利用基因拆分技术培育耐草甘膦转基因水稻的研究

耐除草剂转基因水稻基因飘流可能产生的环境安全问题是人们关注的焦点之一,并已成为耐除草剂转基因水稻能否在我国生产上发挥效益的限制因素。基因拆分技术能够有效地控制转基因目标性状飘流,为培育耐除草剂转基因水稻提供新的途径和思路。本研究将耐除草剂基因G2-aroA拆分成N端(EPSPSn,1～295aa)和C端(EPSPSc,296～435aa),分别与SspDnaE蛋白内含肽的N端(Intein-N)和C端(Intein-C)连接形成融合基因EPSPSn-In与Ic-EPSPSc,并分别通过农杆菌介导法转入受体材料中花11。Southern杂交证明转基因水稻En-12和Ec-22中外源基因为单拷贝插入。侧翼序列分析证明转基因水稻En-12和Ec-22中外源基因分别插入第2和第6染色体。利用四引物法筛选出转基因水稻En-12和Ec-22的纯合系,并通过有性杂交获得同时含有EPSPSn-In与Ic-EPSPSc的转基因水稻En×Ec。草甘膦抗性分析发现,单独含有1个基因片段的转基因水稻En-12和Ec-22不具有耐受草甘膦特性,而同时含有2个基因片段的转基因水稻En×Ec具有耐受草甘膦的特性,说明拆分后的2个蛋白片段在intein的介导下重新组装成完整有功能蛋白,并赋予转基因水稻耐受草甘膦的特性。转基因水稻En×Ec与含有完整G2-aroA转基因水稻G2-6相比,其耐受草甘膦的能力有所下降,但能够满足生产需求。本研究结果为利用基因拆分技术培育转基因耐草甘膦水稻提供了科学依据,同时也为利用基因工程手段培育转基因杂交稻提供了新的技术平台。     

基于可持续发展的林业生态环境问题研究

基于林业生态环境建设研究,分析了我国林业生态环境恶化的原因,提出了解决林业生态环境问题的可持续发展策略,旨在为林业发展建设研究提供参考。     

茶文化旅游中的消费者心理需求分析

在各地规划和设计茶文化旅游内容时,较少关注消费者的心理需求问题。根据旅游经济学原理可得,旅游产品应符合这样三个特征:新奇性、多样性、关联性。因此,便需要紧扣以上三个特征要件优化茶文化旅游产品供给。通过对消费者心理需求的分析,增强茶文化旅游市场产品供给的对策包括:重视对游客心理需求偏好的把握、建立按时段控制人数的观光措施、取消不合理门票而将收入隐性化、引导农家茶园实施分类经营模式等四个方面。     

利用CRISPR/Cas9技术创建OsCOL9水稻突变体

CRISPR/Cas9系统可对植物的内源基因进行有效定点编辑,为作物的遗传育种提供了新的方向。以感病水稻品种丽江为材料,抗病基因OsCOL9为靶基因,探索该系统对水稻内源基因定点编辑效率以及获得有研究意义的突变体。OsCOL9基因CDS序列全长1 266 bp,编码一个422 aa蛋白,分子量大小约为45.6 k Da,蛋白质结构的N端含有B-box结构域,C端含有CCT(CONSTANS、CONSTANS-Like、TOC1)结构域。设计4个长20 nt的guide RNAs(gRNAs)靶点,靶向编辑OsCOL9基因的CDS起始区域以及外显子的末端,分别由U3、U6a、U6b以及U6c启动子驱动,提取T1转基因植株的基因组DNA并对编辑位点附近的DNA片段进行序列分析。结果表明,T1材料中OsCOL9的碱基缺失数最多可达59 bp,突变次数最多可达11次,取得较好的基因编辑效果。同时本试验出现了脱靶效应,因此着重探讨了降低脱靶效应的方法。由于CRISPR/Cas9系统在进行基因编辑时没有外源基因的导入,加上该技术的快捷、简便,对生物技术与传统育种的结合具有重要实践意义。     

国土空间规划引领下的我国自然保护地规划探讨

在国土空间规划改革引领的背景下,探讨自然保护地规划体系、规划路径及难点对我国自然保护地规划理论与方法、规划制度确立和完善具有重要的理论和实践意义。文中论述了国土空间规划与生态文明建设的协同推进,分析了自然保护地体系重构和“三区”划定工作中综合评价、整合、归并的研究难点,厘清了从国土“三调”到生态保护红线划定过程中的三阶段技术关键点,即编码转换和基数转换摸清本底、生态保护优先的评价技术、综合分析与三线划定;提出了我国自然保护地规划体系融入5级3类国土空间规划的路径,即应开展全国、省域自然保护地体系规划并对接融入国土空间总体规划,专项规划分国家级、省级和自然保护地单位3个级别,详细规划应包括控制性规划、设计与施工等;通过上述探讨,明晰我国自然保护地“三区”划定、生态保护红线划定的研究难点,提出自然保护地规划融入国土空间规划路径的设想。     

