RhoE、防御相关蛋白糖基转移样酶-1、上皮膜蛋白2、白介素-17和肿瘤免疫相关的周期素依赖性蛋白激酶抑制因子3等,这些功能基因表达丰度升高,可能有助于机体建立抗APP的免疫应答.     

加替沙星在家兔体内的代谢动力学研究

[目的]分析加替沙星在家兔体内的药代动力学过程。[方法]家兔口服5、10和20mg／kg加替沙星后于0．25、0．50、1．00、2．00、4．00、8．00、12．00和24．00h分别取静脉血,应用毛细管区带电泳-二极管阵列检测法测定血药浓度并计算代谢动力学参数。家兔口服10mg／kg加替沙星后于0．25、0．50、1．00、2．00和4．00h分别测定心、肺、肌肉等组织中的药物浓度。[结果]加替沙星在0．05～5．00μg／ml范围内具有良好线性关系,最低检测限为0．05μg/ml,在家兔血液代谢动力学过程符合一室模型。5、10和20mg/kg剂量组主要动力学参数如下：峰浓度（cmax）分别为2．28、3．35和7．93μg／ml;达峰时间（Tmax）分别为1．36、1．83和1．69h;吸收半衰期（t1/2Ka）分别为0．39、0．51和0．42h;消除半衰期（t1/2 Ke）分别为5．63、6．07和6．81h;药时曲线下面积（AUC）分别为21．67、33．59和97．07（μg·h）／ml。加替沙星被家兔摄入后,迅速分布于各组织中。[结论]加替沙星在家兔体内吸收迅速,消除半衰期长,组织分布广泛,是一种值得推广的新型氟喹诺酮类抗生素。     

旅游规划中景观连接度廊道构建

在旅游规划中考虑景观连接度是非常必要的,而廊道的建立是提高景观连接度的一种具体的、可行的方法。廊道在旅游生态景观规划方面,主要表现为旅游功能区之间的林带、交通线及其两侧带状的树木、草地、河流等自然要素。它们都是实体表现形式,而文中提出了制度廊道、技术廊道、道德廊道、管理廊道四种与之不同类型的廊道,从而完善景观连接度廊道体系建设。     

蓝塘猪与长白猪背最长肌全基因组DNA甲基化分析

【目的】分析蓝塘猪与长白猪背最长肌组织全基因组DNA甲基化水平,筛选2个猪品种的差异甲基化基因（DMG）,为优质肉猪选育提供理论依据。【方法】利用全基因组亚硫酸氢盐测序（WGBS）技术,分析1日龄雄性蓝塘猪与长白猪背最长肌组织全基因组DNA的甲基化水平、差异甲基化区域（DMR）和DMG,并对DMG进行GO注释,揭示蓝塘猪与长白猪差异甲基化基因的功能。【结果】蓝塘猪和长白猪样本测序获得的原始序列数量分别为300 005 805和300 012 190条,有效序列数量分别为210 334 070和210 758 564条,有效序列与猪参考基因组的比对成功率分别为70.11%和70.25%,Bisulfite转化率分别为98.54%和98.36%。蓝塘猪全基因组范围内胞嘧啶（C）的甲基化率为4.07%,其中CG、CHG和CHH中胞嘧啶的甲基化率分别为74.50%,1.74%和1.51%;长白猪全基因组范围内胞嘧啶的甲基化率为4.44%,其中CG、CHG和CHH中胞嘧啶的甲基化率分别为76.92%,2.13%和1.87%。共检测出13 126个差异性甲基化区域,总长度为3 357 954 bp,含有78 234个胞嘧啶。68.50%的差异性甲基化区域分布在基因间区,25.74%分布在内含子,1.89%分布在外显子,1.85%分布在上游2 kb区域,1.78%分布在下游2 kb区域,0.24%分布在CpG岛。甲基化差异基因显著富集于凋亡过程的负调控、细胞迁移的正调控等24个GO条目,其中FAM135B、NR1H2、ID4、ZFPM2、FOXO1等５个基因与蓝塘猪和长白猪的脂肪代谢相关,长白猪FAM135B、NR1H2、ZFPM2和FOXO1的表达水平高于蓝塘猪,而ID4略低于蓝塘猪。【结论】明确了蓝塘猪和长白猪背最长肌组织全基因组DNA的甲基化情况,为深入研究2个猪种肉质差异的分子机制提供了基础数据。     

