广西猪瘟流行毒株全基因组的克隆与序列分析

参考已发表的猪瘟病毒(CSFV)Shimen株、HCLV株、Paderborn株的核苷酸序列，设计并合成11对引物。应用RT—PcR技术，成功地分11个片段扩增了CSFV广西流行毒株GXWZ02的全基因组，将这11个基因片段克隆，并测定了其核苷酸序列。应用计算机生物软件Vector NT1将11个基因片段进行拼接。确认CSFV GXWZ02株全基因组序列的长度为12296个核苷酸(GenBank收录号AY367767)。将GXXZ02株与国内外已发表的Slhimen、HCLV、39、Brescia、Eystrup、Glentorf、Alfort187、Pader190rn、CS、ALD、GPE、P97、LPC毒株进行全基因组核苷酸序列和推定的氨基酸序列比较，核苷酸同源性分别为85．4％、84．6％、88．7％、85．7％、85．7％、85．3％、85．6％、95．3％、85．7％、85．7％85．4％、83．4％、84．3％，推定的氨基酸同源性分别为92．6％、91．7％、94．2％、93．1％、92．9％、92．3％、93．0％、97．7％、92．6％、93．0％、92．6％、90．5％、90．6％。GXWZ02与Shimen、HCLV的全基因组序列及推定的氨基酸序列有明显差异，表明GXWZ02株在遗传性和抗原性上发生了较明显的变化。系统发育树分析，所比较的14株CSFV被分为2个群：GXWZ02、Paderborn和39这3个毒株被归为群Ⅰ，其余的11个毒株被归为群Ⅱ，GXWZ02与Paderborn的亲缘关系最接近。将GXXZ02与Shimen、HCLV基因组中单个基因分别进行核苷酸及推定的氨基酸序列同源性比较，结果显示，基因E^ms、E2、P7、NS2、NS5A的遗传变异程度大。而NS3、NS4A、NS4B的遗传性则相对保守。     

广西猪瘟流行毒株生长特性的初步研究

本实验以来自广西梧州、博自和北海地区的3株猪瘟野毒和中国标准石门株病毒、疫苗毒为材料,研究其在宿主体内和体外PK-15细胞中增殖的基本特性和差异.结果显示,广西的一部分毒株很可能在毒力和生长特性上已经发生了一些变异.本实验用免疫酶实验检测PK-15细胞中的猪瘟病毒抗原,发现其主要存在于细胞的核膜以及内质网和高尔基体富集的区域.     

从发病仔猪呼吸道检测出猪腺病毒

根据猪腺病毒六邻体保守区域设计两对引物,用Nested-PCR的方法从送检的发病仔猪的呼吸道分泌物中扩增出两个核酸片段.通过基因克隆、序列测定和序列比较,发现这两个核酸片段与猪腺病毒5型和3型的相应片段同源性最高,分别为97.4%和95.3%.证实发病仔猪呼吸道存在猪腺病毒的感染.为下一步猪腺病毒的分离及猪腺病毒表达载体的构建打下基础.     

用HN亚单位疫苗预防ND

用含有表达NDV HN的重组杆状病毒的汕乳剂苗接种小鸡,可产生血凝抑制反应(HI)和抗NDV的中和抗体。用活的重组病毒接种较用经β—丙内酯灭活的组重病毒接种所获得的HI抗体滴度要高,但较存活的或β—丙内酯灭活的NDVB_1株的HN浓缩     

RT-PCR技术检测猪瘟病毒的应用研究

本试验应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对猪瘟进行诊断应用研究.应用RT-PCR对来自广西不同地区的135份疑似猪瘟病料进行检测,84份诊断为阳性,阳性率62.2%.从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共276份,经RT-PCR检测,37份为阳性,阳性率为13.4%.其中健康猪扁桃体带毒较高,246份扁桃体中有35份阳性,占14.2%.采自柳州健康猪的26份淋巴结材料全为阴性,只有邕宁县的1份健猪淋巴结阳性.结果表明,RT-PCR技术可应用于猪瘟的临床诊断.     

