异体颗粒细胞线粒体移植对牛孤雌激活胚胎发育的影响

为了探讨线粒体对孤雌激活胚胎发育潜能的影响,比较了异体颗粒细胞线粒体移植的牛孤雌激活胚胎、胚胎培养液移植的孤雌激活胚胎和正常孤雌激活胚胎的发育情况。结果表明,异体颗粒细胞线粒体移植组和胚胎培养液移植组的牛孤雌激活胚胎的激活率差异不显著(P>0.05),但均显著低于正常激活组(P<0.05);异体颗粒细胞线粒体移植组与正常激活组的孤雌激活胚胎卵裂率差异不显著(P>0.05),但均明显高于胚胎培养液移植组(P<0.05);异体颗粒细胞线粒体移植组的孤雌激活胚胎桑椹胚率极显著高于胚胎培养液移植组和正常激活组(P<0.01)。可见牛异体颗粒细胞线粒体移植可改善牛孤雌激活胚的发育。     

哺乳动物胚胎干细胞相关细胞因子研究进展

影响哺乳动物胚胎干细胞克隆的细胞因子可分为分化抑制因子和生长因子两大类。分化抑制因子包括白血病抑制因子 (LIF)、腺病毒E1A样激动剂A等。生长因子包括碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、表皮生长因子 (EGF)、干细胞因子 (SCF)、胰岛素样生长因子 - 1(IGF - 1)、forskolin等。本文对其研究进行了综述     

从原始生殖细胞中分离克隆胚胎干细胞的研究

作者探讨了从原始生殖细胞（PGCs）中分离克隆胚胎干细胞的优势、用于分离克隆胚胎干细胞的PGCs获取方法及其向胚胎干细胞转化的能力。     

牛Klf4基因重组反转录病毒载体的构建及产毒细胞株的建立

为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo构成真核表达载体pMSCV-Klf4;采用脂质体法将pMSCV-Klf4转染包装细胞PT67,通过G418筛选得到稳定的产毒细胞株,电镜观察培养液上清中的病毒颗粒,同时病毒感染NIH3T3细胞测定其病毒滴度。结果表明,本研究克隆的牛Klf4基因开放阅读框序列与已发表序列(NM-001105385)比对有99.9%的高同源性;构建的重组载体质粒可正常包装,电镜下可观察到典型的病毒颗粒,筛选出的产毒细胞株病毒滴度达7.16×107CFU·mL-1。本研究成功构建的真核表达载体pMSCV-Klf4和得到的产毒细胞株,为进一步开展有关牛iPS细胞的研究奠定了基础。     

组织块法分离山羊表皮干细胞研究

采用组织块法从山羊耳部皮肤基底层分离表皮干细胞,并通过形态学观察、免疫组化染色以及克隆形成率等方法检测山羊表皮干细胞在DMEM/F12和F12两种不同培养体系中的体外生长特性。结果表明,DMEM/F12是一种适合表皮干细胞体外增殖培养的培养基,在此培养体系中细胞可传代至11代。     

不同添加物对分离昆明系小鼠胚胎干细胞的影响

以昆明系小鼠(Mus musculus Km)胚胎为材料,以丝裂霉素(10 μg/mL)处理的MEF为饲养层,研究了在胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)培养液中分别添加血清替代物(knockout serum replacement,KSR)、胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)和FBS PD98059(50 μgol/L)对昆明系小鼠胚胎贴壁、内细胞团(inner cell mass,ICM)集落形成及ESCs分离培养的影响.结果表明,在ESCs培养液中添加KSR,胚胎贴壁率显著低于添加FBS(P<0.05),ICM集落形成率和1代ESCs集落出现率差异不显著(P>0.05),2～5代ESCs集落出现率显著高于添加FBS(P<0.05),2株ESCs传到7代;在ESCs培养液中添加FBS PD98059,胚胎贴壁率、ICM集落形成率和1～5代ESCs集落出现率均显著低于添加KSR或FBS(P<0.05);用0.5 g/L胰酶 0.2 g/L EDTA离散消化ICM细胞和ESCs并结合机械分割,1～5代ESCs集落出现率显著高于用2.5 g/L胰酶 0.2 g/LEDTA(P<0.05).实验结果表明,在ESCs培养液中添加KSR,较添加FBS或FBS PD98059更适合用于分离培养昆明系mESCs,用0.5 g/L胰酶 0.2 g/L EDTA离散消化ICM细胞和ESCs并结合机械分割优于用2.5 g/L胰酶 0.2 g/L EDTA.     