再生水灌溉对棕壤水稻土土壤影响分析

为分析再生水灌溉对棕壤水稻土土壤影响,本文选择辽宁省海城市西四镇后青台子村作为研究区域,研究再生水灌溉后土壤中铵态氮(NH₄⁺-N)、硝态氮(NO₃^--N)、土壤有机质和营养元素变化,以及土壤肥力情况。结果表明,再生水灌溉对于土壤中铵态氮、硝态氮、土壤有机质影响并不显著。同一灌溉模式下,土壤样本中全氮、全磷和铵态氮含量略有增长,硝态氮略有减少。不同灌溉模式对土壤全氮、全磷和铵态氮的影响并不显著,对于硝态氮的影响较为明显。再生水灌溉能够提升土壤肥力。高水位灌溉下土壤中全氮、全磷和有机质含量最高。本文结果能够为合理利用再生水资源,减轻国家农业用水压力,实现区域生态环境可持续发展做出贡献。     

辐照蜂蜜和虾中残留氯霉素降解效果的研究

蜂蜜和虾是中国重要的出口创汇食品。试验以含残留氯霉素（chloramphenicol,CAP）的蜂蜜和虾为材料,用60Co γ射线辐照处理1～10 kGy的剂量,研究结果表明,辐照可以有效降低不同介质中残留的氯霉素,但介质不同,降解效果各有差异。蜂蜜的辐照吸收剂量为4.3 kGy时,94.75%的残留氯霉素降解;虾的辐照吸收剂量为7.5 kGy时,94.31%的残留氯霉素降解。     

沙门氏菌PCR检测方法的建立

根据GenBank沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因序列设计引物,扩增特异的202 bp核苷酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了沙门氏菌特异、敏感和快速的PCR检测方法。特异性试验结果表明,从沙门氏菌参考菌株中均能扩增出特异性的核苷酸片段,大肠杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄菌、志贺氏菌、蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,采用简便的直接煮沸裂解法制备样品DNA,该方法的敏感性可达2.43×103CFU/mL。     

光皮桦育苗和造林实用技术

光皮桦是一种优良的速生乡土阔叶树种,但育苗难度较大。在多年试验研究基础上详细总结了光皮桦轩及造林的技术要点。造林试验表明,不论是播种苗还是野生苗造林成活率均达到９０％,并表现出良好的适应性和速生性。     

不同温湿度对黑点切叶野螟生长发育的影响

通过室内饲喂黑点切叶野螟,观察不同温湿度下其发育期状况,测定过冷却点和平均冰点,并于2009年调查湖北省孝感市城区西郊该虫在水花生上的分布情况.结果显示,相对湿度(RH)为75％、温度为17℃时适宜幼虫和蛹生长发育;27℃下,RH为45％时幼虫发育历期最长,RH为45％～75％时孵化率呈上升趋势;幼虫在1～5龄时,过冷却点低于平均冰点,而蛹期过冷却点高于平均冰点;在室外自然条件下,水花生上的幼虫量于9月中旬达最高峰,成虫数量增长高峰期分别为9月16日和10月24日.一定的温湿度对黑点切叶野螟有明显影响.     

牛蛙皮肤抗菌肽Ranalexin 基因的原核表达及其抑菌活性

    为了验证重组抗菌肽Ranalexin的抑菌活性,提取牛蛙皮肤组织总RNA,经RT-PCR 扩增抗菌肽基因ranalexin,克隆测序后,将该基因插入pGEX-3X融合表达载体,进行原核表达,通过改变IPTG剂量、培养液pH值、诱导表达温度和诱导时间优化表达条件,并采用谷胱甘肽氧化/还原系统对重组蛋白进行复性,用琼脂扩散法测定其体外抑菌活性.结果显示,扩增获得的牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 大小为201 bp,其序列与GenBank公布序列同源性达99.57%;正确构建了pGEX-3X-Ranalexin表达载体,最佳表达条件为IPTG终浓度1.0 mmol·L-1、诱导时间5～6 h;表达产物的分子质量约为34 kDa,并以包涵体的形式表达,经复性纯化后该重组蛋白对金黄色葡萄球菌具有明显的体外抑菌活性.说明牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 的原核表达载体构建成功,并获得了具有抑菌活性的重组抗菌肽GST-Ranalexin.