猪圆环病毒2型特异性纳米抗体文库的构建及鉴定

为构建猪圆环病毒2型(PCV2)特异性纳米抗体文库,并对其库容和多样性进行鉴定分析,使用PCV2全病毒灭活疫苗免疫羊驼,经四次免疫后采血分离外周血淋巴细胞,提取总RNA,通过RT-PCR反转录合成cDNA;根据羊驼重链抗体基因序列设计特异性引物,通过巢式PCR扩增羊驼单域重链抗体(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody,VHH)基因片段vhh,并将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB 5E中,构建pCANTAB- vhh重组质粒;通过电穿孔法将重组质粒导入E. coli TG1获得抗PCV2特异性纳米抗体基因文库。文库菌梯度稀释后计数单克隆菌落数,并通过菌液PCR鉴定重组菌阳性率,计算抗体文库库容量;对PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,分析抗体文库多样性。结果显示,构建的PCV2特异性纳米抗体文库重组菌阳性率为92.0%,库容量为2.75×10¹⁰ CFU/mL;测序后序列比对分析结果表明,纳米抗体文库包含的基因序列具有丰富的多样性。本研究成功构建了PCV2特异性纳米抗体文库,且文库质量满足后续试验要求,为进一步获得针对PCV2抗原的纳米抗体奠定了基础。     

猪链球菌的鉴定及其主要毒力基因的多重PCR检测

通过革兰氏染色镜检、生化试验及PCR鉴定,对分离的猪源链球菌进行初步研究.同时根据猪链球菌主要毒力因子基因Sly、MRP、EF的核苷酸序列,设计并合成了3对特异性引物,通过体系和条件优化,建立多重PCR检测方法,对实验菌株及阴性对照菌株进行检测分析.结果从不同地区分离到的30株猪源链球菌中,确认16株为猪链球菌.多重PCR检测结果显示,Sly检出率为5/16,MRP检出率为4/16,EF检出率为2/16,阴性对照菌株毒力因子检测结果均为阴性.分析结果表明,该多重PCR体系可用于猪链球菌毒力相关因子Sly、MRP、EF的基因检测,特异性和敏感性较好.     

大肠杆菌耐药性的产生原因及防治对策

近年来，大肠杆菌病的发生给养禽业造成了很大的经济损失。“道高一尺，魔高一丈”，每一种新药的推广应用，总是伴随着耐药菌株的出现，这给大肠杆菌病的防治工作提出了更高的难度和要求。为控制本病的发生，保护和促进畜禽业的健康发展，本文就大肠杆菌耐药性的产生原因及防治对策进行了初步探讨。 1大肠杆菌耐药性产生原因 1.1大肠杆菌的适应性 1940年， Abraham和 Chain从大肠杆菌分离和鉴定出了一种能水解青霉素的酶，至此，人们才了解到即使在未使用抗生素之前，大肠杆菌就存在着耐药性。这一发现说明了耐药性不仅是反复用药的结果，…     

蜂胶对NDV的灭活作用效果观察

本文通过鸡胚接种的方法就蜂胶乙醇浸出物对NDV的灭活作用进行了试验观察，结果表明常温下3min，1mg／ml的47．5％乙醇稀释液对ND克隆-30具有灭活作用。含蜂胶乙醇浸出物0．1mg／ml的95％乙醇稀释液、含蜂胶乙醇浸出物10mg／ml的47．5％乙醇稀释液、含蜂胶乙醇浸出物10mg／ml的生理盐水稀释液；37℃3min，含蜂胶乙醇浸出物0．1mg／ml的95％乙醇稀释液、含蜂胶乙醇浸出物0．1mg／ml的47．5％乙醇稀释液、含蜂胶乙醇浸出物10mg／ml的生理盐水稀释液均对ND克隆-30具有完全灭活作用。     

大肠杆菌菌毛抗原K99与耐热肠毒素STⅠ融合基因的克隆与核苷酸序列测定

采用PCR技术，从大肠杆菌K99中扩增出0．54kb的K99菌毛抗原基因，然后将其克隆到pUCm—T载体上，用Bgl Ⅱ鉴定K99插入的方向并测序。选择目的基因片段插入方向正确的重组质粒经BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切后，通过T4连接酶与同样经BamH Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切合成的耐热肠毒素ST Ⅰ核苷酸序列连接，通过PCR方法鉴定分析和核苷酸序列测序分析，证明插入的K99-ST Ⅰ融合基因片段具有正确的核苷酸序列。     