山羊毛囊干细胞分离、培养及鉴定

采用2．4U／mLDispase酶消化和机械切割法分离毛囊隆突部,经胰酶（0．5mg／mL胰酶＋0．2mg／mLEDTA）消化从山羊耳部皮肤分离得到毛囊干细胞,用自制无血清培养基培养,并用形态学观察、细胞生长曲线、克隆形成率及免疫组化染色检测,探讨毛囊干细胞体外分离培养方法及生物学特性。结果表明,所分离细胞具备毛囊干细胞特征：体积较小、表面光滑、立体感强,呈现未分化细胞特征;K19、integrin-β1以及p63免疫组化染色阳性;第3、5、7代干细胞克隆形成率分别为25．6％&#177;2．6％、31．8％&#177;1．9％和27．0％&#177;3．9％,极显著高于对照组角质细胞克隆形成率（P〈0．01）。采用配制的无血清条件培养液可使山羊毛囊干细胞体外维持未分化状态并传代至19代。     

牛超排技术的研究

用４组药物组合：（１）ＰＭＳＧ＋ＰＧＦ２ａ；（２）ＰＭＳＧ＋ＰＧＦ２ａ＋激光照射；（３）ＦＳＨ＋ＰＧＦ２ａ；（４）ＦＳＨ＋Ｃｔｏｐｒｏｓｔｅｎｏｌ，超排处理３２２头次供体牛。共采卵１６６３枚（头均５．８１±４．６８），可用胚胎９８０枚（头均３．４３±３．９４，占５８．９％）。（３）、（４）两组胚胎可用率及可用胚胎数高于（１）、（２）组（ｐ＜０．０５）；黄牛胚胎可用率高于奶牛（ｐ＜０．０１）；育成牛胚胎可用率高于经产牛（ｐ＜０．０１）；供体牛前两次超排效果更好（ｐ＜０．０５）。     

胚胎移植技术的现状与展望

统计与分析了1991－2000年国际胚胎移植状况，结果表明胚胎移植已成为畜牧产业中最活跃的领域之一，胚移比例最大的依然是牛，其它各类的动物胚胎移植，如：绵羊、山羊、猪、马、鹿、美洲驼、羚羊等，也十分活跃。牛的胚胎移植，有几个重要指标分析结果如下：（1）供体牛的品种分布基本相同，肉牛与奶牛所占比例接近，但不同国家之间差别很大；（2）每头供体所得可用胚数在5－6枚之间；（3）鲜胚移植与冻胚移植的比例基本持平，但近年来冻胚移植的比例稍大于鲜胚移植；（4）通过IVF体外方式生产胚胎数目有所增长，目前每年大约在3－4万枚；（5）妊娠率、鲜胚移植妊娠率在60％以上，冻胚移植妊娠率在50％以上，IVF体外方式生产胚胎妊娠率在40％左右；（6）胚胎移植技术的发展状况在全世界分布不均衡，北美和欧洲胚移技术最成熟；（7）胚胎贸易有所增长。最后，对该技术存在的问题与发展前景提出了探讨和展望。     

PMSG不同剂量对小鼠超排效果的影响

小鼠分别用PMSG，5IU、10IU、15IU3种剂量注射，48h后每只注射HCG10IU并合笼，次日早检栓，3．5d后冲胚。见检率为83．3％（60／72）。冲胚结果：5IU组平均每只鼠20．40（408．20）枚；10IU组平均32．00（640／20）枚；15IU组平均21．80（436／20）枚。经过方差分析，差异显著（0．01＞P＜0．05）。