禽流感疫苗的研究进展与展望(上)

禽流感病毒(Avian innuenza virus,AIV)属于正粘病毒科、流感病毒属、A型流感病毒.AIV感染禽类后可引起一种以呼吸系统乃至全身性败血症为特征的传染性疾病,即禽流感(Avian influenza,AI).AI不仅可以在家禽中传播,严重影响畜牧养殖业的生存和发展;而且还可以由家禽传给人类,直接威胁人类的健康,对人类造成极大危害.     

山东省分离强毒株猪伪狂犬病病毒SA株TK基因结构与进化分析

对山东省分离强毒株猪伪狂犬病病毒SA株TK基因进行了克隆和部分序列测定,并分析比较了该序列与国内外主要流行毒株伪狂犬病病毒Ea株、Min-A株、LA株、Kroea株、Kaplan株、SH株的同源性.结果表明:核苷酸序列的同源性分别为99.0%、99.1%、98.9%、99.0%、98.3%和74.4%;氨基酸序列的同源性分别为98.7%、98.4%、98.4%、98.7%、98.3%和74.8%;猪伪狂犬病毒SA株TK基因具有疱疹病毒胸苷激酶催化结构域的保守氨基酸共有的对应于这两个亚结构域的特征基序,其蛋白的二级结构由α-螺旋(45.38%)、β-折叠(14.46%)、β-转角(6.02%)和无规则卷曲(34.14%)组成;将猪伪狂犬病毒TK基因与鸡、牛、猫科、马科、人类的胸苷激酶用DNASTAR 绘制进化树进行分析,可知猪疱疹病毒Ⅰ型TK基因亲缘关系与哺乳动物的疱疹病毒较近,而与禽类的相对较远.     

Marc-145细胞PKR基因遗传分析与表达

旨在克隆Marc-145细胞蛋白激酶R(PKR)基因,对其进行遗传特性及表达研究。利用RT-PCR克隆获得Marc-145细胞PKR基因,并对其核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性与遗传进化分析;将该基因分别插入pEGFP-C1与pEGFP-N1多克隆位点,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合真核重组质粒,转染HEK293细胞,通过荧光显微镜观察、Western blot检测EGFP标签,开展PKR融合表达研究。结果显示,成功克隆获得Marc-145细胞PKR基因,编码区为1 653 bp,推导编码550个氨基酸,与选取的灵长类及哺乳动物参考物种PKR基因核苷酸序列同源性在72.2%～99.8%之间,氨基酸序列同源性在55.4%～99.5%之间,与豚鼠及其供体物种非洲绿猴(Cercopithecus aethiops)同源性分别为最低、最高;成功构建了EGFP-PKR融合质粒,但荧光蛋白观察及Western blot检测表明,仅C端融合质粒成功表达。结果表明,成功克隆了Marc-145细胞PKR基因并进行了融合表达,为进一步开展猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在感染细胞与细胞内...     

两株猪圆环病毒2型的分离及基因组序列分析

为比较猪圆环病毒2型毒株的遗传变异特性,从2009年河南郑州和山东东营的猪场疑似猪断奶后多系统衰弱综合征(PMMS)病料中分离到2株病毒,经PCR检测初步鉴定为猪圆环病毒2型,并对病毒全基因组进行扩增,用DNA Star对序列进行比较分析.结果表明,分离到的河南郑州和山东东营PCV-2毒株全基因组长度均为1 767 b...     

鸡新城疫病毒Ⅰ系在不同细胞上增殖特性的研究

为了在疫苗生产过程中实现应用传代细胞系大规模增殖培养鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),试验将NDVⅠ系分别接种至BHK-21、Vero与DF-1细胞系中,并对F1～F3代不同细胞培养物的凝集价、细胞半数感染量(TCID_(50))与鸡胚半数感染量(EID_(50))进行测定,研究NDVⅠ系在BHK-21、Vero与DF-1细胞上的增殖特性,并确定培养NDVⅠ系的最佳细胞系。结果表明:NDVⅠ系在BHK-21、Vero与DF-1细胞中均可增殖,并产生明显的细胞病变;F1～F3代细胞培养物随着传代次数的增加,凝集价(DF-1细胞除外)、TCID_(50)与ELD_(50)下降;用BHK-21细胞培养的病毒毒力显著高于另两种细胞培养物。说明在三种传代细胞系中,BHK-21细胞较DF-1与Vero细胞更适合于NDVⅠ系的生长。     

