乙脑病毒E蛋白中和表位与结核杆菌hsp70 在大肠杆菌中的融合表达

根据大肠杆菌偏嗜性密码子原则,人工合成了乙脑病毒E蛋白C末端的中和表位,位于E蛋白上373~399 aa,通过EcoRⅠ和HindⅢ连接构建原核表达载体pET-32a-epitope。将hsp70通过HindⅢ和XhoⅠ连接到载体pET-32a-epitope上中和表位的3′端,构建融合表达载体pet-32a-epitope-hsp70。诱导表达后,将上清和沉淀分别进行SDS-PAGE,结果表明该融合蛋白以包含体形式存在。将包含体在8 mol/L的尿素中过夜溶解,然后将上清过柱,获得良好的纯化结果。融合蛋白的分子量为94 kD。Western blot显示该蛋白兼具对JEV和结核杆菌热休克蛋白70(M.Thsp70)的特异抗原性。     

枝原淨~对猪增生性肠炎的防治效果评价

本研究评估了枝原淨～产品(活性成分:延胡索酸泰妙菌素)治疗由胞内劳森菌引起的猪增生性肠炎(porcineproliferative enteropathy,PPE)的临床效果。枝原淨～用药组(拌料或饮水)与感染不用药组比较,投药14 d后,粪便中胞内劳森菌的PCR检出率显著降低;健康状况、饲料转化率和平均日增重得到有效提高;免疫组化检测结果表明枝原淨～用药组未检出阳性猪。组织病理学观察显示,用药组的猪呈现较轻的回肠腺上皮增生(PPE的典型病变)或无腺上皮增生,而对照组的猪回肠腺上皮显著增生,说明枝原淨～能有效抑制回肠出现PPE的典型组织病变。结果表明,枝原淨～均能有效抑制胞内劳森菌感染并控制猪增生性肠炎,进而有效提高饲料报酬。     

鸡和鸭痛风病例的病理学观察

通过对鸡痛风和鸭痛风病例的病理学变化观察发现,鸡痛风是以内脏型和关节型同时发生的一种痛风,并且在肾脏形成大量痛风结节,呈现慢性经过;鸭痛风是一种内脏型痛风,呈亚急性痛风,并且在肾脏和脾脏形成少量痛风结节。结果说明尿酸盐在内脏组织的沉着是造成组织损伤和痛风结节形成的主要原因。     

胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立及临床应用

为建立检测可疑病料中猪胸膜肺炎放线杆菌(App)的方法,针对App的RTX毒素(ApxⅣA毒素)毒力基因长约449 bp的片段设计引物,以App 10个血清型的基因组分别作为模板,对PCR扩增条件进行优化筛选,并进行了特异性及重复性试验。对副猪嗜血杆菌、马链球菌兽疫亚种、多杀性巴氏杆菌的扩增结果为阴性,表明该PCR方法特异性强,建立了该菌的种属特异性PCR方法。以筛选出的优化条件,对22份临床可疑病料进行了检测。结果表明,建立的PCR方法特异、快速、稳定、敏感,优于传统的细菌学方法,可作为App可疑病料的检测方法。     

猪圆环病毒3型的检测及其全基因进化分析

本研究对2016年3月~2017年3月采集于上海市猪场的20份病料进行了病原体检测,并对检测到的圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)进行了全基因分析。检测结果显示:猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV)阳性病料1份,而猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)均为阴性;PCV3阳性病料2份,其中1份为PCV3和PRRSV混合感染。对这2株PCV3进行全基因测序和Blast分析,并绘制PCV3全基因、囊膜蛋白基因的遗传进化树,结果显示:与这2株病毒基因同源性最高的毒株为CN/Hubei-618/2016,同源性为99%;在全基因进化树中,这2株毒株和中国来源的PCV3毒株以及美国毒株PCV3/USA/MO2015(Gen Bank登录号:KX778720.1)在同一群中;在囊膜蛋白基因的进化树中,这2株PCV3属于PCV3a。     

上海地区猪群中H1N1甲型流感抗体检测

对2009年H1N1甲型流感流行前后的上海地区养殖场户410份猪血清样品,分别采用血凝抑制试验（hemagglutination inhibition,HI）和酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）进行检测H1N1甲型流感病毒和猪流感病毒（Swine in？uenza virus,SIV）。检测结果表明,除2007年外,2008~2010年猪血清中均存在不同水平的HI抗体,阳性率呈显著上升趋势,且抗体水平与猪群饲养周期及饲养密度正相关,而与猪流感病毒的流行无相关性。     