国外猪增生性肠炎诊断方法研究进展

猪增生性肠炎（Porcine Proliferative Enteritis，PPE）在全球大部分国家的养猪地区均有分布，是影响养猪业的世界性疾病之一。感染猪发病时临床表现大多不明显或缺乏特异性，使得该病的诊断出现一定难度。国外曾先后建立多种检测技术，用病理剖检、组织染色、免疫组化等方法检测肠损伤情况，用酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光抗体试验、免疫过氧化物酶单层试验等方法检测血清中胞内劳森菌抗体水平，用PCR等方法直接检测粪便中病原。以上方法根据其不同特点适用干不同场合的诊断。目前对ELISA和PCR方法的研究有较大进展，已有大量临床应用方面的报道。     

PRRSV经典与高致病性毒株RT-PCR鉴别检测方法的建立

根据GenBank登录的经典与高致病性PRRSVNsp2序列,设计了1对引物,所扩增的序列包含高致病性毒株缺失部分,用于区分经典与高致病性毒株,并对扩增条件进行了优化。结果表明,应用该方法,能从经典与高致病性PRRSV基因组中分别扩增出573,483bp的特异性片段,病毒基因组混合后能够同时扩增;并可以检测出1.8TCID50/100μL经典毒株及0.6TCID50/100μL高致病毒株的病毒RNA;对CSFV,JPV,PEDV,TGEV,RV,PPV,PRV,PCV-2等常见猪病毒病病原的鉴别诊断均为阴性;对分离的8株PRRSV进行检测,3株为经典毒株,5株为高致病毒株;对采集的59份确诊病料进行了检测,21份为经典毒株感染,38份为高致病毒株感染。本研究建立的RT-PCR诊断方法,具有特异、灵敏、快速等特点,可用于区分PRRSV经典与高致病毒株。     

利用Markov 过程预测安吉土地利用格局的变化

根据浙江安吉山区2 个时期山地资源清查资料获得的土地利用类型数据, 成功地确定了土地利用类型的转移矩阵, 并用Markov 链模型预测了该山区土地利用类型变化趋势。结果表明, 当前该区的土地利用格局正处在一种荒山、农田、居民点及水域逐渐减少, 林地、果园用地逐渐增加的变化状态, 而且这种变化将持续很长时间, 最后达到以山区林地78.4 %为主体, 同时湿地在不断减少的新的土地利用格局。表3 参11     

猪伪狂犬病蜂胶疫苗和油佐剂疫苗对小白鼠注射部位损伤的病理组织学比较

用猪伪狂犬病 g E/ g I基因缺失蜂胶灭活疫苗和油佐剂疫苗分别腿肌注射免疫实验动物小白鼠 ,分别于免疫后 2 ,7,1 4 d和 3 5d剖杀 ,取注射部位的肌肉组织 ,常规石蜡包埋切片观察。结果表明 ,蜂胶苗注射后立即吸收 ,局部不留痕迹 ,感官与对照相比无任何差异。免疫 2 d注射局部显微变化轻微 ,7d后肌纤维间隙发现吞噬黄色蜂胶疫苗的细胞 ,1 4 d此种细胞更多 ,3 5d汇聚成片 ;油苗注射后在 3 5d的试验期内一直未能全部吸收。免疫 2 d见肌纤维断裂、肿胀、坏死 ,大量嗜中性粒细胞浸润 ,肌纤维间隙广泛分布油囊 ,7d时局部炎症仍很严重 ,1 4 d表现炎症转归 ,至 3 5d形成肉芽组织包裹的油囊结构。结果表明 ,蜂胶疫苗免疫后 ,不但局部组织学影响明显小于油苗注射组 ,而且可趋化大量吞噬细胞到注射局部 ,促进抗原高效递呈 ,且可在注射局部的吞噬细胞胞浆中停留 3 5d以上 ,可能起到了类似“抗原库”的作用 ,从而更加持久有效地诱导免疫应答