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试验旨在分离鉴定犬脐带间充质干细胞分泌的外泌体(UC-MSC-Exo),并研究犬UC-MSC-Exo来源miRNA的表达情况及其对血管内皮细胞(VEC)增殖的影响。采用超高速离心法从犬脐带间充质干细胞培养上清中分离外泌体,采用Western blotting、透射电镜和纳米颗粒跟踪分析法(NTA)进行鉴定。通过对犬UC-MSC-Exo中的miRNA进行测序,筛选出2个目标miRNA(cfa-miR-34a和cfa-miR-143)并合成相应的mimic和inhibitor,转染犬VEC;采用荧光显微镜和实时荧光定量PCR法检测mimic和inhibitor转染情况及其转染效率;CCK-8法检测转染mimic和inhibitor对犬VEC增殖能力的影响,并对其靶基因进行预测。结果显示,犬UC-MSC-Exo表达特异性的外泌体表面蛋白CD9、CD63和CD81,粒径集中在100~200 nm,电镜检测成典型的杯状。免疫荧光结果表明,miRNA mimic和inhibitor均已转染进细胞内,并且聚集于细胞质中;实时荧光定量PCR结果表明,转染cfa-miR-34a mimic和cfa-miR-143 mimic后,细胞内cfa-miR-34a和cfa-miR-143表达量分别升高约400和78倍;而转染cfa-miR-34a inhibitor和cfa-miR-143 inhibitor后,细胞内cfa-miR-34a和cfa-miR-143表达量分别降低了77%和83%;CCK-8检测结果表明,cfa-miR-34a和cfa-miR-143在体外可极显著促进血管内皮细胞的增殖(P<0.01)。cfa-miR-34a靶基因预测结果发现,共有195个保守靶位点,与miRDB预测结果共有69个交集靶基因;cfa-miR-143则有448个保守靶基因,其与miRDB预测结果有128个交集靶基因。本试验成功分离得到犬UC-MSC-Exo,且证实目标miRNA cfa-miR-34a和cfa-miR-143在体外可极显著促进VEC增殖。 相似文献
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番鸭白点病发病机理的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
用番鸭白点病病毒人工感染雏番鸭后第1、3、5、7、10、14d分别采集免疫器官和消化器官进行病理剖检和病理组织学观察,并测定血浆中的丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量,以研究白点病的发病机理。结果,感染后第1d,胸腺、脾、腔上囊开始出现肿大、出血和充血的现象,第3~7d病变较严重。胸腺以淋巴细胞坏死和减少为主要病变;脾除了淋巴细胞坏死和减少外,还有单核细胞浸润和髓窦红细胞淤积现象;腔上囊以淋巴细胞坏死和单核细胞浸润为主要病变。染毒后第3d,食管、腺胃、肝、胰、小肠等开始出现少量炎性细胞和红细胞浸润,第5d时各消化器官都有不同程度的变性和坏死,随着病程的发展,炎性细胞和红细胞逐渐增多。第10d时病变开始减轻,炎性细胞和红细胞浸润减少。血浆MDA含量在感染后第3d开始升高,到第5d时感染组显著高于对照组。血浆NO水平在感染后第1d就开始升高,至第7d达顶峰。试验结果提示,MDA和NO参与了白点病的病理过程。 相似文献
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为了比较4种常用消毒剂对猪流感病毒的杀灭效果,试验采用鸡胚感染试验和Klein-De-fors悬浮灭活试验,研究了不同浓度复合酚、二氯异氰尿酸钠、过氧乙酸、苯扎溴铵与H3N2猪流感病毒作用5,10 min的杀灭率。结果表明:复合酚1∶2 000的稀释液、二氯异氰尿酸钠1∶800的稀释液、过氧乙酸1∶10 000的稀释液、苯扎溴铵1∶300的稀释液能将病毒100%杀灭。说明过氧乙酸的杀灭效果较显著,其他依次是复合酚、二氯异氰尿酸钠、苯扎溴铵。 相似文献
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