精原干细胞体外培养体系的建立

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是雄性哺乳动物精子发生及具有生育能力的保障。精原干细胞的体外培养不仅为精子发生的研究提供材料,还有助于开发新的家畜保种方法和动物遗传修饰。为了探索猪精原干细胞体外培养体系的建立方法,本研究采用胶原酶Ⅳ-胰酶两步酶法对3~7日龄大白仔猪睾丸进行消化得到单细胞悬液,利用不同时间程序的差速贴壁对精原干细胞进行纯化,选择大白仔猪睾丸支持细胞作为饲养层,添加不同细胞因子研究精原干细胞的增殖情况以期得到最佳的培养体系。结果显示,通过差速贴壁得到的UCHL-1阳性生殖细胞比例最高为18.59%±0.94%;不同细胞因子组合添加试验发现精原干细胞添加20 ng·mL^-1 GDNF、10 ng·mL^-1 IGF和20 ng·mL^-1 bFGF的增殖效果最佳;以支持细胞作为饲养层、在DMEM/F12中添加1%FBS以及上述细胞因子组合对精原干细胞进行培养15 d后可见大量的精原干细胞集落,通过免疫荧光、AKP染色、荧光定量PCR等试验证明精原干细胞进行了大量增殖。本研究初步建立了猪精原干细胞的体外培养体系,可通过体外培养大量增殖精原干细胞,为后续精原干细胞的研究奠定基础。     

改良后深部输精方式在后备母猪上的应用效果试验

将深部输精与悬挂式输精结合起来,即为改良后深部输精方式,比常规输精降低20%有效精子数的输精量,在大白、杜洛克及长白3个品种的后备母猪上开展试验,旨在探索后备母猪“保成绩提效率”的输精模式。结果显示,1)试验组Ⅰ、试验组Ⅱ及试验组Ⅲ和相应对照组输精出血比例均在合理范围;2)试验组Ⅰ的分娩率、胎均总仔及胎均活仔比对照组Ⅰ分别高1.38个百分点、0.49头、0.46头,差异不显著(P>0.05);试验组Ⅱ的分娩率、胎均总仔及胎均活仔,比对照组Ⅱ分别高4.89个百分点、0.33头、0.2头,差异不显著(P>0.05);试验组Ⅲ的分娩率、胎均总仔与对照组Ⅲ成绩基本一致,但胎均活仔提高0.47头(P>0.05);3)试验组Ⅰ、试验组Ⅱ及试验组Ⅲ输精时间较对照组相比,平均单头后备节省时间2 min 27 s,差异呈现极显著(P<0.01)。表明,改良后深部输精方式在后备母猪上应用达到了“保成绩提效率”的效果。     

母猪妊娠诊断技术研究进展

母猪妊娠诊断有助于在妊娠早期识别空怀母猪,并调整管理方案。正确的妊娠诊断是保证繁殖机能正常发挥、缩短胎间距、提高繁殖效率和经济效益的重要手段。本文从临床检查、实验室检验和影像诊断3方面介绍了母猪相关妊娠诊断技术,并对其应用现状和未来发展进行了总结展望。     

蓝塘×长白猪F2资源群1、4和8号 染色体活体性状的QTL定位

 【目的】鉴定影响猪重要经济性状的QTL。【方法】利用中国地方猪种蓝塘猪（16头母猪）与外来品种长白猪（8头公猪）建立了资源家系,对257头F2代个体的11个活体性状进行测定。根据美国肉畜中心（USDA-MARC 2.0）公布的猪连锁图谱,在1、4和8号染色体上大约每间隔10—20 cM选择一个微卫星标记,共21个标记,采用ABI 377 DNA序列分析仪进行微卫星基因分型,运用QTL Express 软件包在http://latte.cap.ed.ac.uk网站在线分析,进行QTL定位分析。【结果】体高（body height,BodyHh）的QTL定位于SSC1的68 cM处,与标记SW2185（67.6cM）紧密联锁,达到染色体显著水平（P＜0.05）,解释表型变异的2.22%。体长（body length,BodyLh）的QTL定位于SSC4上的72cM处,位于标记SW839—SW0214,达到染色体显著水平（P＜0.05）。【结论】在猪1和4号染色体上分别检测到一个影响体高和体长的QTL,为今后的QTL精细定位、大片段功能基因的克隆分析、以及猪分子育种技术的应用提供参考依据。     

温氏WS501配套系母系种猪测膘调料效果

本文旨在研究母系种猪测膘调料的效果。开展为期1年的母系种猪测膘调料工作,同期对比繁殖性能变化。结果表明,测膘调料后可以实现精准喂料、合理控制母猪体况、提高母猪繁殖性能,从而提高猪场效益。     

