猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用

根据GenBank公布的猪瘟病毒基因组5′非编码区基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列区作为扩增区域,设计1对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立了一个用于猪瘟病毒快速定量检测的SYBR Green Ⅰ 荧光定量RT-PCR方法。试验结果表明该方法重复性好,反应批内循环阈值差异不显著。与猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型等猪源病毒无交叉反应,具有高度的特异性,而且灵敏度高,最小检出量为2×102病毒基因组拷贝数。利用此方法对15例临床样本进行检测,其结果与兔体交叉免疫试验一致,表明此方法可作为猪瘟实验室快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具。     

猪链球菌不同佐剂二联灭活苗对家兔的免疫试验

选择猪源链球菌C群和链球菌D群荚膜4型用蜂胶佐剂、油乳佐剂分别制成猪链球菌二联灭活疫苗,对家兔进行了免疫试验.试验表明,在同源菌株攻击下,无论是免疫效力还是免疫保护期,油乳二联灭活苗均优于蜂胶二联灭活苗.在两种佐剂苗中,无论哪种佐剂疫苗的免疫效果,二次免疫注射均优于一次注射.     

副猪嗜血杆菌血清4型全基因组序列草图测定与分析

本研究应用Illumina Hiseq 2000测序系统对副猪嗜血杆菌(HPS)血清4型gx033株进行全基因组序列测定,经过DNA文库构建、测序、数据过滤和组装,绘制了全基因组草图.全基因组草图显示,HPS血清4型的基因组大小为2 155 493 bp,G+C含量为39.79％,含有编码基因2 189个,基因总长度1 881 801 bp.基因功能注释表明,849个基因功能尚不明确,1 340个基因被分为能量产生和转化、转录和细胞周期调控等19个功能组.该HPS血清4型全基因组草图的绘制为HPS病的致病机制等研究提供依据.     

猪链球菌2型广西分离株的生物学特性鉴定

猪链球菌2型是一种人兽共患病原菌,主要引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症和突然死亡等。在我国许多地方发病率呈不断上升趋势。各年龄段的猪都可感染此病,但多发于3～12周龄的猪,尤其是断奶仔猪易感染此病。猪链球菌2型不但对猪有致病性,而且可引起人的感染并致死。我国江苏省、四川省部分地区暴发2型猪链球菌病导致人员感染致死。本试验对从发病猪中分离到的链球菌株进行了形态、培养特性和使用猪链球2型、1型抗血清进行凝集试验,结果证明4株细菌为荚膜2型猪链球菌。PCR方法检测其5种毒力因子和对仔猪、家兔、小鼠的致病性试验。现将鉴定和试验结果报告如下。     

大肠杆菌O157:H7实时定量PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的大肠杆菌O157:H7的Flic(H7)基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列设计一对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立一个用于大肠杆菌O157:H7快速定量检测的实时定量PCR方法.该方法的最低检测极限是103CFU/mL,敏感性比常规PCR提高10倍.方法重复性好、特异性强,重复性检测的变异系数均小于2%;只能检测大肠杆菌O157:H7,对非大肠杆菌O157:H7血清型细菌、猪链球菌2型、副猪嗜血杆菌无反应.利用此方法对模拟样本进行定量检测,其结果与平板细菌计数基本一致,表明此方法可作为大肠杆菌O157:H7快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具.     

大肠杆菌O157∶H7实时定量PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的大肠杆菌O157∶H7的Flic(H7)基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列设计一对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立一个用于大肠杆菌O157∶H7快速定量检测的实时定量PCR方法。该方法的最低检测极限是103CFU/mL,敏感性比常规PCR提高10倍。方法重复性好、特异性强,重复性检测的变异系数均小于2%;只能检测大肠杆菌O157∶H7,对非大肠杆菌O157∶H7血清型细菌、猪链球菌2型、副猪嗜血杆菌无反应。利用此方法对模拟样本进行定量检测,其结果与平板细菌计数基本一致,表明此方法可作为大肠杆菌O157∶H7快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具。     

广西猪源链球菌分离株的分群鉴定

从广西南宁、玉林、来宾、柳州、钦州等9个市29个猪场的送检材料中,分离出95株猪链球菌.使用链球菌乳胶凝集标准诊断试剂盒(有兰氏A-G群)对其中56株典型链球菌进行了培养特性、生化试验和血清分群鉴定.结果有32株为D群链球菌,9株为C群链球菌,1株为F群链球菌,5株为G群链球菌,1株与C群和D群有交叉反应,2株与D群和G群有交叉反应,6株未能定群.小白鼠对56株分离菌的敏感性有所不同.本试验结果表明,广西地区猪链球菌病的病原已不是单一血清群,同一猪场存在着多种血清群的链球菌.这为猪链球菌病的防制提供重要依据.     

单增李斯特菌感染并调控宿主丙酰辅酶A羧化酶α(PCCA)的研究

为探究单增李斯特菌感染与宿主丙酰辅酶A羧化酶α (PCCA)表达的相互影响机制，本研究将单增李斯特菌野生株(LM-EGD-e)以MOI 200感染He La细胞5 h后，利用q RT-PCR检测感染LM-EGD-e后HeLa细胞中Pcca基因的转录水平变化，结果显示LM-EGD-e感染HeLa细胞中Pcca基因的转录水平无明显变化(log2FC=-0.305)；采用相应试剂盒分别提取感染后的He La细胞蛋白和线粒体蛋白，采用western blot检测PCCA蛋白表达变化，结果显示，LM-EGD-e感染后的HeLa细胞中，以及线粒体中PCCA蛋白表达水平均无显著变化(P>0.05)。PCR扩增Pcca基因后构建p CMV-N-HA-PCCA重组质粒，并经PCR和测序鉴定正确后转染HeLa细胞中过表达PCCA蛋白后，利用q RT-PCR检测HeLa细胞中Pcca基因的转录水平，收集细胞总蛋白采用western blot检测PCCA蛋白表达水平，结果显示，与转染空载体的细胞相比，转染重组质粒的HeLa细胞中Pcca基因的转录水平上调(log2FC=8.454)，且细胞内PCCA蛋白...