粪尿类固醇激素检测在野生动物繁殖研究中的应用

应用各种分析手段 ,采集动物血样来测定血液类固醇激素的方法已广泛的应用于检测家畜繁殖机能 ,然而 ,对驯化程度低或处于自然野生状态下的野生动物进行采血是困难的 ,持续捕捉和静脉穿刺对动物来说是一种较强的不利应激 ,会影响动物的生理状态 ,进而影响动物的繁殖机能。近年来 ,以动物粪、尿中类固醇激素测定来监测野生动物生殖状态的方法已被广泛重视。粪、尿类固醇激素测定作为一种非侵害性的方法 ,在自然状态下监测野生动物生殖内分泌状态 ,具有简单、准确的优点。通过对野生动物粪、尿类固醇激素测定 ,能够监测动物的各种不同的繁殖状…     

山羊骨髓间充质干细胞生物学性能鉴定及诱导分化为心肌细胞的研究

研究了关中奶山羊骨髓间充质干细胞的分离、培养和生物学特性,并在体外诱导分化为心肌细胞表型。结果表明,山羊MSCs具有很好增殖能力;能够耐受反复冷冻和解冻;表达细胞表面标志CD44、CD105、CD166,弱表达CD34、CD106,而不表达CD14、CD45。该类细胞用5-氮胞苷诱导分化后,能够表达心肌α-actin,并呈PAS染色阳性。     

应用Spindle-view观察哺乳动物成熟卵的纺缍体

应用Spindle—view对体外成熟培养20、22、24和26h的牛卵母细胞减数分裂纺锤体进行了观察；同时也对小鼠、家兔、山羊和猪等动物成熟卵母细胞的减数分裂纺缍体进行了观察。结果表明①在20-26h之间利用Spindle-view得到的牛卵纺锤体影像与极体的相对位置没有明显的变化；②纺锤体成像是否清晰可用于牛卵母细胞的质量监控；③Spindle—view适合于牛、家兔、小鼠和山羊成熟卵母细胞减数分裂纺缍体的观察。     

山羊骨髓MSCs体外向成骨细胞诱导和分化

以关中奶山羊骨髓间充质干细胞（MSCs）为对象，研究了体外诱导山羊MSCs向成骨细胞的分化。结果表明，山羊MSCs在地塞米松、β-磷酸甘油和抗坏血酸的作用下，从诱导的第4~5天开始，即可见有些MSCs体积逐渐增大，由梭形或多角形转变为立方形或卵圆形；随着诱导时间延长，立方形或卵圆形细胞不断增多，到第15天时，有较多的立方形细胞，且这种变化经历了从立方形向卵圆形转变的过程；第25天，可见卵圆形和方形细胞堆积，诱导分化率为90.2% ± 2.97%。说明其被诱导分化为成骨细胞表型，该类细胞呈茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色阳性。从而证明了山羊骨髓MSCs具有体外分化为成骨细胞的潜能，从而为利用该类细胞作为实验模型研究骨骼缺损修复等提供了科学依据。     

波尔山羊卵母细胞和早期胚胎的端粒酶活性

利用端粒重复序列扩增（TRAP）法进行了山羊卵母细胞和附植前胚胎的端粒酶活性的测定;结果表明,山羊卵母细胞和早期胚胎的端粒酶活性都为阳性.TPG定量比较发现,卵母细胞的TPG最低,为25.348U;4-细胞的TPG为273.832U,至8一细胞时,TPG又降低到56.117U,随后快速升高,桑椹胚的TPG为251.111U;囊胚的端粒酶活性最高,TPG为519.46U.     

不同浓度的IGF-1对山羊毛囊干细胞体外培养的影响

采用2.4 U/mL Dispase酶消化和机械切割法分离毛囊隆突部,经胰酶（0.5 mg/mL胰酶+0.2 mg/mL EDTA）消化,从山羊耳部皮肤分离得到毛囊干细胞,并检测了不同浓度的IGF-1对山羊毛囊干细胞体外培养的作用。结果表明,IGF-1对毛囊干细胞体外培养作用很明显,并且最适IGF-1浓度是10 ng/mL。     

山羊角膜内皮细胞的分离培养与鉴定

摘要：比较四种原代角膜内皮细胞分离培养方法,并对分离培养的山羊角膜内皮细胞生长特性进行初步研究。取屠宰1～2月龄关中奶山羊角膜,无菌分离角膜内皮层和Descemet’s membrane,分别用组织块法、胰蛋白酶法、dispase法和dispase加胰蛋白酶法分离培养原代角膜内皮细胞,比较这四种方法处理后细胞离散和贴壁情况。结果显示,dispase加胰蛋白酶法为最佳分离纯化角膜内皮细胞的方法。分离的细胞经形态学观察、免疫组化染色、Giemsa染色、扫描电镜和透射电镜等方法鉴定为角膜内皮细胞。说明dispase加胰蛋白酶法为角膜内皮细胞分离培养的理想方法,该方法可为哺乳动物角膜内皮细胞的理论研究和构建组织工程化人工角膜内皮提供种子细胞。     

电融合化学激活前培养时间对绵羊重构胚发育的影响

采用绵羊（Bos gaurus）体细胞带下注入体外成熟的卵母细胞构建重构胚,比较了不同的融合和化学激活前培养时间对重构胚融合和发育的影响。融合前培养 1h,比较不同的激活前培养时间,发现各组重构胚卵裂率、桑椹胚率和囊胚率均无显著差异（P>0.05）,但激活前培养2h胚胎完整率(95.81%)高于对照（74.64%）,差异显著（P<0.05）;激活前培养2 h,比较不同的融合前培养时间,发现两组融合率,激活胚胎完整率和囊胚率无显著差异（P>0.05）,但融合前培养1h的卵裂率（76.88%）和桑椹胚率（40.63%）显著高于直接融合（64.48%和21.50%）（P<0.05）。利用G1和G2培养早期克隆胚胎,将发育至桑椹胚囊胚的胚胎移植到41只受体绵羊,仅1只妊娠但于第104天流产。用5对绵羊微卫星DNA多态性引物对该克隆流产胎儿皮肤成纤维细胞、供体细胞、受体绵羊及一只普通对照母绵羊皮肤成纤维细胞进行微卫星DNA分析,结果表明5对微卫星DNA引物扩增各组细胞DNA, 扩增产物经过10%琼脂糖凝胶电泳和银染后,条带均有明显的多态性。条带分析显示,克隆流产胎儿的微卫星DNA指纹与供体细胞完全相同,而不同于其受体母亲和对照绵羊。证明该流产羔羊基因来源于供体细胞,为体细胞克隆绵羊。