RT-PCR技术诊断猪瘟的应用研究

应用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT-PCR况对来自广西不同地区的135份疑似猪瘟病料进行检测，以份诊断为阳性，阳性率62．2％。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共276份，经RT-PCR检测，37份为阳性，阳性率为13．4％。其中健康猪扁桃体带毒较高，246份扁桃体中有35份阳性，占14．2％。采自柳州健康猪的26份淋巴结材料全为阴性，只有邕宁县的1份健猪淋巴结阳性。结果表明，RT-PCR技术可应用于猪瘟的临床诊断。     

广西部分地区猪群中猪链球菌分离株的毒力基因检测及毒力测定

为了解广西部分地区(玉林市、大新县、那坡县、东兴市、靖西市和百色市)猪群中猪链球菌(Streptococcus suis,SS)毒力基因的流行情况和毒力水平,试验采用PCR方法检测分离到的201株(经鉴定猪链球菌2&1/2型24株,猪链球菌7型2株,猪链球菌9型15株,一共41株)猪链球菌的毒力基因orf2、sly、ef和mrp,并通过斑马鱼模型筛选毒力较强的菌株,测定菌株的半数致死剂量(LD₅₀)。结果表明：从广西部分地区分离的201株猪链球菌的4种毒力基因携带率从高到低依次为orf2(85.6%,172/201)>sly(55.2%,111/201)>ef(33.8%,68/201)>mrp(26.4%,53/201);6个市县主要流行的毒力基因不同,玉林市、大新县、那坡县、东兴市、靖西市和百色市分离的猪链球菌携带最多的毒力基因分别为orf2(100%)、orf2(89.2%)、orf2(91.5%)、ef(44.4%)、orf2(86.7%)、orf2(40.0%);经鉴定分型的41株猪链球菌中,有7株(17.1%,7/41)同时携...     

广西狂犬病野毒株L基因3'端的多态性分析

为了解狂犬病病毒(RV)的变异情况,本研究对广西不同地区的22个RV分离株的L基因3'端片段进行克隆和测序,与国内外发表的RV街毒、固定毒株及类RV株相应部分的多态性进行了比较分析.结果表明.所测定的22个广西RV野毒分离株属于基因I型,可分为3个群即I群、Ⅱ群和Ⅲ群.其中13株属于I群,其核苷酸同源性为96.9%～100.0%,氨基酸同源性为98.2%～100.0%;8株属于Ⅱ群,株核苷酸同源性为96.5%～99.7%.氨基酸同源性为97.8%～100.0%.仅1株属于Ⅲ群.22个RV分离株与RV固定毒株核苷酸和氨基酸的同源性分别为79.5%～86.9%和85.8%～96.5%,与类RV核苷酸和氨基酸的同源性分别为65.7%～70.3%和70.4%～76.5%.     

猪瘟单克隆抗体的制备及ACI-ELISA检测猪瘟病毒的研究

本研究用猪瘟石门毒(CSFV-Shimen)免疫BALB/C小鼠,按常规单克隆抗体(McAb)技术方法制作,最终获得4株McAb,分别命名为AC9、CF8、DG5和EC9,4株McAb与基因工程CSFV E2蛋白反应结果表明:AC9、CF8和EC9是抗CS-FV E2蛋白的McAb.用AC9和CF8McAb对CSFV进行抗原捕获间接ELJSA试验(ACI-ELISA),通过一元McAb和二元McAb CAI-ELISA试验的比较,结果表明AC9与CF8两种McAb有协同作用,其捕获CSFV的能力比一元McAb显著提高.方阵试验结果表明:McAb和血清多抗(PcAb)的最佳工作稀释度分别为1:400和1:200.特异性试验和敏感性试验结果显示本法特异性强,敏感性高.最后用ACI-ELISA与PCR对30份病料的检测结果比较,表明ACI-ELISA与PCR检测结果相符.上述结果说明本研究所获得AC9和CF8可用作猪瘟诊断试剂盒的研制,是检测CSFV的有效方法.     

从母猪白细胞检出猪瘟病毒

本研究应用RT-PCR对广西不同地区的老母猪白细胞172份、猪流产胎儿与死胎162份、新生仔猪33份和120份健康猪扁桃体进行猪瘟病毒检测.检出母猪白细胞阳性2份、流产胎儿与死胎阳性12份,健康猪扁桃体阳性1份和新生仔猪阳性3份.对其中1份母猪白细胞阳性材料、1份健康猪扁桃体阳性材料和4份流产胎儿材料进行猪瘟病毒E2基因的测序分析.结果显示,来自母猪白细胞的GXXJBl与HCLV、Shi-men株的核苷酸同源性分别为96.9%和94.0%,推导的氨基酸同源性分别为95.9%和94.2%;与其他的广西毒株的核苷酸同源性为81.1%～99.5%,推导的氨基酸同源性为89.6%～99.2%.根据遗传进化树分析,样品GXXJBI属于基因Ⅰ群.