大肠杆菌K99-ST1双价基因工程菌株的构建及其免疫原性

为了有效预防肠毒素性大肠杆菌引起的犊牛和羔羊腹泻,利用基因工程技术构建了融合基因K99-ST1及其原核表达载体,并时融合蛋白进行了初步免疫原性分析.结果显示,将PCR获得的K99菌毛抗原基因和人工合成的ST1基因片段借助pUCm-T载体,成功构建重组质粒pUCm-K99-ST1,从而获得融合基因K99-ST1;使用EcoRⅠ+SalⅠ双酶切将该融合基因定向插入表达载体pET30a中,成功构建表达载体pET-K99-ST1;将该表达载体转入表达菌株BL21(DE3)中,经IPTG诱导得到大小约31 000的蛋白;Western blotting显示,融合蛋白可以特异的与K99阳性血清反应;将BL21(DE3,pET-K99-ST1)诱导表达后免疫兔,ELISA检测K99抗体水平较高,乳鼠灌胃试验显示该菌株免疫后产生ST1抗体.这表明本试验已成功构建大肠杆菌K99-ST1双价基因工程菌株BL21(DE3,pET-K99-ST1),该菌株具有良好的免疫原性,为大肠杆菌K99-ST1双价基因工程疫苗开发奠定了基础.     

PRV、PCV-2、PPV多重PCR检测方法的建立及其应用

根据GenBank上已发表的猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)核苷酸序列,设计并合成能分别特异性扩增PRV、PCV-2、PPV的引物。经条件优化,建立了同时检测PRV、PCV-2、PPV的多重PCR方法,所扩增特异性产物片段大小分别为217bp、394bp、748bp。该方法不仅特异性强、敏感性高,还克服了对上述病原分别进行检测所带来的诸多弊端,为猪伪狂犬病、猪Ⅱ型圆环病、猪细小病的临床诊断和流行病学调查等研究提供了新手段。     

新城疫病毒SDWF2003株F基因的克隆与分子特征分析

将新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）SDWF2003株经10日龄SPF鸡胚增殖后,提取病毒基因组RNA,并以此为模板,RT-PCR扩增获得与F基因预期大小一致的DNA片段,亚克隆到pMD18-T载体并酶切鉴定正确后进行测序。软件分析显示：基因全长1662bp,编码553个氨基酸,裂解住点为^112R-R-Q-K-R-F^117,是典型强毒株氨基酸序列结构;此分离毒株属于基因Ⅶ型,该型F蛋白第101位、第121位特征性氨基酸残基分别是K（赖氨酸）和V（缬氨酸）,而本研究分离病毒F蛋白第101位、第121位分别是Q（谷氨酰胺）和V（缬氨酸）;同源性比较,与LaSota、F48E9、Ch99核苷酸同源性分别为84．4％、87．1％、98．9％,氨基酸同源性分别为88．3％、91．7％、98．4％。     

杉木种子园产量构成分析

以浙江横畈1. 5代杉木种子园为背景材料,对个体结实动态,群体结构与产量关系,球果经济性状和生态因素的影响进行了观察与分析。同时,概括出产量( P )的构成要素:即种植密度( d )、单株球果数( n )、果重( W )和出籽率( S ),并提出经验计算公式:P = d ( 100n W ) S 。1995年10年生杉木种子园获得种子243kg hm- 2 ,其群体结构是525株 hm- 2, 树冠郁闭度0. 6,单株结实量661. 9个,出籽率6. 2% 。     

CSFV和PRRSV双重RT-PCR检测方法的建立及其应用

为建立一种能够同时快速诊断猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)2种传染病的方法,根据GenBank上已发表的猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核苷酸序列,分别设计并合成2对能特异性扩增CSFV、PRRSV的引物,经过条件优化后,建立了检测CSFV、PRRSV的双重RT-PCR方法,扩增2种病毒的片段,大小分别为508bp和432bp.试验证明,该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,简便、快速、高效,为CSFV与PRRSV的快速诊断及进一步的CSFV与PRRSV的流行病学研究提供了重要的技术支持.     

PRV、PPV双重PCR检测方法的建立及其应用

为建立一种能够快速诊断猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的方法,根据GenBank上发表的PRV、PPV核苷酸序列分别设计并合成了两对能特异性扩增PRV、PPV的引物,经过条件优化后,建立检测PRV、PPV的双重PCR方法,扩增两种病毒的片段分别为570bp、748bp。试验证明,该方法具有良好的特异性和敏感性,省时、省力、快速、敏感、高效的特点,为PRV与PPV的快速诊断试剂盒组装及流行病学的研究提供了技术支持。     

蜂胶：蜂胶疫苗的应用

蜂胶，是蜜蜂群体的一种副产物，是一种有较强粘性的固体状、棕黑色、有芳香气味的物质，是蜜蜂从树木的新生枝芽处采集胶状物，经过其上颚腺、蜡腺分泌物反复加工而成的胶状物质。蜜蜂将它贮存于蜂箱里的缝隙处，或涂抹到蜂箱的出入口处，是为了繁殖后代生存的需要。主要用来抵御病害、清洁巢房和预防寒气侵袭。蜂胶是一种纯天然的广谱抗菌素。它含有树脂、蜂蜡、芳香抽、花粉及黄酮类的物质。     

灰色残差GM (1 , 1)模型在大气二氧化硫预测中的应用

应用灰色GM (1 , 1)模式理论与方法, 建立了临安市大气二氧化硫质量浓度的灰色残差预测方程x (t +1) =-0.107 432 e-0.095 872 t +0.123 917 , 并进行了预测。预测结果与实测值的相对误差绝对值介于0.56 %～ 14.51 %之间, 预测结果后验比与小误差概率分别为0.280 2 和1.0 。表明模型与实测值拟合程度好, 达到了较高精度。表3 参10     

关于序贯抽样检验

利用Wald 的序贯概率比检验中接收产品时对应的批检验数:n1 ＊(0 , c11), n2 ＊(1 , c12),, nk ＊(k -1 , c1k), , 设计出一种改进型序贯检验(其中当c1t s 时(t =1 , , s), 取c1t ＊=c1t ;当c1t s 时, 取c1t＊ =s):n1＊(0 , c11), n2 ＊(1 , c12＊), , ns ＊(s -1 , s)。证明了当次品率较小(p p0)时, 改进型序贯检验的平均抽检个数N ＊(p)与序贯概率比检验的N(p)比较接近, 但抽检周期要小得多。表1 参6