鸡痘病毒TCID50和EID50值相关性分析

鸡痘是鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)引起的一种急性接触性传染病,各年龄和品种的鸡都易感染,但雏鸡的敏感性最高.鸡痘可使病禽生长迟缓,产蛋下降,种禽发病时孵化率降低,若并发其他传染病、寄生虫病和卫生条件、营养状况不良时也可以引起大批死亡,特别是雏鸡损失更为严重,死亡率高达50％[1].在我国普遍采用疫苗接种措施,鸡痘的发生率已明显下降.目前,我国使用的国产鸡痘疫苗有两种,一种为细胞苗,另一种为组织苗.     

基于克隆文库筛选的池设计

池设计（pooling design）是基于克隆文库筛选（clone library screening）的一种实验设计，要求从大量的克隆体中筛选出其中舍有某组特定核苷酸串的克隆体，它属于组合群试。一个池设计方案用一个二元关联矩阵（称为分离矩阵）表示，行对应于试验，列对应于克隆集合的体；考虑到生物实验存在误差，分离矩阵还需要有查错和纠错能力。利用子集或子空间之间的包含关系可以构建出分离矩阵，它的每行和每列中元素1的个数分别都一样，但试验总次数即行数明显大于信息下界。     

ELISA试剂盒对饲料中霉菌毒素的检测与分析

饲料霉变产生的霉菌毒素是对饲料危害最大的天然生物性污染物,严重威胁着全世界畜禽及饲料的安全,给饲料企业及养殖业造成了极大的危害.最近的研究表明:霉菌毒素,即使检出水平只有我们过去认为的"微量"水平,也会对动物的生产性能和健康状况产生负面影响,特别是对当前高产基因品种的动物尤为如此[1,2].同时,霉菌毒素可通过畜禽产品间接威胁人类健康[3-5].因此,及时快速检测饲料中是否含有常见的几种霉菌毒素,对于保障饲料安全,预防和诊断动物疾病具有重要的意义.而酶联免疫吸附法(ELISA)检测饲料霉菌毒素具有特异性强、灵敏度高、快速简便、成本低廉的特点,为此,本试验采用ELISA试验盒对饲料中黄曲霉毒素B1(AFB1)、赭曲霉毒素A(OTA)、呕吐毒素(DON)的含量进行了检测,现将结果报告如下:     

猪细小病毒PPV-SD1株VP2全基因的克隆及原核表达

为研究猪细小病毒PPV-SD1分离株的VP2蛋白的结构与功能,自行设计引物,通过PCR扩增的方法,获得VP2全基因,克隆到pMD18-T载体中进行测序,然后亚克隆到pET30a(+)表达载体中,构建并筛选出阳性重组子,标记为pET30a-VP2。将阳性重组质粒转化进RosettaTM宿主菌中,通过改变IPTG浓度、诱导温度和诱导时间,使重组蛋白获得表达,并确定最佳诱导条件为:IPTG终浓度1.0 mmol/L、诱导温度37℃、诱导时间为3~4 h。经SDS-PAGE和Western-blotting分析表明该重组蛋白相对分子量约为68 ku,具有良好的免疫学活性。     

一株鸭大肠杆菌的分离鉴定及致病性分析

广西省某种鸭场40余日龄的鸭群发病,从病死鸭脑部分离到一株革兰阴性杆菌,经分离纯培养、革兰染色镜检、PCR分子生物学鉴定、血清型鉴定,确定是血清型为O154的鸭大肠杆菌;致病性试验显示,该分离菌对小鼠具有较强的致病性。药物敏感试验结果表明,该菌对替米考星、氧氟沙星、新霉素3种药物产生了耐药性,对头孢曲松、丁胺卡那等7种药物敏感。