不同品系杜洛克三元杂交猪商品猪胴体及肉质特性遗传分析

【目的】对美系杜洛克三元杂交猪与台系杜洛克三元杂交猪的胴体性状和肉质性状进行准确评估,并分析不同杂交组合、性别对胴体及肉质性状的影响。【方法】共选取同一批次杜洛克三元杂交猪203头,其中美系杜洛克三元杂交猪118头,包含50头阉公猪和68头母猪;台系杜洛克三元杂交猪85头,包含57头阉公猪和28头母猪。统一饲养至(110±5)kg,在同一屠宰场屠宰,并测其宰前活体质量、胴体净质量、眼肌面积、背膘厚、眼肌厚度等胴体性状指标和肉色、大理石纹、PSE(Pale,soft,exudative)值、电导率等肉质性状指标,并进行统计分析。【结果】台系杜洛克三元杂交猪除瘦肉率以外的胴体性状均极显著优于美系杜洛克三元杂交猪(P0.01),且台系杜洛克三元杂交猪肉色主观评分、电导率、a*值也显著高于美系杜洛克三元杂交猪(P0.05);而美系杜洛克三元杂交猪的PSE值、剪切力均优于台系杜洛克三元杂交猪(P0.05)。就性别而言,阉公猪较母猪具有更高的背膘(P0.01)和更低的瘦肉率(P0.05);此外,台系杜洛克三元杂交猪母猪具有更高的电导率和L*值(P0.05),而美系杜洛克三元杂交猪阉公猪的大理石纹则显著高于母猪、且眼肌面积更小(P0.05)。【结论】台系杜洛克三元杂交猪胴体性状整体上优于美系杜洛克三元杂交猪,而美系杜洛克三元杂交猪的肉品质部分优于台系杜洛克三元杂交猪。就性别而言,上述2种群体母猪的胴体性状整体优于阉公猪。     

定时输精技术对杜洛克母猪繁殖性能的影响

本文旨在探索定时输精技术对杜洛克母猪繁殖性能的影响。在温氏种猪公司华东某猪场,对杜洛克正常发情后备母猪、无情期后备母猪及断奶母猪使用定时输精技术后,测定其繁殖性能。试验结果表明采用定时输精技术,可以一定程度上提高正常发情后备母猪以及断奶母猪的发情率、配种率、参繁受胎率、参繁分娩率以及繁殖效率,同时对无情期后备母猪也有一定的促进作用,可使其达到4.06头的繁殖效率。定时输精技术可以在一定程度上提高杜洛克母猪的繁殖性能。     

宇佐美曲霉木聚糖酶在哺乳动物细胞中的分泌表达

本试验旨在从宇佐美曲霉菌株GIM3.36中克隆得到木聚糖酶基因xyn的成熟肽编码序列(555 bp),并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/His^TM A中的不同位置,分别得到重组质粒pcDNA-spna和pcDNA-spnb,重组质粒经过酶切、测序鉴定其读码框的正确性。在脂质体介导下将重组质粒转染猪肾细胞(PK15),通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中测定木聚糖酶酶活,结果显示,重组质粒pcDNA-spna转染细胞后表达的酶活力最高为8.53 U/mL,较pcDNA-spnb表达的酶活(6.87 U/mL)高24%,实现了微生物基因在哺乳动物细胞的分泌表达,为xyn基因在转基因方面的利用提供了依据。     

猪卵丘包裹层数与猪卵母细胞质量的相关性研究

为探讨如何从大量的未成熟卵母细胞中挑选出合适的卵母细胞用于体外成熟培养,本研究根据猪卵丘-卵母细胞复合体(COCs)的颗粒细胞层数和胞质情况,把挑选的COCs分成A、B、C3个等级;体外成熟培养42 ～44 h后,所获得的成熟卵母细胞做孤雌激活,比较孤雌胚的发育能力.结果表明:A、B、C3级卵母细胞的成熟率之间没有差异(P＞0.05),但是A级卵母细胞与B级卵母细胞的孤雌胚胎的囊胚率显著高于C级卵母细胞(P＜0.05).说明卵丘细胞包裹层数不会影响卵母细胞的成熟率,但会影响其潜在的发育能力.     

仔猪初生窝重性状的遗传评估

本文旨在计算温氏某育种场大白猪初生窝重性状的遗传参数,并评估基因组选择不同计算方法对初生窝重性状的选择准确性。利用DMU软件和动物模型估计初生窝重的方差组分,包括加性方差组分和永久环境效应方差组分,并计算性状的遗传力。通过简化基因组测序分型方法,构建大白猪基因组选择参考群体,并利用GVCBLUP和BLUPF90软件,验证群体分别使用BLUP、GBLUP和ssGBLUP方法计算估计育种值的准确性。结果显示：初生窝重的遗传力为0.08,为低遗传力性状。初生窝重与总产仔数、产活仔数、健仔数和弱差猪仔数遗传相关系数分别为0.59,0.68,0.88和-0.17。基因组选择结果显示,验证群体ssGBLUP育种值估计的准确性最高,达到0.38,比常规BLUP方法提高了15.79%,与BLUP估计育种值秩相关达到0.63。对初生窝重的选择,可有效提高产仔数;且结合ssGBLUP方法的基因组选择,能够有效提高估计育种值的准确性。