蔬菜土传病原菌三重PCR检测体系的建立与应用

【目的】 针对生产中危害严重的3种蔬菜土传病原菌瓜果腐霉（Pythium aphanidermatum）、尖镰孢（Fusarium oxysporum）、大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）,建立三重PCR（triplex PCR）检测体系,为蔬菜土传真菌病害的早期诊断和鉴定提供技术与方法。【方法】 筛选3种病原菌特异性引物组合,通过设定不同的PCR退火温度、引物浓度、循环次数以及延伸时间,探索影响三重PCR扩增的因素,建立蔬菜土传病原菌三重PCR检测体系,并对体系灵敏度进行检测。为了验证建立体系的稳定性,选择2×Taq Master PCR Mix（北京博迈德生物技术有限公司）和TaKaRa Taq酶（大连宝生物工程有限公司）2个不同公司的试剂,分别利用C1000 Touch ^TM型（赛默飞世尔科技有限公司）与Aeris ^TM型（新加坡艺思高科技有限公司）热循环仪进行三重PCR反应,比较检测结果的可重复性。对田间采集的35份病害样本和149份土壤样本,分别进行三重PCR和病原菌分离检测,以确定所建立得三重PCR检测体系的适用性。 【结果】 三重PCR反应体系中引物对AsAPH2B/AsPyF、FOF1/FOR1、VActF/VActR可分别扩增出瓜果腐霉、尖镰孢、大丽轮枝菌长度为163、328和530 bp的特异性目的片段。反应体系（25 μL）：0.12 μmol·L ^-1 AsAPH2B/AsPyF,0.16 μmol·L ^-1 FOF1/FOR1,0.24 μmol·L ^-1 VActF/VActR,2×Taq Master PCR Mix 12.5 μL,退火温度为60.8℃,35个循环。该体系对病原菌纯培养物的检测灵敏度为10 ^-1ng·μL ^-1,对土壤中大丽轮枝菌、尖镰孢和瓜果腐霉的检测灵敏度分别为10 ⁵、10 ⁶个孢子/g土壤和10 ^-2mg菌丝/g土壤。分别采用2×Taq Master PCR Mix和TaKaRa Taq酶,利用C1000 Touch ^TM型和Aeris ^TM型热循环仪进行三重PCR,扩增结果一致,说明三重PCR体系检测稳定性好。对田间采集的病害和土壤样本进行检测,25份病害样本和71份土壤样本中检测出带菌,三重PCR检测与病原菌分离培养结果一致。 【结论】 本研究建立的瓜果腐霉、尖镰孢、大丽轮枝菌三重PCR检测体系具有灵敏度高、稳定性和重复性好的特点,能够快速、准确地检测田间病株及其根围土壤中的瓜果腐霉、尖镰孢、大丽轮枝菌,为蔬菜土传病害的早期预防和流行监测提供了有效的技术手段。     

基于贝叶斯网络的可靠性分析平台设计

制动系统在汽车行驶过程中起到主动安全作用,其可靠性非常重要。由于制动系统的复杂性、不确定性问题的存在,传统可靠性分析方法已不再适用,因此提出一种模糊多态贝叶斯网络的可靠性分析方法。设计开发了一种可靠性分析平台,该平台能够对农用车制动系统进行可靠性分析,为车辆的维修提供依据;能够有效提高可靠性分析人员的工作效率,减少工作量。     

牛磺酸在动物生产中应用的研究进展

牛磺酸又称为牛胆碱、牛胆素,化学名称为2-氨基乙磺酸。它是一种结构简单,在动物体内普遍存在,具有广泛生理学活性的游离含硫氨基酸。随着对牛磺酸营养机理研究的深入,它在养殖业中的应用也越来越广泛。本文对牛磺酸的结构、性质、组织分布、生物学功能和在动物生产中的应用及其发     

副结核病免疫学诊断技术研究近况

副结核病免疫学诊断技术研究近况鲁晓蓉，谢三星安徽农业大学（２３００３６）副结核病是由副结核分枝杆菌引起的对反刍兽的慢性传染病。由于病畜往往在感染后期才出现临床症状，一般药物治疗无效，故对于本病的早期诊断尤为重要。今就其免疫学诊断技术作如下简述。一、变...     

生物类黄酮的生理功能及其应用研究进展

本文综述了类黄酮对动物脂质代谢与抗氧化作用的调节及其与动物内分泌、机体免疫的关系 ,并介绍了类黄酮在动物生产上的应用     

陕西镇安2006年春蚕血液型脓病暴发原因分析

影响蚕茧稳产高产的因素很多,最主要的原因莫过于蚕病所造成的损失。近年来,我县蚕病发生抬头,尤其是今年春蚕大面积暴发血液型脓病,发病面之广,损失之严重,为历史上罕见,发病倒蚕已成为蚕农后顾之忧,严重挫伤蚕农养蚕积极性。为控制血液型脓病的危害,以防重蹈覆辙,笔者对2006年春蚕血液型脓病暴发的原因作了如下调查分析,并提出了几点防治措施。     

神经生长因子及其受体TrKA在山羊脊髓发育中的表达特点

运用免疫组织化学超敏 SP法对山羊胎儿脊髓发育中神经生长因子 (nerve growth factor,NGF)及其高亲和力受体 Tr KA的表达及其功能进行了系统的研究和探讨。结果显示 ,山羊胎儿脊髓灰质中存在 NGF及其受体 Tr KA,于 6周龄胚就可检测到 ,随胚龄增加 ,其表达范围及免疫反应着色程度逐渐增强。 NGF主要分布于腹角和背角的神经细胞 ,反应产物主要定位于胞质和突起 ;Tr KA的分布主要以腹角及胶状质为主 ,反应产物主要定位于胞核 ,后期胞质及突起也可见到阳性反应。在山羊胎儿脊髓白质中也可观察到 NGF及 Tr KA免疫阳性反应 ,其发育后期更为显著 ,阳性反应主要分布于神经胶质细胞核、神经纤维的轴索及雪旺氏细胞。结果提示 ,NGF不仅对交感和感觉神经元的发育起作用 ,而且还与腹角运动神经元的发育有关     

不同低蛋白质水平下猪异亮氨酸需要量的评估

为研究低蛋白质水平下适宜的饲粮异亮氨酸水平,本试验选用健康、日龄整齐的二元断奶仔猪360头,按照公母各半,分为4组。每组6个重复,每个重复15头仔猪。其中F1组处理饲粮为粗蛋白质（CP）17.5%,标准回肠可消化异亮氨酸/标准回肠可消化赖氨酸（SIDIle/SIDLys）0.51;F2组饲粮处理为CP17.5%,SID Ile/SID Lys 0.55;F3组处理饲粮为CP17.5%,SID Ile/SIDlys 0.60,F4组处理饲粮为CP 17.0%,SID Ile/SID Lys 0.55。试验期为29天。结果表明：在同一粗蛋白质水平下,SID Ile/SID Lys比例从0.51上升为0.60,对体重为8～20kg断奶猪日增重、采食量和料肉比的影响差异不显著。在同一SID Ile/SID Lys比例下,饲粮粗蛋白质水平在17.0%和17.5%时,对体重为8～20kg断奶猪日增重、采食量和料肉比的影响差异不显著。在不影响生长性能的前提下,蛋白质水平和异亮氨酸含量可小幅度调整。但作为饲料、养殖一体化企业,应该在以最大化生产性能、最小化造肉成本以及最大化经济效益之间平衡和取舍。