单增李氏杆菌中反义RNA介导基因调控的研究进展

单增李氏杆菌是一种人畜共患的革兰氏阳性细菌。该细菌作为实验模型在研究细菌适应性免疫和毒力因子等方面取得诸多成就。最近,应用新技术在单增李氏杆菌的基因组中已发现数百个非编码RNA(ncRNAs),揭示了其复杂的转录机制。反义RNA是目的基因互补链的非编码RNA序列。本文,对反义RNA在单增李氏杆菌中的作用机制和功能进行简要综述,这有助于更深层次的理解RNA介导的基因调控,为诊断技术及抗菌药的研发提供方向。     

成人肝cDNA文库的构建

用异硫氰酸胍／盐酸胍法从人肝组织中提取ＲＮＡ，通过Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维柱分离出ｍＲＮＡ。以ｍＲＮＡ为模板，含ＮｏｔⅠ接头的Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）为引物，在逆转录酶ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔⅡＲＴ催化下合成单链ｃＤＮＡ（ｓｓｃＤＮＡ），再在Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡ聚合酶Ⅰ与ＲＮａｓｅＨ和ＤＮＡＬｉｇａｓｅ共同作用下，ｓｃＤＮＡ拷贝成双链ｃＤＮＡ（ｄｓｃＤＮＡ）。经放射自显影测定，合成有全长ｃＤＮＡ片段。平末端ｄｓｃＤＮＡ与ＳａｌⅠ接头连接，ＮｏｔⅠ酶切后，通过过柱取掉小于５００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，大片段ｃＤＮＡ与载体ｐＳＰＯＲＴ１连接，转化受体菌ＤＨ５α，经稀释测定出含有重组子的文库大小为３．３×１０６。该文库适合于筛选低丰度ｍＲＮＡ的ｃＤＮＡ克隆。     

人血清白蛋白DNA片段的扩增及克隆

根据人血清白蛋白(HSA)基因的第八个外显子区DNA序列及相应cDNA序列和KB小鼠血清蛋白DNA序列设计的一对引物P_1:5'-GGATCCACCAACTTACTTATAGGCG-3'和P_2:5'-AGGATCCTACTTACATGCCCAGGAAG-3'.以人白细胞和KB鼠DNA为模板,在50_(μl)PCR反应体系中,经94℃、lmin,58.5℃,35S,72℃、lmin三个循环.94℃、lmin,57.5℃,40S.72℃、lmin32个循环扩增,获得了约为256bp的单一带DNA,KB鼠无专一带.将人HSA DNA扩增的单一带DNA以BamHI-Sst I位点克隆到pUC19中,得到HSA DNA扩增片段的克隆子.     

单核细胞增生李斯特菌检测技术研究进展

单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)是一种世界范围内的食源性病原菌,食用被该菌污染的食物会引起李斯特菌病,致死率高达20％～30％.单增李斯特菌广泛存在于环境、食品、人和动物宿主中,可以在极端条件下生存并引起食物污染,已成为人们关注的重要公共卫生问题.论文主要综述了近年来国内外几种关于单增李斯特菌的快速检测方法,包...     

蓝耳病的实验室诊断

蓝耳病即猪繁殖和呼吸综合征（PRRS）,是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）引起的一种繁殖障碍及呼吸道的传染病。该病是近几年严重影响养猪业的传染病,也是猪难养的罪魁祸首,不仅给养猪生产场户带来巨大的经济损失,也给食品安全造成危害。因此,必须快速、准确的诊断。本文就蓝耳病的病原学、血清学及分子生物学诊断等作一简要的介绍。     

芦山县鸡场耐药菌株的耐药性分析

鸡大肠杆菌是一种重要的条件致病菌,可引起脐炎、败血症、输卵管炎和滑膜炎、肉芽肿、卵黄性腹膜炎、眼炎等一系列病症[1]。金黄色葡萄球菌也是一种条件性致病菌,是自然界中分布最广的微生物之一。葡萄球菌引起的腱鞘炎(关节炎)在肉鸡生产中已成为全球关注的问题[2]。试验以四川省芦山县5个鸡场患病鸡群中分离     

仔猪补铁制剂的对比试验报告

<正>为了提高仔猪成活率和断奶体重,出生后两周龄内补铁制剂可发挥更大作用,2012年5月在吉林省农安县某规模猪场对两种仔猪补铁制剂进行了对比试验。现将报告如下,供养猪朋友参考。1试验目的铁是哺乳仔猪生长所必需的矿物质微量元素。出生仔猪不能从母体获得铁,只能从母乳中摄取;但从母乳摄取的铁满足不了哺乳仔猪     

冬虫夏草菌分离培养初探

冬虫夏草是虫草菌[Cordyceps sinels(Berkeley)sacc]寄生在蝙蝠蛾(Hepialus armoricanus Oberthiir)幼虫的结合体上,药用价值很高。本实验对天然虫草菌进行了分离培养,获得了形态相同的虫草菌丝体。材料和方法     

4种干燥方法对马茵菜品质的影响

采用热风干燥、太阳能干燥、真空冷冻干燥和真空干燥4种干燥方法对野生马茵菜进行干制,测定色差、叶绿素含量、营养成分、矿质元素、复水性等指标,比较不同干燥方法下马茵菜营养成分和品质的差异。结果表明,真空冷冻干燥处理的马茵菜L*值最大,a*值最小,b*值最大,即色泽较为鲜亮,与新鲜马茵菜最为接近,叶绿素含量最高;热风干燥处理与真空干燥处理次之;而经太阳能干燥处理的L*值最小,a*值最大,b*值最小,叶绿素含量最低。在营养成分方面,太阳能干燥后的马茵菜总糖含量最高,热风干燥与真空干燥后总糖含量差异不明显,但显著高于真空冷冻干燥。在蛋白质含量和Vc含量方面,真空冷冻干燥的蛋白质含量和Vc含量最高,且显著高于其余处理;其次是真空干燥处理和热风干燥处理;太阳能干燥处理后的蛋白质含量和Vc含量最低。干燥方法对灰分影响差异不大,为110.0～117.0 g/kg。不同干燥方法所干燥的马茵菜矿物质含量均很高。真空冷冻干燥的马茵菜复水性能优于热风干燥、太阳能干燥和真空干燥,复水的前5～15 min内复水比迅速增大,达到一个较高值之后随着时间增加缓慢变化。用沸水进行复水需要时间短,复水比大于冷水复水比。综合考虑,采用真空冷冻干燥方法保持野生马茵菜的营养成分及产品品质的效果较好。