新时代促进县级农业科研单位创新发展的思考 ——以河南省农科系统县级农科所为例

文章阐述了河南省县级农业科研单位发展现状及取得的成效,分析了县级农业科研单位自主创新发展中遇到的瓶颈,提出了立足实用型特色学科开展研究、创新引才引智机制、强化融合发展、加大科技成果转化力度等促进县级农业科研单位创新发展的对策建议.     

酶法提取仙草胶最佳工艺及不同产区仙草胶含量比较

通过单因素实验和L9(34)正交试验研究了提取溶剂的pH值、纤维索酶酶浓度、提取时间、水浴温度对仙草胶提取率的影响,同时在确定纤维索酶提取仙草胶最佳工艺的基础上研究了3个产区仙草中的仙草胶含量差异.结果表明:纤维素酶能够显著提高仙草中的仙草胶提取率,且提取时间是最重要的影响因素,其次是提取温度和酶浓度,提取溶剂的pH值在本试验范围内对仙草胶提取率的影响最小,最终认为提取仙草胶的最佳工艺条件为:提取溶剂pH5.5、0.6%纤维素酶、提取时间4 h、水浴温度55℃,同时表明在3个仙草产区中以广东丰顺县仙洞产区仙草中的仙草胶含量最高.     

不同浓度啤酒废酵母酶解蛋白与硼砂组合对橘小实蝇的捕杀效果

于阳桃园和番石榴园,田间测定了不同浓度啤酒废酵母酶解蛋白与硼砂组合对橘小实蝇的诱捕和诱杀效果。结果表明:在诱捕和诱杀试验中,随着蛋白浓度和硼砂浓度的增加,酶解蛋白硼砂组合对橘小实蝇的捕杀数量呈逐渐增加趋势,以25 g/L蛋白、0.09 mol/L硼砂组合最高。通过诱捕和诱杀试验确定啤酒废酵母酶解蛋白的最佳田间使用浓度为20~25 g/L,硼砂的添加量为0.06~0.12 mol/L。     

微波辅助提取黎豆种皮黑色素

[目的]研究微波辅助碱提酸析法提取黎豆黑色素的工艺条件。[方法]分别采用碱提酸析法和微波辅助碱提酸析法提取成熟黎豆种皮中的黑色素,以紫外分光光度法测定黎豆黑色素的含量。[结果]黎豆种皮黑色素含量为2.41%;碱提酸析法最佳提取工艺为1.0mol/L NaOH溶液为提取剂、料液比1∶20(g/ml),浸提时间4～6 h,再调提取液pH值为2,进行酸析;在此条件下,黑色素粗提物得率为(91.2±2.0)%,黑色素纯度为(36.5±2.1)%;微波辅助碱提酸析最佳工艺为料液比1∶20(g/ml)、1.0 mol/L NaOH溶液为提取剂、微波高档功率处理25 min;在此条件下,黑色素粗提物得率为(95.3±1.5)%,黑色素纯度达到(37.4±1.5)%。[结论]黎豆种皮中含有较为丰富的植物黑色素,值得进一步研究和开发利用;微波辅助较常规碱提酸析工艺明显提高了黎豆种皮黑色素粗提物得率,且大大缩短了提取时间。     

γ-氨基丁酸对鲫鱼运输应激后血液生化指标的影响

为了研究γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)对鲫鱼运输应激的缓解作用,将150条鲫鱼分为5组,分别为空白对照组、试验对照组、GABA 25 mg/L添加组、GABA 50 mg/L添加组、GABA l00mg/L添加组,每组3次重复,运输前和运输2h后每组每个重复取2条鱼尾静脉采血,分离血清,测定皮质醇含量和血清生化指标.结果表明,运输应激可导致鲫鱼血清皮质醇、葡萄糖、碱性磷酸酶、总蛋白、K+等指标含量显著升高,而添加GABA对这些指标的上升水平均有显著的缓解作用.因此,GABA能够缓解应激引起的鱼类机体损伤,从而起到抗运输应激的作用.