上海市某腹泻猪群猪流行性腹泻病毒检测及全基因序列分析

猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染引起的仔猪严重腹泻性疾病,传播快,发病急,死亡率高,给我国养猪业造成巨大损失。2021年10月上海某猪场产房仔猪发生腹泻,发病率为30%～50%,死亡率为20%～30%,猪群之前进行过疫苗免疫。粪便样本经猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（RV）荧光RT-PCR检测,结果显示：PEDV检测为阳性,TGEV和RV检测均为阴性。经全基因测序后进行系统进化分析,结果显示：全基因序列属于GⅡ-c亚群,S基因序列属于GⅡ-b亚群,与目前的经典疫苗株CV777和变异株AJ1102相比,CV777的全基因和S基因都属于GⅠ-b群,AJ1102的全基因和S基因都属于GⅡ-b亚群,研究结果表明新基因型的PEDV已在上海地区流行,而传统疫苗株无法提供好的免疫效果,提示新的防控策略的制定和有针对性的疫苗的生产和使用,对于预防PEDV感染和流行有重要意义。     

一例猫传染性腹膜炎的诊治

猫传染性腹膜炎(Feline infectious peritonitis,FIP)是由猫传染性腹膜炎病毒( Feline infectious peritonitis virus , FIPV )引起的猫科动物的一种慢性、渐进性、致死性传染病,以腹膜炎、大量腹水积聚及致死率较高为主要特征[1]。该病不同年龄的猫均易感,多发于4 岁以下年轻成猫,纯种猫发病率高于一般家猫。本病的潜伏期长短不一,各种应激条件以及感染猫的自身疾病和猫免疫缺陷病等都是促使FIP发病的重要因素。该病呈地方流行性,发病率低,但一旦出现临床症状,致死率几乎为100%。笔者从临床症状、血常规检查、X 光影像学以及分子生物学诊断等方面对一例猫渗出性传染性腹膜炎病例报告如下,以期对该病的诊治提供参考。1 临床病例患猫品种为英国短毛猫,雌性,8月龄,体重2.1 kg 。食欲正常,体温40.6 ℃,大小便正常。腹部膨大、腹部触诊有明显的水样波动;抽取腹水,呈淡黄色黏稠样液体。     

绵羊伪狂犬病病毒的分离鉴定及其gD基因序列分析

本研究以1例疑似绵羊伪狂犬病病例为研究对象,进行了病毒分离鉴定及其g D基因分析。将病料接种BHK-21细胞,细胞出现病变,经间接免疫荧光和荧光定量PCR检测结果证实,所分离的病毒为伪狂犬病病毒,将其命名为SH1311毒株。在电镜下观察病毒,病毒粒子呈球形,囊膜表面有大量纤突。对分离株g D基因进行PCR扩增、测序和序列分析,并与国内外伪狂犬病病毒株的同源性进行比较发现,该分离株与2012年以来上海市分离的猪PRV毒株g D基因的同源性最高,为99.8%~100%,而与2010年上海市流行毒株相比,同源性只有80.5%。构建的g D基因进化树显示,SH1311分离株与上海市2012~2015年间分离的7株猪伪狂犬病病毒以及国内JS-2012、HNB、HN1201、HLJ8、BJ/RD、ZJ01毒株属于同一个进化分支,亲缘关系最近,与欧美以及韩国的流行毒株都处在不同的分支上。     

主动免疫GnRH疫苗对公犬生殖功能的影响

为了探究促性腺激素释放激素(GnRH)疫苗对公犬生殖功能的影响,试验将GnRH基因克隆至原核表达载体中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用终浓度为1 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行蛋白鉴定,将鉴定正确的GnRH蛋白纯化后制备成抗原。选取6只2～4月龄健康公犬随机分成2组,每组3只,其中免疫组每只犬免疫GnRH蛋白1 mg,共免疫3次,每次间隔4周,分别于免疫前和一免、二免、三免后14天采血,通过ELISA检测血清GnRH抗体及睾酮水平,并于最后一次采血结束后制备睾丸组织切片,观察睾丸组织形态。结果表明：3次免疫后免疫组GnRH抗体水平均显著高于对照组(P<0.05),睾酮水平均显著低于对照组(P<0.05),免疫组睾丸相对较小,曲精小管中生精细胞数量较少,管径较细。说明主动免疫GnRH疫苗抑制了公犬的性腺发育和生殖器官的成熟。