猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白B细胞抗原表位的鉴定

本研究去除了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株M蛋白基因部分疏水性区域后,克隆于原核表达栽体pGEX-6P-1中进行表达,并利用表达的M蛋白(rtM)为抗原,免疫BALB/c小鼠制备了1株抗M蛋白的单克隆抗体(McAb)M283,IFA试验表明该McAb能够识别PRRSV CH-la株.同时将M蛋白基因进行一系列的氨基酸截短表达,证实M蛋白的117 aa～129 aa是McAb M283的抗原表位;对该抗原表位进行western blot 分析,结果显示该表位能被PRRSV感染猪的血清特异性识别.本研究结果为进一步深入了解M蛋白的抗原特性奠定了基础.     

猪链球菌重组GDH蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立猪链球菌快速诊断方法,本研究以纯化的原核表达的猪链球菌谷氨酸脱氢酶蛋白(GDH)为抗原,建立了检测猪链球菌抗体的间接ELISA诊断方法.实验确定了最佳抗原包被浓度为6 μg/mL,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其作用时间为60 min,兔抗猪酶标抗体的最佳稀释倍数为1:2 000,其作用时间为60 min;判定标准为S/P值≥0.210时判为阳性,S/P值≤0.166时判为阴性,介于两者之间的判为可疑.实验结果表明该方法特异性、敏感性和重复性均较好,适用于猪链球菌所有亚型的抗体检测,为猪链球菌的流行病学调查提供了一种简便快速的血清学检测方法.     

“猪高热病”的防制及其启示

1“猪高热病”一个心痛的话题 2006年～2007年在全国爆发了一种猪病～被俗称为“猪高热病”。其来势之猛,损失之大,历史罕见。造成近万头猪只死亡,其经济损失巨大。许多中小养猪企业因此破产倒闭,也是导致当时肉价飙升的因素之一。     

合理选择抗菌药治疗猪细菌性呼吸道疾病的原则

目前猪细菌性呼吸道疾病已成为猪生产过程中的一大难题.抗菌药在预防和控制该类疾病中发挥重要作用,而充分掌握宿主(猪)、致病菌、抗菌药物三者的基本情况和相互关系是合理使用抗菌药治疗猪呼吸道病的前提.     

规模化猪场疫病防控关键技术

影响养猪业经济效益的主要原因之一是传染病的频发和仔猪因疾病而大量死亡,可以说疾病给我国养猪业造成了1／3的损失。有效控制猪繁殖障碍相关疾病的肆虐,严防此类疫病在大中型养猪场的传播和蔓延是我国当前的紧迫问题。我们要有一个全方位的防疫思想和总体的卫生防疫概念,做好猪场的选址和布局,建立健全卫生管理制度,定期进行猪舍消毒、饮水消毒和带猪喷雾消毒,及时处理猪粪与病死猪,     

动物干扰素诱生剂抗病毒Ⅰ号对鸡的亚急性毒性的研究

在小鼠口服抗病毒Ⅰ号无亚急性毒性之后，我们又做了该药对本动物─鸡的亚急性毒试验，经对用药鸡的尸体剖检，消化率、脏器指数及血液生化指标与对照组的比较研究。进一步证明该药对本动物─鸡无明显的亚急性毒性作用．     

动物干扰素诱生剂抗病毒I号对鸡的亚急性毒性的研究

在小鼠口服抗病毒Ｉ号无亚急性毒性之后，我们又做了该药对本动物－鸡的亚急性毒试验，经对用药鸡的尸体剖检，消化率、脏器指数及血液生化指标与对照组的比较研究，进一步证明该药对本动物－鸡无明显的亚急性毒性作用。     

禽白血病劳斯肉瘤病毒衣壳蛋白P27基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

从人工感染禽白血病劳斯肉瘤病毒的SPF鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物中提取RNA,通过RT-PCR方法扩增出720bp的gag P27基因片段,克隆至pMD18-T载体,酶切鉴定后进行序列测定和分析,表明该片段编码序列与国外RSV分离株(JO2342)的同源性达97.3%.将该片段亚克隆至pGEX-6 P-1原核表达载体,转化受体菌BL-21,经IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,证明目的基因得到高效表达,所表达蛋白是大小为56kD的融合蛋白,占菌体总蛋白的23%.表达产物经Glutathion Spharose4 B树脂亲和层析法纯化后,每100 mL菌液最终可获得5 mg重组t27蛋白,蛋白纯度在90%以上.用兔抗自然P27蛋白阳性血清进行Western blot检测,表明重组P27蛋白有抗原反应活性.用纯化的重组P27蛋白免疫兔子制备多克隆抗体,产生的抗体与禽白血病全病毒抗原可以发生特异性反应.所制备的重组P27蛋白和多克隆抗体将为禽白血病的诊断及ELISA试剂盒的研制奠定基础.     

猪源凋亡相关基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法的建立

为检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的猪胸腺中凋亡相关因子的变化,本研究针对猪TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因及内参β-actin基因设计特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因的SYBR Green Ⅰ qRT-PCR方法.结果显示,该方法线性关系好(R2≥0.998),敏感性高,初始模板的检出下限为10拷贝/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,批内、批间重复试验的变异系数均小于3％,具有良好的重复性.本研究为细胞凋亡相关因子变化趋势的研究提供方法.     

猪链球菌2型在感染猪体内的组织定位和动态分布的研究

为研究猪链球菌2型在感染猪的组织定位和动态分布,本实验采用30头SPF巴马小型猪,随机分为实验组和对照组.实验组20头,按照1×107 CFU·kg-1的剂量肌肉注射ZY05719菌液,对照组10头,按照相同剂量肌肉注射无菌培养基.分别于攻毒后的12 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、10 d时处死,剖杀并采集样品(扁桃体、淋巴结、肝脏、脾脏、肺脏、肾、脑),制作冰冻切片,并用特异性免疫荧光抗体染色法和细菌分离方法,观察10日内细菌在各组织内的定位和动态分布情况.结果表明,细菌主要定殖于扁桃体的隐窝附近;在脾的边缘区和动脉周围淋巴鞘附近、淋巴结的生发中心和皮质内、肝血窦、肺间质和肾小体中均可见菌体状荧光颗粒;在脑组织中发生脑膜炎的区域,如皮质层等可检出细菌.细菌在肝、肾、肺和脾等实质器官内呈现相似的动力学,感染后的前3 d持续上升,第6天开始下降;在扁桃体内12 h就能被检出并持续存在;在脑组织中呈现不规律分布.实验结果为研究猪链球菌2型的致病机理提供一定依据.